• Principe gel filtration
La chromatographie par filtration sur gel dite aussi chromatographie d'exclusion - diffusion, est une technique
qui permet une séparation simple et rapide des molécules solubles dans l'eau ou certains solvants
organiques, en fonction de leur taille, donc de leur masse molaire
Un gel est constitué par un empilement de grains poreux. Le grain est formé par l'enchevêtrement de
macromolécules linéaires reliées entre elles par voie chimique de façon à former un réseau à trois
dimensions aux mailles plus ou moins serrées selon le degré de réticulation. De nombreux gels sont
maintenant disponibles, les gels de dextranes, les gels de polyacrylamide, les gels d'agarose... ils sont
choisis en fonction des contraintes expérimentales.
Chaque gel est caractérisé par un domaine de fractionnement qui est fonction de la grosseur des mailles du
réseau et donc de la réticulation. Au-dessus d'un poids moléculaire donné appelé "limite d'exclusion", toutes
les molécules sont traitées par le gel de la même façon, il n'y a plus chromatographie.
• Rechercher 3 exemples d'enzymes utilisées dans le milieu industrielle : rôle dans le
processus de fabrication à connaître
Nom enzyme Type d’industrie Rôle dans le processus de
fabrication à connaître
Protéases excrétées par les Détergents biologiques Pré-trempage et applications
bactéries liquides directes pour enlever les
taches des vêtements d'origine
protéique
Cellulases et ligninases Industrie du carburant biologique Hydrolyse de la cellulose dans les
sucres fermentables lors de la
production d'éthanol à partir de la
cellulose.
Récupération des résidus de
lignine.
Amylases Industrie de l'amidon Convertissent l'amidon en glucose
et différents sirops.
Convertit le glucose en fructose
pour produire des sirops à partir
de féculents. Ces sirops ont des
propriétés adoucissantes et des
valeurs calorifiques plus basses
que le saccharose pour le même
niveau de douceur.
• - Méthode d' immobilisation
Rétention mécanique d’enzymes dans une région de l’espace avec maintien de l’activité catalytique pour
une utilisation répétée ou continue.
L’immobilisation des enzymes induira une catalyse hétérogène.
• Savoir schématiser les différentes méthodes d'immobilisation d'enzyme
• Savoir décrire en 1 ou 2 phrases les méthodes d'immobilisation + Pouvoir citer pour chaque
méthode : ses avantages et inconvénients
Méthode Sous nom Description Avantages Inconvénients
Fibres Inclusion dans la membrane de
Confinement
creuses fibres creuses
Sans
liaisons Inclusion dans un gel en bille
Gels Facile à préparer
covalent Régénération difficile
grande stabilité
entre Inclusion dans des nœuds de de l’enzyme
enzyme et Inclusion Fibres
fibres
support
Inclusion dans une membrane
Encapsulation
(capsule) de rétention
Préparation difficile,
Rétention forte de
Fixation Fixation de l’enzyme par une régénération
l’enzyme, stabilité
covalente liaison covalente sur un support impossible, coût
grande
important
Les enzymes
sont retenues à
la surface d’un
support insoluble Très grande facilité Risque important de
de mise en œuvre
par établissement désorption
Possibilité de
d’interactions Problèmes stériques
Adsorption régénérer le support
Avec Avec support secondaires Mauvaise orientation
par désorption et
liaisons préexistant de l’enzyme : perte
entre les groupes remplacement de
covalent d’activité
Fixation non fonctionnels de l’enzyme
entre
covalente l’enzyme et du
enzyme et
support support.
Ionique
Liaison
métallique
Sans support
Réticulation
préexistant
Inclusion : Les enzymes sont retenues à l’intérieur d’une matrice poreuse
