Université A.
MIRA de Béjaia
Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie
Département de Microbiologie
Préparation d’une solution tampon phosphate.
I]- Objectifs :
- Savoir utiliser l’équation d’Henderson-Hasselbalch pour la préparation d’une
solution tampon à un pH donné.
- Connaître le fonctionnement d’un pH-mètre.
- Vérifier le pouvoir tampon d’une solution tampon.
II]- Définition :
Une solution tampon est un mélange d’acide faible ou de base faible avec son
sel (base conjuguée ou acide conjugué respectivement). C’est une solution dont la
composition est telle que sonpH varie peu ou pas,soit par addition de petites quantités
d’acide fort ou de base forte, soit par dilution.
L’équation d’Henderson-Hasselbalch peut être utilisée pour vérifier si une
solution constituée d’un couple acido-basique présente un effet tampon :
III]- Utilisation de l’équation d’Henderson-Hasselbalch :
Pour préparer 100 ml de tampon phosphate 0,05 M à pH 7 à partir de K 2HPO4. 3H2O
(228,23 g.mol-1) et de KH2PO4 (136,09 g.mol-1), calculer les masses des sels à
dissoudre afin de préparer la solution tampon souhaitée (pKa= 7,2 à 25°C).
IV]- Mode opératoire :
a)-Peser précisément les masses des deux sels en utilisant une spatule propre et sèche.
Pour cela peser chaque sel dans du papier aluminium préalablement taré.
b)-Dans un bécher ou un erlenmeyer de 250 ml contenant 50 ml d’eau distillée,
introduire les deux sels tout en rinçant les restes sur le papier aluminium (avec la
pissette d’eau distillée) dans le récipient.
c)- Introduire un barreau magnétique dans le récipient et mettre sous agitation sur une
plaque agitatrice jusqu’à ce que les deux sels soient complètement dissous.
d)-Transvaser le contenu du récipient dans une fiole jaugée de 100 ml ou une
éprouvette et ajuster avec de l’eau distillée jusqu’à atteindre 100 ml.
e)- Faire une dernière agitation afin d’homogénéiser la solution.
f)-Après que l’enseignante ait expliqué l’étalonnage du pH-mètre avec les solutions
tampons standards et son fonctionnement, procéder à la mesure du pH et de la
température de la solution tampon.
Que concluez-vous ?
V]- Pouvoir tampon :
Vous allez montrer expérimentalement que le pH du tampon phosphate variera peu ou
pas suite à une dilution ou un ajout d’un acide fort ou d’une base forte.
1. Influence de la dilution :
- Mettre 50 ml de la solution tampon préparée dans le bécher ou l’erlenmeyer de
départ et réaliser une dilution au ½ avec de l’eau distillée.
- Après agitation, mesurer le pH de la solution, que concluez-vous ?
2. Influence de l’ajout d’un acide fort :
- Dans un bécher de 50 ml, mettre 20 ml de la solution tampon puis à l’aide d’une
micropipette, ajouter 1 ml de solution 0,1 M d’acide chlorhydrique.
- Après agitation, mesurer le pH de la solution, que concluez-vous ?
3. Influence de l’ajout d’une base forte :
- Dans un bécher de 50 ml, mettre 20 ml de la solution tampon puis à l’aide d’une
micropipette, ajouter 1 ml de solution 0,1 M de soude.
- Après agitation, mesurer le pH de la solution, que concluez-vous ?
