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TPNUM1

Ce document décrit la préparation de milieux de culture et de colorants pour l'observation microscopique de champignons. Il présente les étapes pour préparer le milieu PDA (pommes de terre, dextrose, agar) ainsi que la mise en culture de levures.

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Ce document décrit la préparation de milieux de culture et de colorants pour l'observation microscopique de champignons. Il présente les étapes pour préparer le milieu PDA (pommes de terre, dextrose, agar) ainsi que la mise en culture de levures.

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TP n°1 : Préparation des milieux de cultures et des


colorants d’observationmicroscopique des champignons
intro
Les champignons sont des végétaux sans chlorophylle. Le thalle, appareil végétatif,
estsouvent constitué de très fins filaments ramifiés (hyphes). L'ensemble de ces hyphes forme
lemycélium. Il est parfois suffisamment dense pour se voir c'est le "blanc de champignon"
enfait du blanc au brun presque noir. Chez les Myxomycètes (les plus inférieurs) le thalle
estamiboïde c'est à dire qu'il peut se déplacer. Du fait qu'ils n'ont pas de chlorophylle
leschampignons sont obligés de se procurer le carbone dont ils ont besoin dans des
substancesorganiques mortes (saprophytes) ou vivantes (parasites)

Le but de tp

Matériels et méthode :

 
.
 1-Les milieux de cultures :
La préparation des milieux de culture varie à l’infini. On peut diviser ces milieux en deuxcatégories :
*Les milieux dits complexes : sans composition bien définie (PDA, MEA, YSA, MYEA,SGA…).
*Les milieux synthétiques de composition déterminée (CDA…)
 
PDA (Potatoes Dextrose Agar)-
 
-Pomme de terre 200 g
-Eau distillée 700 ml
Laver, couper en morceaux les pommes de terre, les faire cuir, ensuite filtrer et ajouter les ingrédients
suivants :-
 
-Succrose 20 g-
 -Agar 15 g
Puis ajuster la quantité d’eau à 1000 ml par l’eau distillée. Autoclaver  pendant 20min à 120°C et conserver pour
l’emploi ultérieurement.
Mise en culture : « la levure »

 Mélanger 1 g de levure de boulanger avec 100 mL d'eautiède et 1 g de sucre. Bien agiter et


prélever sur lechamp 1 goutte de cette suspension de levures (dans laquelle il y a tout de
même la bagatelle de quelques millions de cellules). Mettre la goutte dans 1 litre d'eau.Bien
agiter.

 Avec un compte goutte, prélever un échantillon. Ouvrir la boîte contenant le milieu et toucher
la surface du milieu avec l'extrémité du compte-gouttes en une dizaine d'endroits différents.
Refermer le couvercle. Abandonner la boîte à température ambiante.

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