EXPLORATION DES PROTEINES

PLASMATIQUES
 PLAN

I. INTRODUCTION

II. MÉTHODES D’EXPLORATION

III. ÉTUDE DES PRINCIPALES PROTÉINES SÉRIQUES

 OBJECTIFS
• Connaitre :
1. Les méthodes d’exploration des protéines sériques
2. Les variations physiopathologiques des protéines
sériques
3. Les différents profils protéiques
 I. INTRODUCTION :

• Une protéine est une macromolécule biologique composée d’enchainements

d’acides aminés unis solidement par des liaisons peptidiques.

• Il y a dans le plasma sanguin 60-80 gr de protéines par litre. Ces protéines

sont extrêmement variées par leur structure, forme, masse moléculaire, lieu
de synthèse, lieu de captation et destruction, vitesse de renouvellement,
fonctions biologiques et comportement en pathologie

• Presque toutes les protéines plasmatiques à l’exception de l’albumine

(holoprotéine) contiennent une fraction glucidique fixée à la chaine
polypeptidique(glycoprotéines >>> hétéroprotéine).
I. INTRODUCTION :
 II. MÉTHODES D’EXPLORATION

1. Dosages des protéines totales.

2. Étude des fraction protéiques

– Électrophorèse.

3. Dosage spécifique des protéines

– Recherche de syndromes biologiques : profil protéique.

– Dosage de marqueurs biologiques isolés.

 1. DOSAGE DES PROTEINES TOTALES

q Prélèvement

• Sujet à jeun depuis au moins 10-12h

• Sang

- Tube sec = dosage sérique

- Tube hépariné = dosage plasmatique possible sauf pour

l’électrophorèse.

• Eviter la pause prolongée du garrot à hémoconcentration (artéfact)

 1. DOSAGE DES PROTEINES TOTALES

Ø Méthodes colorimétriques (Réaction du biuret)

q Valeurs normales :
• pour l’adulte 60 -80 g/l pour le sérum.
• Dans le plasma les résultats sont majorés fibrinogène (2 – 4 g/l)
 Valeur normale et variations
physiologiques
Valeur normale chez l'adulte : 60-80 g/l
• Variations avec l'âge:
- prématuré: 40g/l
- nouveau-né: 60g/l, avec chute à 45-50g/l au bout de 4 jours
- nourrisson (2 ans): 60g/l
- après 70 ans: 65g/l par diminution de l'albumine et/ou des Ig

§ Changement de position: repos allongée => debout ↑[] 30min qui suivent

§ Grossesse: 60g/l par hémodilution et diminution de l'albumine et/ou des Ig

§ Médicaments: effets variables (oestro-progestatifs: - 10%)

 q Variations pathologiques : Dysprotéinémies:

• Affections accompagnées de perturbations quantitatives des

protéines sériques.

• Soit diminution soit augmentation des concentrations plasmatiques

de protéines ou de groupes protéiques
 Hypo protéinémie : < 60 g/l

• Eliminer d’abord une hémodilution

• Défaut d’apport par malnutrition, dénutrition ou malabsorption intestinale
(entéropathie, maladie cœliaque, insuffisance pancréatique).
• Défaut de synthèse (insuffisance hépatique).
• Augmentation des pertes:
. d'origine rénale (syndrome néphrotique, glomérulonéphrite)
. d'origine cutanée (brûlures)
. d'origine digestive (entéropathie exsudative)
. Perte tissulaire (hémorragies)
• Catabolisme exagéré : cachexie , corticoïdes
 Hyper protéinémie : > 80 g/l
• Eliminer d’abord une hémoconcentration (pertes liquidiennes, déshydratation)

• Hyperγglobulinémie: augmentation de synthèse d’une protéine ou un groupe de

protéines (compétition :synthèse accrue par un clone cellulaire)

àgammapathie monoclonale :
- Maladie de Kahler: augmentation IgA, IgG
- Maladie de Waldenstrom: augmentation IgM
2 . ETUDE DES FRACTIONS PROTÉIQUES : ELECTROPHORÈSE

• Principe: Méthode de fractionnement des protéines sur un support

solide (acétate de cellulose) ou gel (agarose…)

- séparation des molécules chargées (ionisées) sur un support

imprégné d’une solution tampon (pH défini) et soumises à un
champ électrique

- Migration avec une vitesse proportionnelle à la charge.

 • A quoi est dû le fractionnement?

- caractère amphotère des protéines (+) (-) selon le pH

- pHi pour chaque protéine : (-) = (+) Þ charge globale = 0
- pour être chargée, le pH du milieu doit être éloigné du pHi de la
protéine.
- électrophorèse des protéines réalisée à pH alcalin (8,6) Þ charge
globale (-) Þ migration vers le pôle (+)
ETAPES:

-Déposer quelques microlitres de sérum sur le support

- Laisser migrer durant un temps
- Fixation et coloration par la suite
• Séparation sous forme de bandes révélées par différents colorants:
• l'amidoschwarz(noir)
• le rouge Ponceau
• le bleu de Coomassie

• la lecture photodensitométrique de la coloration de chaque bande donne le

tracé classique où apparaissent des pics.
• L'intégration de la surface de chaque pic conduit enfin à un pourcentage
de chaque fraction, traduit aussi en gramme/litre si le taux des protéines
totales a été donné à l'appareil.
 Electrophorèse des protéines
plasmatiques
INTERET:

• Objectiver des anomalies propres a chaque groupe↑↓ absence de pic

• Méthode qualitative semi-quantitative
• Le seul intérêt diagnostique = dépistage d’une gammapathie
monoclonale
• Au plan évolutif et pronostique = surveillance des patients (technique
sensible et reproductible)
– Inflammation
– Atteinte hépatique ou rénale
– Immunologie
§ Résultats : 5 à 6 fractions selon le support
- Profil électrophorétique (protidogramme) = graphique + concentration chiffrée
Ordre de migration des principales protéines à l’éléctrophorèse
§ Valeurs Normales des fractions protéiques :
FRACTION PROTÉINES % ET CONCENTRATIONS

Albumine albumine 60–65 % (37–54 g/l)

α 1-globulines α 1-antitrypsine, 3–5 % (2–4 g/l)
orosomucoïde

α 2-globulines céruléoplasmine, 6-10 % (4–7 g/l)

α 2-macroglobuline,
haptoglobine,
α-lipoprotéines
β -globulines Hémopexine, transferrine, 8–12 % (6–9 g/l)
CRP

γ-globulines IgG, IgA, IgM, IgD, IgE 11–19% (8–13,5g/l)

§ Interprétation Þ

• Hypoprotéinémies

- Malnutrition

- Syndrome néphrotique.

- Hépatite aiguë.

- Cirrhose du foie

- Hypo-gamma…..
 • Hyperprotéinémies

- Syndrome inflammatoire.

- Hypergammaglobulinémie polyclonale

- Hypergammaglobulinémie monoclonale.
 ETUDE DE QUELQUES SYNDROMES

• SYNDROME INFLAMMATOIRE
• SYNDROME NEPHROTIQUE
• CIRRHOSE HEPATIQUE
• GAMMAPATHIES
• DEFICIT IMMUNITAIRE
Ø Inflammation aigue: augmentation des α1(α1 antitrypsine, orosomucoide ) et
α2(haptoglobine)

Ø Inflammation chronique: augmentation des α2 et γ globulines et diminution

de l’albumine qui masque partiellement l’hyperprotidémie réactionnelle(taux
des protéines totales normal)
 Augmentation de la synthèse hépatique de
macroprotéine (MM >100 kDa) :
α2-macroglobuline (725 kDa)

Diminution par fuite glomérulaire des molécules de petite taille

- la préalbumine (55 kDa)
- l’albumine (70 kDa)
- l’α1 antitrypsine (53 kDa) migrant en α1
- l’orosomucoïde (α1 glycoprotéine acide : 44 kDa)
- la transferrine (90 kDa) migrant en β
- IgG migrant en γ,
 Cirrhose décompensée

Cirrhose débutante décompensée

Ø Une diminution de l’albumine, des α et des β globulines.

ØApparition d’un bloc β-γ caractéristique (augmentation des IgA’’β’’ et des

IgG, IgM ‘’ γ’’).
 Les Gammapathies

Ø Les hyperglobulinemies monoclonales se caractérisent par un pic étroit.

Ø les hyperglobulinemies polyclonales se caractérisent par un dôme.
 Les Gammapathies polyclonales

– Infections bactériennes ou virales (VIH, hépatites)

– Syndrome inflammatoire
– Maladies auto-immunes:
• LED

Gammapathies polyclonales
 Gammapathies monoclonales
• Myélome Multiple (IgG, IgA)
• Waldenström (IgM)
• Autres syndromes lymphoprolifératifs malins
– Lymphome malin non-hodgkinien(IgM)
Myélome, ou maladie de Kahler

Prolifération de cellules différenciées en plasmocytes, produisant le plus souvent

IgG ou IgA

Tumeur souvent à l’origine de lésions ostéolytiques, d’insuffisance rénale

Maladie de Waldenström

prolifération lymphoplasmocytaire monoclonale avec infiltration des organes

lymphoïdes périphériques et de la moelle osseuse avec sécrétion d’une IgM
monoclonale,

Manifestations cliniques en rapport avec hyperviscosité sanguine

DEFICIT IMMUNITAIRE
 3. DOSAGE SPÉCIFIQUE D’UNE PROTÉINE

A. Dosages chimiques:

- Albumine (Vert de Bromocrésol)

- Fibrinogène (Technique chronométrique de Von Clauss)

- Fractions protéiques :
Ø Chromatographie (HPLC-SM)

Ø Electrofocalisation (IEF — IsoElectric Focussing)

 3. DOSAGE SPÉCIFIQUE D’UNE PROTÉINE

B. Méthodes immunologiques:

§ Mise en jeu d’une réaction entre un antigène (protéine) et un

anticorps anti-protéineè formation d’un complexe Ag-Ac .

§ Utilisation d’un anticorps pour générer un signal permettant de doser

la protéine.

§ Sensibilité analytique élevée (pmol/L voire moins)

§ Haute spécificité (celle de la réaction antigène/anticorps)

 Principe général

Fab

Fc ka
[Ag] + [Ac] [Ag Ac]
kd
Ac

Réaction réversible
 B.1. immunoélectrophorèse:

- Combine les principes de l’électrophorèse des protéines en gélose et

de l’immunodiffusion. (formation de complexes Ag-Ac sous forme
d’arc) coloration des arcs.
- Estimation semi quantitative des protéines, permet de:
• Confirmer l’augmentation ou la diminution d’une protéine
(importance de l’arc)
• Déceler un déficit d’une protéine (absence d’arc)
• Déceler une protéine anormale (arc anormal)
 Immunoélectrophorèse

•Dans un premier temps, les molécules antigéniques 1

sont séparées grâce à leur différence de mobilité

dans un champ électrique.
2

•Dans un deuxième temps, lorsque la séparation est

jugée suffisante, un antisérum est placé dans une 3

rigole parallèle au sens de migration des Ag.

•Ag et Ac diffusent librement dans le gel et donnent 4

des arcs de récipitation
 Immunoélectrophorèse

_
g pathie monoclonale IgG Lambda
 B.2. Immunofixation:
- Électrophorèse en gel d’agarose combinée à une immunoprécipitation.
- Intérêt = typage des Ig monoclonales
- Permet de révéler la présence d’une Ig monoclonale par la mise en
évidence d’une bande étroite au niveau de la zone g -globulines; parfois
des β, voire des a-globulines;
- Utilise des antisérums anti-chaînes lourdes (a, g, µ) et anti-chaînes
légères (κ, λ) spécifiques pour détecter une Ig monoclonale (bande étroite
dense) et comparer avec un sérum témoin.
 Sérum normal
+

- Sur un même gel 6 pistes du même sérum subissent l’électrophorèse

- puis 5 pistes sont incubées chacune avec un antisérum mono spécifique.
- Permet la précipitation in situ des Ig.
- Après lavage les Ig Précipitées sont révélées par un colorant.
- la première piste est toujours une piste témoin d’électrophorèse
 Immunofixation

_
g pathie monoclonale IgG à chaines Kappa
 Immunofixation
+

g pathie monoclonale IgG lambda

_
 B.3. Méthodes immunoenzymatiques
Méthode ELISA: enzyme linked immuno sorbent assay

• Réaction Immunologique avec 2 anticorps dont l’un est marqué par un Enzyme:

• La protéine (Ag) prise en sandwich entre les 2 anticorps

• Mesure de activité enzymatique.

 B.3. Méthodes immunoenzymatiques
Electrochimiluminescence (ECLIA):

incubation de l’échantillon avec 2 anticorps monoclonaux anti protéine

spécifique l’un marqué à la biotine l’autre au ruthénium.

mesure de la fluorescence (luminescence) produite par le complexe.

Ag Ag

Ag
 III. ÉTUDE DES PRINCIPALES PROTÉINES SÉRIQUES
1/ ALBUMINE:

• Structure : Holoprotéine -564 aa - 66 kDa-

pHi 4,9
• synthèse : hépatique 10-12 g/j, 1/2 vie 15-19 j
• Localisation: secteur vasculaire , + interstitiel
• Catabolisme: foie, rein, SRE, intestin (cycle entérohépatique)
• Rôles: Maintien de la pression oncotique
Transport non spécifique (grande capacité et faible affinité)
• Intérêt de son dosage :

- Marqueur de la fonction hépatique (1/2 vie longue) surtout

pathologies chroniques

- Les hypoalbuminémies ont une incidence sur la concentration des

substances qu’elle transporte. (Calcium)

• Valeur normales adulte 35-50g/l (50-65 % des protéines totales)

• Variations physiologiques avec âge

• Variations pathologiques: celles des protéines totales
- hyperalbuminémie : hémoconcentration
- hypoalbuminémie: Þ ↓ P oncotique Þ OEDEMES
1. Par défaut de synthèse:
carence d’apport,
insuffisance hépatique,
malabsorption intestinale,
synthèse exagérée d’une globuline (compétition synthèse des
γ globulines)
2. Par excès de pertes:

- rénales (modification de la perméabilité membranaire glomérulaire)

- intestinales (entéropathies exsudatives)

- hémorragies massives (digestives, génitales ….)

- tissulaires (exsudation , hypercatabolisme tissulaire…)

3. par hémodilution (hyperhydratation)

 Variants moléculaires de l’albumine:
- Bisalbuminémie :

Dédoublement du pic (électrophorèse), pas de Conséquence clinique.

Transitoire: acquise (perfusion IV de b-lactamines la fixation du cycle β-

lactame à l’albumine modifie sa charge et donc sa migration)

Héréditaire : mutation

- Analbuminémie congénitale : absence totale du pic

Albumine < 6% , Compensation par les 4 autres fractions
compatible avec la vie.
discrets œdèmes
Bisalbuminémie Analbuminémie
 2/ a1 globulines

Protéines de a1 ANTITRYPSINE
l’inflammation OROSOMUCOÏDE (α1 glycoprotéine acide)

a FOETOPROTEINE (AFP marqueur tumoral digestif)

a1 ANTICHYMOTRYPSINE
a1 LIPOPROTEINES
PROTHROMBINE
TRANSCORTINE
TBG Thyroxine binding globuline
 a1 GLOBULINES
Principales variations
diminution
malnutrition, insuffisance hépatique, syndrome néphrotique,
entéropathie exsudative
portant sur l ’ensemble des protéines le + souvent

augmentation
phase aiguë de l ’inflammation
associée à l ’augmentation des a2 globulines
 2.1. OROSOMUCOÏDE = a1- glycoprotéine acide

- Structure : 41 kDa - 1 chaîne - glycoprotéine

(40% glucides) pHi 2,7

- Métabolisme : synthèse et catabolisme hépatique,

½ vie 5 j

- Rôle : - inflammation phase aiguë,

(marqueur: acute phase protein)

cofacteur activateur de la LPL

- Valeurs normales adulte: 0.5-1,5 g/L
- Variations pathologiques :

-: - inflammation

¯:

- malnutrition,
- insuffisance hépatique
- Syndrome néphrotique
 2.2. ALPHA 1 ANTITRYPSINE
- Structure : 55 kDa - glycoprotéine
(10-12% glucides)
polymorphisme génétique
- Métabolisme : Synthèse hépatique, 1/2 vie 5 j
Détruite par macrophages
- Rôle : Inhibiteur naturel des protéases
(trypsine, thrombine, élastase,
collagénase, chymotrypsine…)
- Valeur usuelles adulte 1.5-2 g/L
- Variations pathologiques :

- : inflammation (acute phase protein)

¯ : - syndrome néphrotique
- insuffisance hépatique
- emphysème: déficit génétique (absence
d’inhibition naturelle de l’élastase leucocytaire èdestruction
des structures pulmonaires)
 2.3. Les autres protéines du groupe a1

Ø Alpha 1 foetoprotéine : AFP 65 kDA

- Synthèse:
§ par le foie en période embryonnaire Þ se trouve dans le sang fœtal
normal, disparaît avant la naissance ou quelques semaines après.

§ Par certaines tumeurs hépatiques (cancers primitifs du foie) et

digestives, des ¢ embryonnaires (tumeur gérminale)
• Intérêt : marqueur tumoral (carcinomes hépato-cellulaires, tératomes
testiculaires)
- Dépistage de certaines populations à risque-de cancers hépatiques
(cirrhose, hémochromatose, hépatites chroniques)
- Gynéco-obstétrique : anomalies de développement du tube neural
du fœtus (spina-bifida, anencéphale…)
- Valeur pronostique: suivi de la réponse au TRT de cancer
hépatique
• VN = 1,8 - 5,10 µg/l
Ø alpha 1 antichymotrypsine: antiprotéase
Ø alpha 1 lipoprotéine…
 3. Le groupe des a2- globulines
ALB

Protéine de
HAPTOGLOBINE
l’inflammation

α2 MACROGLOBULINE
CERULOPLASMINE
Antithrombine III
Choline-estérase
Plasminogène
RBP rétinol binding protein
 3.1. HAPTOGLOBINE
- Structure : 19 % de glucides, 3 phénotypes
formes mono et oligomériques : 86 à 800 kDa
- Synthèse : foie, 1/2 vie 3-5j
- Catabolisme : foie et macrophage
- Rôle : Transport de l’Hb
capte Hb intravasculaire sous forme de complexes
Hp-Hb (1:1); 1/2 vie < 20mn
catabolisé dans le SRE, le fer libéré est récupéré(Trf)
- Intérêt : marqueur de l’hémolyse intravasculaire
- Valeurs usuelles: adulte 0.5-1.5 g/L ,
Nné: traces
- Variations pathologiques
¯ - hémolyse intravasculaire aigue et chronique
↓ - insuffisance hépatique
- - dans tout syndrome inflammatoire aigu (acute phase protein)
très sensible, non spécifique
- - syndrome néphrotique
 3.2. L’ Alpha 2 macroglobuline

- 1/3 des α2 globulines

- Structure : 850 kDa - 4 sous-unités - 8% glucides
- Métabolisme: Synthèse hepatique, catabolisme SRE,
1/2 vie 5 j
- Rôle : inhibiteur naturel de protéases
formation de complexes avec des substrats de PM élevées
- Valeurs usuelles : Adulte 1.5-3.5 g/L

- Variations pathologiques:

- - Syndrome néphrotique ( caractéristique): par synthèse

hépatique compensatoire

- Inflammation aigue non spécifique

 3.3. La Céruléoplasmine

- Structure: 0,5% glucides, 151 kDa

- Métabolisme: Synthèse hepatique et catabolisme SRE
- Rôle : + transport du cuivre . 8 atomes/ molécule
+ activité oxydasique quand elle est fixée au cuivre
- Valeurs usuelles : Adulte 0,4- 0,6 g/L
 - Variations pathologiques:
- - Inflammation aigue non spécifique (acute phase protein)
- grossesse stimulation de la synthèse par les oestrogènes.

¯ - Maladie de WILSON : héréditaire, synthèse d’une protéine de

structure anormale ne fixe plus le Cu++ qui sera transporté par ALB,
avec surcharge et dépôts tissulaires.
ALB 4. Le groupe des b- globulines

• Transferrine
CRP
Hémopexine
•Fibrinogène si plasma (migration β-γ)
•Beta apolipoprotéine
•Fraction C3 et C4 du complément
•Sex hormone binding globuline
Transcobalamine
•β2 microglobuline
 4.1. Transferrine ou sidérophiline

Structure 70 à 80 kDa.
Métallo- glyco-protéine (Fer+++ : oxydée).
4% glucides
Métabolisme: Synthèse foie, macrophages, organes lymphoïdes,
vitesse inversement proportionnelle au fer cellulaire
1/2 vie 8 j.
 Rôle : - transport du fer +++ (2 atomes /Mol).
Saturation 1/3 (33%)
- fournit le fer à la MO Þ synthèse Hb
- régule l'absorption du fer suivant sa saturation
- évite les pertes de fer (rénale)
intérêt : - évaluation du statut en fer
- marqueur de l’état nutritionnel
Valeurs normales: Adulte : 1.7 - 3 g/L
Variations pathologiques:
- - Carences en fer (anémies ferriprives)
- hémorragies aigues
- imprégnation oestrogénique
¯ - surcharge en fer (hemochromatose)
- inflammatoin aigue et chronique, (Acute phase protein)
 - insuffisance hépatique,

- dénutrition

- pertes glomérulaires (syndrome néphrotique),

Atransférinémie congénitale : défaut de synthèse génétique

 4.2. Fibrinogène

Structure: glycoprotéine de forme allongée (fibreuse). 340 KDa.

Métabolisme: Synthèse hépatique 1/2 vie 5 j.
Rôle: - coagulation sanguine (polymérisation en fibrine par la
thrombine)
- défense contre l’extension d’un foyer inflammatoire
Valeurs normales: adulte : 2 - 4 g/L
Variations pathologiques:
- - réaction inflammatoire (acute phase protein)
¯ - atteintes hépatiques graves (défaut de synthèse)
- syndrome hémorragique (fibrinolyses)
- coagulation intravasculaire disséminée (CIVD)
(une activation pathologique de la coagulation à diminution
par consommation: )
 5. Le groupe des γ- globulines
ALB
 5. Le groupe des g- globulines
Les Immunoglobulines
Structure complexe: 2 chaînes lourdes H
2 chaînes légères L
a g m d e
l,k IgA, IgG, IgM, IgD, IgE

Site de fixation
du complément

Protéines glycosylées
très grande hétérogénéité : domaines constants, variables 150 – 950 kDA
Métabolisme :
- synthèse dans plasmocyte, ou lymphocytes proliférés(après stimulation antigénique)
- retrouvées dans le plasma et les sécrétions.
- Influencée par l’âge, immunosuppresseurs, facteurs nutritionnels, excès de
consommation ou de pertes.
Rôle: - activité anticorps (défense de l’organisme)
Caractéristiques:
- IgG monomère: 50 Kdq (75%) = 8 - 16 g/L,1/2 vie 21 j :principale ligne de défense,
traverse la barrière placentaire, dirigée contre les toxines batériennes.
- IgA dimère : 150 Kda (20%)= 2- 4 g/L, 1/2 vie 6 j: se trouve dans les sécrétions
(bronchiques, intestinales…) dirigées contre les entérovirus, infections broncho-
pulmonaires et intestinales.
 IgA

J Chain

IgM
 - IgM pentamère: 950 Kda (<10%) = 0.5 -2 g/L, 1/2 vie 6 j: synthèse rapide après
stimulation Antigénique, dirigées contre les bactéries et grosses molécules, lyse des
cellules étrangères.

- IgD = 0,2 -0,25 g/l : rôle de récepteur à la surface des lymphocytes.

- Ig E = 0,15 – 0,5 mg/l: se fixe à la surface de la peau , rôle dans les phénomènes
allergiques et d’hypersensibilité.

Variations physiologiques: Hypogammaglobulinémie du nouveau né

• À la naissance IgA et Ig M basses - progressivementè V. adulte IgA10-12ans, IgM 1an.
• Les Ig G passent la barrière placentaire (dernier trimestre)è élevées à la naissance (sauf
chez les prématurés) ¯3ème mois, - è Valeur adulte IgG 3ans
• Rôle important de l’allaitement maternelle: IgA sécrétoires.
Évolution des taux des Ig chez le fœtus et après la naissance
l’hypo g- globulinémie physiologique est une des causes de susceptibilité
aux infections chez l’enfant particulièrement le prématuré.
Variations pathologiques :

1. hypo g- globulinémie:
1.défaut de synthèse: (déficit immunitaire)

- congénital: partiel ou total (agammaglobulinémie)

- acquis: destruction tissus lymphoïdes (radiations, immunosuppresseurs),

[Link]ès de pertes:

- rénales : syndrome néphrotique

- digestives: entéropathie exsudative

2. hyper g- globulinémies (gammapathies):
1- polyclonales: (augmentation globale des Ig)

Maladies auto immunes (polyarthrite rhumatoïde),infectieuses, virales, parasitaires

(aigues ou chroniques)

2- monoclonales: bande nette à l’électrophorèse (pic étroit= paraprotéines)

- Myélome multiple des os ou maladie de Kahler IgG (70%), IgA (20%)

prolifération plasmocytaire diffuse avec localisation osseuse.

Biologie: ↑ PT , ↑ IgA ou IgG,
protéinurie de Bence Jones (chaînes légères d’Ig)
hyponatrémie, hypercalcémie, hypoalbuminémie
Insuffisance rénale (multifactorielle)
Cinique: anémie (normochrome , normocytaire), douleurs osseuses
- Maladie de Waldenstrom ou macroglobulinémie IgM ( 10%)

Prolifération lymphocytaire B,

↑ PT, ↑IgM, HSPM

hyperviscosité sanguineè sédimentation des GR è thrombose

- Maladie des chaînes lourdes ou de FRANKLIN: la paraprotéine produite

est exclusivement une chaîne lourde (α +++)

- Autres pathologies : leucémie, lymphome…

 AUTRES PROTEINES
1. Protéine C Réactive, CRP

Structure :110 à 140 kDa : 5 sous unités

Métabolisme: Synthèse foie : 0.2 mg/J. 1/2 vie 6 h

Rôle : - Défense contre les bactéries et les substances étrangères (active la voie

classique du complément sérique, facilite la phagocytose des bactéries)

Valeurs normales : < 6 mg/L

Variations physio-pathologiques:

- Protéine de l’ inflammation aigue : marquer précoce

peut - 50 x la VN

Début de l’augmentation 6-8h après le déclenchement de la phase aigue

Max au bout de 48h , puis commence à diminuer progressivement.

Alors que les concentrations en orosomucoide et fibrinogène augmentent et

diminuent + lentement (les pics surviennent au bout de 70h et 90 h
respectivement)
 PRI
• Cinétique rapide CPR

• Cinétique intermédiaire Orosomucoïde

Haptoglobine

• Cinétique lente Transferrine

Fibrinogéne
Ferritine
Intérêt : * Recherche d’une infection aigue:
- infections bactériennes néonatales
- infections virales,
* Etats post-opératoires, lésions tissulaires, cancer, lymphome....
* Contrôle d’un processus inflammatoire, maladies rhumatismales.

CRP Ultrasensible et risque cardiovasculaire hors inflammation

<1 mg/L pas de risque
1 à 3 mg/L risque modéré
>3 mg/L risque élevé
 2. MYOGLOBINE

• Structure : Métalloprotéine d'une chaîne unique de 153 acides aminés,

contenant un noyau porphyrique avec ion fer. (sous-unité bêta de l’hémoglobine) .

• La myoglobine est une protéine de transport de l'oxygène dans les muscles

cardiaques et squelettiques.

• Toute lyse cellulaire entraîne une augmentation de la concentration sanguine en

myoglobine, d'où l'intérêt de son dosage en pathologie cardiaque et musculaire.

• Intervalles de référence : Homme : 28 - 72 ng/mL

Femme : 25 - 58 ng/mL
• Variation pathologiques : Augmentation
Ø Infarctus du myocarde :

• La myoglobine augmente dès la 2-3 éme heure après le début des symptômes.

• Son retour à la normale a lieu dans les 24 heures.

• Sa cinétique rapide permet aussi son utilisation dans la recherche d'une récidive
précoce ou le suivi de la reperfusion.

• Ce marqueur manque malheureusement de spécificité.

Variation pathologiques : Augmentation
Autres causes
• Ischémies musculaires

• Dystrophies musculaires

• Myopathies

• Insuffisance rénale

• Polytraumatismes
 3. TROPONINE
• La troponine est une protéine hétérotrimérique qui joue un rôle dans la contraction des
muscles. Il existe 3 types de troponine, (TnC, TnI, TnT).

•Troponine T lie le complexe troponine à la tropomyosine.

• Troponine I inhibe l'activité de l'ATPase liée à l'actomyosine.

• Troponine C régule la contraction du complexe et fixe le calcium.

 3. TROPONINE
• Les troponines Ic et Tc sont des isoformes présentes exclusivement dans le cœur, et leur
détection dans le sang indique des dommages myocardiques.

• Valeurs seuils : Troponine Ic < 0,1 ng/ml

• Variation pathologiques : Augmentation

Ø Infarctus du myocarde :
• Infarctus aigu du myocarde (IDM) : nécrose myocardique dans un contexte
clinique d’une ischémie myocardique aiguë.

++++ augmentation de la troponine

En cas d’IDM, élévation des troponines entre la 3ème et la 6ème heures après le début des douleurs
retour à la normale en 1 à 2 semaines
 4. LA FERRITINE

• Protéine de stockage du fer dans l’organisme (4500 atomes),au niveau des

hépatocytes et systéme macrophagique

• Ferritine plasmatique:

reflet des réserves tissulaires facilement mobilisables

 4. LA FERRITINE

VN estimée : H: 10 à 200 microgramme/l

F: 10 à100 microgramme/l

Limite supérieure: H 300 à 400 microgramme/l

F :200 à 300 microgramme /l

Augmente avec l’âge à Hyperferritinémie modérée

 4. LA FERRITINE

• Hyperferritinémie pathologiques :
– Acquise

– Héréditaire

• 3 mécanismes sont possibles:

– lyse cellulaire

– augmentation de la synthèse

– dérégulation de la synthèse: mutation génétique

 4. LA FERRITINE
• Hyperferritinémie Acquise :

– affections hépatiques:
• Hépatite virale
• Hépatite alcoolique

– affections hématologiques:
• Anémie hémolytique
• Surcharge en fer post transfusionnelle

– autres affections:
• Syndrome inflammatoire
 4. LA FERRITINE

Hyperferritinémie Primitive : Hémochromatose

L’hémochromatose est une maladie génétique due à une absorption intestinale

excessive de fer avec pour conséquence le dépôt de cet élément au niveau de
différents organes tels que le foie, le cœur et la peau.

• Autosomique récessive

• Diagnostic génétique

• Prévalence 1 à 2 %
 4. LA FERRITINE

• Gène HFE: protéine HFE se lie à la membrane cellulaire. Elle permet la fixation
de la Bêta-2 microglobuline et de la transferrine au niveau des cryptes intestinales.

• La mutation C282Y entrave l'association de la protéine HFE avec la

ß2-microglobuline. La protéine n'est alors plus exprimée sur la membrane
basolatérale de la cellule cryptique associée au récepteur de la transferrine R-Tf.

• Les cellules entérocytaires duodénales auraient, dans cette situation, les

caractéristiques fonctionnelles d'une cellule pauvre en fer malgré la surcharge
tissulaire
La forme la plus fréquente d'hémochromatose est liée à des mutations du gène codant
pour la protéine HFE, situé sur le bras court du chromosome 6. L'hémochromatose liée à
HFE correspond essentiellement à un statut génétique d'homozygotie pour la mutation
C282Y (remplacement en position 282 d'une cystéine par une tyrosine)
 Hypoférritinémie :
• Une hypoferritinémie reflète toujours une carence en fer;

1 – Quantitative : apport (alimentation) ou pertes excessives (pertes sanguines:

processus hémorragiques (cancers digestifs; origine gynécologiques: règles
abondantes, fibrome…)

2 – Qualitative : inflammation: augmentation de l’Hepcidine : séquestration du fer

dans les cellules et diminution de l’absorption intestinale donc diminution du fer
plasmatique : (Rhumatismes chroniques (PR) , Infections chroniques…) jusqu’à
l’anémie hypochrome hyposidérémique .
 4. PROTEINES DU COMPLEMENT

Structure: Système enzymatique complexe = grand nombre de globulines

plasmatiques à activation séquentielle (par protéolyse).

Rôle: - Processus de défense (lyse des cellules étrangères)
- Activation du système immunitaire (Ig)
Augmentation : - syndrome inflammatoire aigu, infections, tumeurs, IDM
Diminution: - défaut de synthèse
- hypercatabolisme par excès d’activation du système
 5. PREALBUMINE
q Propriétés:
-holoprotéine
-petite taille (50kDa)
-synthèse hépatique
-½ vie courte (<12h)
-Concentration: 100-400 mg/L

-Indications et variations:
- Marqueur de dénutrition (elle est diminuée)
(+sensible que l’albumine ou transferrine pour les formes de dénutrition débutante)
- Diminuée au cours de la phase aiguë de l’inflammation, d’ atteintes hépatiques, rénales ou
digestives
- Augmentée au cours de:
-corticothérapie au long cours, prise d’œstrogènes
-Maladie de Hodgkin
 6. Rétinol binding protéine (RBP)

• RBP :

- fixe le rétinol et se combine à la pré-albumine.

- sa synthèse nécessite une molécule de Zinc.

• variation pathologique :

- est diminuée au cours de malnutrition protéique, dans les carences en

vitamine A et en Zinc

-augmentée dans les néphropathies chroniques.

 7. β2. MICROGLOBULINES

• Migre En zone β de l’électrophorèse.

• protéines de faible masse moléculaire : Glycoprotéine de 12kDA ,
• Présente dans le plasma , l’urine , le LCR, et la salive.
• Fait partie du complexe d’histocompatibilité HLA de la classe I: (Composé de protéines
de membranes cellulaires , en particulier au niveau des lymphocytes)
• Après son relargage des membranes ,facilement filtrée par le glomérule (petite taille) et
totalement réabsorbée par le tubule rénal.
• Valeurs plasmatiques: 1,2 – 2mg/L
• Augmentation: - Cancers: myélome multiple, lymphome, …
- IRC , dépôt dans différents organes formant une amylose
 8. Protéines de la phase inflammatoire aiguë:
Syndrome inflammatoire
• Clinique local: douleur ,rougeur, chaleur , œdème
• SG : fièvre, AEG, amaigrissement.
Mécanisme: 4 phases
• Initiation
• Amplification au niveau local
• médiateurs cellulaires ( PNN,mono,lympho).
• médiateurs solubles plasmatiques Marqueurs
biochimiques de la
• Médiateurs solubles d’origine cellulaire RI
• Amplification générale

Cytokines
IL-1, IL-6 ,TNFα
 Protéines de l'inflammation
PRI négatives: diminution des
PRI positives: augmentation des concentrations
concentrations
• CRP: Protéine C réactive • Transferrine
• α1-antitrypsine • Préalbumine
• Orosomucoïde • RBP Rétinol Binding Protein
• α1-antichymotrypsine. • Albumine
• Haptoglobine
• Fibrinogène.
• ferritine
• C3 du complément
• Intérêt de leur dosage:

- Diagnostique: pour affirmer le diagnostic ou l’infirmer.

- Pronostique: quand les signes cliniques ont disparu.

- Surveillance : une régression de l’inflammation puis sa disparition quand les valeurs

diminuent et se normalisent.

- Toute stagnation des valeurs en plateau à des valeurs élevées indique un passage à

la chronicité de l’inflammation.

• Deux types d’action: des protéines de l’inflammation

- Réparation tissulaire par inactivation des enzymes des lysosomes.

- Protection contre les débris pouvant devenir antigéniques.

 9. Les Marqueurs tumoraux

• Un marqueur tumoral circulant est « une molécule produite lors d'un

processus tumoral et libérée dans un liquide de l’organisme (sang, urine, liquide
d’ascite, liquide céphalorachidien…) où sa concentration peut être mesurée.

•Spécificité en Oncologie:
Synthèse du marqueur seulement par les cellules cancéreuses,
Marqueur spécifique - de la maladie cancéreuse (diagnostic bénin/ malin)
- d'un organe (localisation de la tumeur primitive)
- d'une localisation métastatique
Spécificité 100 % = absence de faux positifs.

•Sensibilité en Oncologie
Détection précoce d’une élévation du marqueur lors du développement tumoral,
Sensibilité 100 % = absence de faux négatifs
 9. Les Marqueurs tumoraux

Les marqueurs des cancers sont des protéines fabriquées par les cellules
tumorales et présentes dans la circulation sanguine.

ACE
8. Les Marqueurs tumoraux
 VI. Conclusion

Les protéines plasmatiques sont regroupées en deux grands groupes l’albumine

et les globines.
Leu exploration apporte de nombreux renseignements en particulier sur l’état
inflammatoire, nutritionnel et permet le diagnostic et le suivi de gammapathies
monoclonales
Elle se fait par différentes méthodes (dosage chimique , chimiluminescence ,
électrophorese des proteines sérique , immunofixation …)