Université d’Oran,

Faculté de médecine d’Oran,

Département de médecine

Part 1 .Le sang, les organes hématopoïétiques,

hématopoïèse.
Part 2 .Le sang, hématimétrie, explorations.
Objectifs : Rappels et définitions, pré-requis pour le module hématologie.

Pr Hadj TOUHAMI, chef de service Hématologie,

CHU Oran
Année Universitaire 2014-2015
1 er module : 1 Mars 2015.
Part 1 .Le sang, les organes hématopoïétiques, hématopoïèse
1. Principales fonctions du sang, (Transport, régulation, protection et
identité biologique)
2. Les principaux constituants et propriétés physiques du sang
3. La masse sanguine (Volémie)
4. Les organes hématopoïétiques
4.1. La moelle osseuse
4.2. Le thymus
4.3. Les organes lymphoïdes
4.3.1. Les organes lymphoides primaires (Centraux) = moelle + thymus.
4.3.2. Les organes lymphoides secondaires (Périphériques) = les ganglions,
la rate, le tissu lymphoïdes associé aux muqueuses
5. Hématopoïèse
5.1. Définition
5.2. Ontogénèse
5.3. Les cellules souches multipotentes,
5.3.1. Propriétés
5.3.2. Mise en évidence des CSM.
5.4. Les progéniteurs,
5.5. Les précurseurs,
5.5.1. Lignées érythroblastique,
5.5.2. Lignée granuleuse,
5.5.3. Lignée mégacaryocytaire, thrombopoïèse,
5.5.4. Le système lymphoide,
5.5.5. Le système des Phagocytes mononucléés.
 Principales fonctions du sang

•Transport :
d’oxygène et de nutriments
•Provenance des poumons et du système digestif
de déchets
•Vers poumons (CO2) et reins (déchets azotés)
d’hormones
•Des glandes endocrines vers organes cibles
•Régulation :
Maintien de la température corporelle
•Absorption, répartition et dissipation de chaleur
Maintien du pH dans les tissus
•Protéines servant de tampon (albumine)
Maintien d’un volume adéquat de liquide
•Protection :
Prévention de l’hémorragie
•Plaquettes et protéines sanguines
Prévention de l’infection Anticorps,
protéines du complément, leucocytes .
• Identité biologique AG sur lea membrane érythrocytaire
 Les éléments figurés du sang
•Hématies = GR = érythrocytes = 120 j Production = 200 milliards/j

•Polynucléaire Neutrophiles = PN = 1 - 3 j Production = 50 milliards/j

•Monocytes = quelques mois

•Lymphocytes = mois à plusieurs années

•Plaquettes = 7 – 10 j Production = 100 milliards/j

•leur nombre varie en fonction de l’âge (nouveau né, nourrisson et l’adulte).

 Volume sanguin total = VST = Volume globulaire/ hématocrite

VST = 75 ml/kg chez l’homme

66ml/kg chez la femme.
Le Volume globulaire VG < ou = 36 ml/kg chez l’homme,
< ou = 32ml/kg chez la femme.

Sang total , CENTRIFUGATION = Plasma, COAGULATION = Sérum

SANG TOTAL PLASMA+ GR CAILLOT + SERUM

LE SANG : liquide complexe LE PLASMA, contenant des CELLULES:
Globule Rouge = GR = Erythrocyte = Hématie→ transport O2 et CO2,
Globule Blanc = GB = Granuleux, Lymphocytes, Monocytes → Défenses,
Plaquettes = Plaq. = Thrombocyte → Hémostase.
LE PLASMA : eau + Sels minéraux + vitamines + pigments + glucides + lipides
+ protéines…
LE SERUM : après coagulation, le plasma dépourvu de fibrinogène
constitue le sérum.

Eau 92%
Protéines 6-8%
Minéraux 0,8%
Lipides 0,6%
Glucoses 0,1%
Les éléments figurés du sang

Technique du frottis de sang

 Définition de l’hématopoïèse

c’est l'ensemble des mécanismes qui assurent la fabrication et le remplacement

continu et régulé des différentes cellules sanguines.
C’est le résultat d’un processus de multiplication, différenciation progressifs et de
maturation dans un micro environnement spécifique et des mécanismes
moléculaires de contrôle.

Les cellules souches

 Les cellules souches multipotentes que l’on retrouve dans la moelle

osseuse et dans le sang circulant, qui se multiplient se différencient en cellules
sanguines et immunes que sont les globules blancs, les globules rouges, les
plaquettes, les lymphocytes, les cellules dendritiques des tissus lymphoïdes et
de la peau (cellules de Langerhans), les macrophages spécialisés de tous types
et les mastocytes.
Ontogénèse de l’hématopoïèse Le microenvironnement où a lieu l’hématopoïèse
Après la naissance, l’hématopoïèse normale a lieu dans la moelle osseuse.

• Les cellules souches multipotentes peuvent être à l’origine de toutes les lignées
hématopoïétiques.

• Les cellules souches ne sont pas identifiables morphologiquement.

• Les cellules souches possèdent le marqueur immunologique CD34.

• Les cellules souches conservent leur capacité de reconstitution de l’hématopoïèse

après congélation à - 196°.

• Les progéniteurs sont explorés par des techniques de culture cellulaire : forment des
colonies en milieu semi solide. Différenciation limité à 1 ou 2 lignées. Phénotype
CD34+ CD38+ CD33+ DR+.

• Les précurseurs sont les premières cellules morphologiquement identifiables de

chaque lignée.

• Les précurseurs sont explorés par le myélogramme et la biopsie ostéo-médullaire.

Cultures cellulaires = CS + Progéniteurs
 Auto-renouvellement
Cellules CSH
Cellules souches quiescentes
multipotentes
(0.003%) Multipotence

progéniteur commun
myéloide
Progéniteurs: Cellules progéniteur
Cellules prolifératives commun
CFU-GEMM
multipotentes lymphoide

CFU-E CFU-Meg
Précurseurs: myélocytes
granulocyte myélocytes eosinophiliques
cellules engagées monocyte basophiliques
CFU-GM

Cellules
différentiées cellule T cellule B
globules mégakaryocytes neutrophiles eosinophiles
basophiles
rouges monocytes/
macrophages
Culture long terme

Culture progéniteurs

B
I
M O
P
Y S
É I
E
L
O O
G S
T
R E
A O
M
M E
M D
U
E L
L
A
I
R
E

Hémogramme
Frottis sang
ERYTHROPOIESE - 1

CFU-E

BFU-E

CFU-GEMM Réticulocyte

CFU-S CD34 Globule rouge

ERYTHROPOIESE -2
CFU-S CFU-GEMM

BFU-E CFU-E PRO-Eryt. E.B. [Link]. [Link]. RETIC. GR.

MULTIPLICATION & MATURATION MATURATION

MOELLE OSSEUSE = CENTRE SANG =

PERIPHERIE

Culture MYELOGRAMME BLEU FROTIS

cellulaire coloration M.G.G. CRESYL M.G.G.

24 h + 24 h

RETIC. = «fond d’œil »

BFU-E Burst Forming Unit apparaissent les premières en culture, sont
peu sensibles à l’Erythropoïètine = EPO. Les Colony forming Unit-E CFU-
E sont plus tardives et sont plus sensible à l’EPO.

Régulation : l’EPO transforme en fonction des besoins de l’organisme les

cellules souches déterminées en proérythroblastes. L’EPO participe au
contrôle de la synthèse de l’hémoglobine. L’EPO est produite par le rein
et par le foie.
Les androgènes et la thyroxine participent à la régulation de
l’érythropoïèse.

Facteurs nécessaires : fer, cobalt, acide folique, vitamine B12, vitamines

E, B6, B1 et C. Les acides aminés sont nécessaires à la synthèse de la
globine.
Exploration : Hémogramme complet, réticulocytes, myélogramme, biopsie
médullaire, ferritinémie, la coloration de Perls, bilirubine, test de Coombs,
éléctrophorèse de l’hémoglobine, cytomlétrie en flux, enzymes
érythrocytaires
Granulopoïèse
Régulation plusieurs facteurs sont stimulant : G-CSF, GM-CSF, IL3, IL1, IL6,
d’autres sont inhibiteurs : interférons.

Exploration :

 numération des PN, leur morphologie sur frottis, myélogramme, cytochimie,

score des phosphatases alcalines leucocytaires, biopsie ostéomédullaire.
étude fonctionnelle des cellules souches granuleuses par culture de moelle in
vitro.
 Identification et étude de la différenciation cellulaire à l’aide d’anticorps
monoclonaux en cytométrie de flux.
Cytogénétique et biologie moléculaire sont très utiles pour certains diagnostic
et le suivi des maladies.
 Etude de la mobilité des PN en contraste de phase. Etude du chimiotactisme
chambre de Boyden et fenêtre de Rebuck. Etude de la phagocytose in vitro de
germes, de levures, de particules de latex. Etude du pouvoir bactéricide in vitro,
étude des enzymes du polynucléaire.
 Thrombopoïèse

Régulation par la thrombopoïétine TPO. 2/3 des plaquettes sont dans la

circulation sanguine,1/3 constitue le pool splénique.

Exploration : numération des plaquettes et leur morphologie sur frottis.

Myélogramme, biopsie médullaire. Etude des fonctions plaquettaires dans
l’hémostase primaire et dans la coagulation. Durée de vie des plaquettes,
agrégation plaquettaire en présence d’inducteurs, cytométrie en flux.
Le lymphocyte , le système lymphoïde
Fonctions :

Les lymphocytes sont le support de l’immunité spécifique. Ils interviennent dans les 2
phases de la réponse immunitaire : la phase de reconnaissance de l’antigène et la phase
effectrice.

Exploration :
On peut simplifier le système immunitaire en 2 systèmes.
 Immunité humorale : Numération des lymphocytes, morphologie. Electrophorèse des
protéines, immunoélectrophorèse, dosage des IgG,IgA,IgM. Num2ration des lymphocytes B,
T, T4, T8 …Etude des réponses aux vaccinations, dosage des IgE, IgA sécrétoire dans la
salive.
 L’immunité cellulaire : numération des lymphocytes T, T4, T8, tests cutanés : IDR
tuberculine, candidose, streptokinase, étude de la capacité d’acquisition d’une
sensibilisation au Dinitrochlorobenzène. Réactions prolifératives in-vitro.
Le système lymphoïdes = organes et tissus
Le Thymus
Ganglion lymphatique
La rate
Le « Malt » = Mucosal Associated Lymphoide Tisuue
Les différents stades de différenciation et de maturation
des cellules lymphoïdes
Le Monocyte et le système des phagocytes mononuclées
Le monocyte et le Système des Phagocytes Mononucléés

Foie = cellules de Küpffer

Moelle osseuse = macrophages médullaires
Rein = cellules mésangiales intraglomérulaires
Cerveau = cellules de la microglie
Séreuses = macrophages des séreuses
Poumon = macrophages alvéolaires
Rate = macrophages sinusaux
Ganglions = macrophages sinusaux (dans les sinus), cellules interdigitées (régions
T),cellules folliculaires dendritiques (centres germinatifs).
Os = ostéoclastes multinucléés,

Les divers types morphologiques d'histiocytes et les monocytes constituent le Système des
Phagocytes Mononucléés, autrefois appelé Système Réticulo-Endothélial ou système
réticulohistiocytaire
 Université d’Oran,
Faculté de médecine d’Oran,
Département de médecine

Part 1 .Le sang, les organes hématopoïétiques,

hématopoïèse.
Part 2 .Le sang, hématimétrie, explorations.

Pr Hadj TOUHAMI, chef de service Hématologie,

CHU Oran

Année Universitaire 2014-2015

1 er module : 1 Mars 2015.
L’hémogramme normal en fonction des âges
Anémie ,Définition :

L’anémie est une diminution de la quantité

d’HÉMOGLOBINE fonctionnelle circulante :
Nouveau né < 135 g/l
A 5 mois < 95 g/l
A 12 ans < 115 g/l
Femme < 120 g/l
Grossesse 3e Trimestre < 110 g/l
Homme < 130 g/l
Homme > 70 ans < 125 g/l
Femme > 70 ans < 115 g/l
Hématocrite < 36% chez l’Homme
< 33% chez la Femme.
JAMAIS LE NOMBRE DES GR.
Attention …!
 1) Hémogramme : GR, Hb, Ht  CONSTANTES ERYTHROCYT.
Ht
VGM = x 10
Nbre de GR
* 80 à 100 µ3 ou fl NORMOCYTOSE
* < 80 fl MICROCYTOSE
* > 100 fl MACROCYTOSE
Hb
CCMH = x 100 = 32 à 36%
Ht
* < 32 % HYPOCHROMIE
* 32 à 36 % NORMOCHROMIE

2) Numération des réticulocytes :

GR. Jeunes colorés par bleu de méthylène : 0,5 à 2%
25000 à 75000/mm3 > 120 000 Régénérative
< 120 000 Arégénérative

les automates actuels fournissent une courbe de distribution des volumes

érythrocytaires, assez superposable à la courbe de Price Jones (autrefois réalisée avec
les mesures des diamètres érythrocytaires sur frottis) qui permet de définir
l'anisocytose.
Le frottis de sang : examen simple, peu coûteux, indispensable…
Les G.R. de face la forme d’un disque, de profil = d’une lentille biconcave. Sur un Frottis
coloré au [Link] : les hématies sont de couleur rose avec une zone claire centrale. La
zone claire ne dépasse pas la moitié du diamètre du GR. Le diamètre est de 7 à 8 mm.

Etude de la morpholgie des GR sur FS coloré MGG:

•taille: anisocytose, microcytose ou macrocytose.

•coloration: hypochromie , polychromatophilie

•inclusions : corps de Howell-Jolly , granulationsbasophiles

* forme: poïkilocytose; sphérocytes, ovalocytes, schizocytes,

drépanocytes, dacryocytes
Si anémie arégénérative ou toutes autres anomalies des GB et/ou des
plaquettes Faire un myélogramme ;
recherche d’une cause centrale = médullaire
 REALISATION DU MYELOGRAMME:
Ponction effectuée soit au niveau du sternum, ou de l'os iliaque .
Le trocart de Mallarmé.
 RESULTATS et INTERPRETATION DU MYELOGRAMME
Etude des différentes lignées exprimées en pourcentage,
la richesse de la moelle osseuse : en densité cellulaire cotée de 0 à 5
ou qualifié de faible, moyenne, forte.
:
Cellules souches indifférenciées < 2% si > 5%
Lignée Granuleuse 50 à 70 % < 50% Hypoplasie
- Myéloblastes <3% > 70% Hyperplasie
- Promyélocytes < 5%
- Myélocytes 5 à 20 %
- Métamyélocytes 5 à 20 %
- P. Neutrophiles 10 à 25 %
- Eosin. et baso. < 4%
Lignée Erythroblastique 10 à 30 % < 8 % Erythro-pénie
Proérythroblastes 0 à 2% > 30 % Erythro-blastose
Erythrob. Basophiles 2à4%
Erythrob. polychromatophiles 4 à 8 %
Erythrob. Acidophiles 3à6%

Eléments non myéloïdes < 25 % > 30% lymphocytose

Lymphocytes < 20 %
Plasmocytes <4%
Monocytes et cellules histiocytaires <2%
Lignée Mégacaryocytaire
Mégacaryocytes Présents
 -classification physiopathologique
1- ANÉMIES RÉGÉNÉRATIVES : PÉRIPHÉRIQUES
RETIC. > 120.000 mm3

1) HÉMORRAGIES AIGUES ABONDANTES intérrogatoire + examen clinique

2) HYPERHÉMOLYSE

- D’origine extra corpusculaires :

Toxiques et toxines
Parasitose, septicémies, viroses
Agressions mécaniques : valve cardiaque
Immunologiques

- D’origine corpusculaire :
Anomalies des ENZYMES : G6PD, PK
Anomalies de l’Hb : Thalassémies, Hb S.
Anomalies de la membrane : microsphérocytose
Hémoglobinurie paroxystique nocturne HPN

- HEMATOLOGIE Pr [Link]
 NORMOCHROME NORMOCYTAIRE OU MACROCYTAIRE
Arégénérative ≤ 120.000/mm3

Causes évidentes : Insuffisance rénale – Insuf. endocrinienne

Anémie inflammatoire – Cirrhose hépatopathie

Pas de causes évidentes

MYELOGRAMME

Absence d’Erythroblaste Cellules anormales Pauvre

Anémie Anérythroblastique Métastases ou
Mégaloblaste L.A Normal
B12 – AF Lymphomes
Dysérythropoiese
Syndrome myélodyspl. Biopsie ostéo médullaire

– HEMATOLOGIE [Link]
 DIAGNOSTIC D’UNE ANEMIE MICROCYTAIRE HYPOCHROME
VGM < 80 µ3 et CCMH < 30%

Frottis de sang + Fer Sérique

Basse Normale ou Elevée

Hyposidéremie Hypersidéremie.

2 ETIOLOGIES

Carence en Fer Anémies inflam. An. hypersidéréniques

Anomalie de l’Hb

- THALASSÉMIE HÉTÉRO.
*si FER SERIQUE + - ANÉMIES SIDÉROBLAS
+ * secondaires toxiques
CTSS * génétiques
CS * primitives
PERLS
- CARENCE EN CUIVRE
FERRITINEMIE

- HEMATOLOGIE Pr [Link]
 Autres anomalies de l’hémogramme

Polyglobulie
La polyglobulie doit être confirmée par une masse sanguine.
Rechercher une cause extra-hématologique.

Thrombopénie
Une thrombopénie < 150 000/mm3.
Si < à 50 000 plaquettes/mm3 = une consultation spécialisée,
si < 10 000 plaquettes et/ou existence d’un syndrome hémorragique, hospitalisation.
Thrombocytose
Une thrombocytose > 450 000/mm3,
 souvent réactionnelle (syndrome hémorragique, carence martiale,
syndrome inflammatoire ).
Le diagnostic de Thrombocytémie dans le cadre d’un syndrome myéloprolifératif doit être
posé en consultation spécialisée.
Les Globules Blancs : Données quantitatives
Nombres absolus à l’état normal chez l’adulte > 12 000/mm3,

Polynucléaires neutrophiles (PNN) : 1700- 7000 / mm3 <1800/mm3

Polynucléaires éosinophiles (PNE) : 50- 500 / mm3
Polynucléaires basophiles (PNB) : 10- 50 / mm3
Monocytes : 100- 1000 / mm3
Lymphocytes 1000- 4000 /mm3 > 5000/mm
 Dans les 3 situations suivantes, mu myélogramme est indiqué

myélémie la présence de formes immatures dans le sang ou de cellules

anormales circulantes. Tuberculose, syndromes myéloprolifératifs,
métastase médullaires…Un myélogramme est indiqué.

Une bicytopénie diminution des GR et des GB et/ou des plaquettes.

Un myélogramme est indiqué

Pancytopénie diminution des 3 éléments GR, GB et Plaquettes à la fois.

Un myélogramme est indiqué.
 BIOPSIE MÉDULLAIRE

La biopsie est effectuée au trocart de Jamshidi ou de Tanzer sous anesthésie locale, au niveau de
l'os iliaque :
 ETUDE DU GANGLION

CYTOLOGIE GANGLIONNAIRE
C’est une simple cytoponction des ganglions en évitant d'aspirer le suc ganglionnaire
Projeté le contenu sur lame puis étaler et colorer au May Grünwald Giemsa.
Indications très limitées : ce n'est pas un examen de diagnostic mais un examen
d'orientation ou de surveillance d’une pathologie déjà connue.

EMPREINTE GANGLIONNAIRE
Après une biopsie du ganglion on couper le ganglion en deux en passant par le hile.
La tranche de section est ensuite posée plusieurs fois sur les lames de verre.

BIOPSIE GANGLIONNAIRE
C’est le prélèvement chirurgical d’un ganglion. Celui-ci est fixé dans du formol et adressé avec
les renseignements cliniques et biologiques au service d’anatomie pathologique.
 CYTOMETRIE EN FLUX

Principe : marquer les cellules sanguines à l'aide d'anticorps monoclonaux

fluorescents. L'appareil reconnaît ensuite les cellules marquées par ces anticorps. La
cytométrie en flux s'applique à :

- au comptage des réticulocytes,

- à l'étude des sous populations lymphocytaires : CD 4 et CD 8…,

- à l'étude des hémopathies malignes : phénotypage des cellules

leucémiques au moment du diagnostic, maladie résiduelle,…

- C’est un outil très utile pour de nombreux diagnostic et pour l’évaluation et

suivi de certains traitements.
 CYTOGENETIQUE

Les techniques utilisent des cultures cellulaires. Elle peut être

Effectuée sur les cellules médullaires ou sur les cellules ganglionnaires.
Exemples : ChrPh1, les translocations…

BIOLOGIE MOLECULAIRE

Les techniques de la biologie moléculaire s'appliquent :

 Aide au diagnostic : leucémie myéloïde chronique, leucémies aiguës,
lymphomes...
 La biologie moléculaire est aussi largement employée en dehors de
l‘onco-hématologie: hémophilies, maladies de l'hémoglobine,
thrombophilie.
Ce sont les pré-requis pour le module Hématologie,

Pr Hadj TOUHAMI, Hématologie, CHU Oran.

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1 er module : 1 Mars 2015.