Compte rendu
Influence de la variation de certains
facteurs sur la croissance des
microorganismes et l’identification
des bactéries
Réalisée par :Hajar Ifqir
Introduction
Un certains nombre de facteurs physique
externes peuvent intervenir dans le
développement des microorganismes. La
variation de certains entre eux (Ph,
température …) peut accélérer, retarder, ou
arrêter la croissance .nous étudions dans cette
séance l’influence de la variation de température
et de concertation de Nacl puis, l’indentification
des bactéries (test mannitol, coloration de gram)
Matériel utilisé
8 tubes
2 pipettes de 10 ml
pipette de 0 .1 ml
Fiole jaugée de 500ml
Fiole jaugée de 1l
Bouillons nutritifs
Mannitol
L eau distillé
anse de platine
lame
I. variation de la température et la
concentration de Nacl :
1 préparation de bouillons nutritifs
Mode opératoire :
mesure 20g de bouillons nutritif par la balance
Mélanger les bouillons nutritifs avec un 1 L d eau
distillé
Mettez le mélange dans la plaque de chauffage
pendant 5m
(a) variation de la température
le but
Déterminer les valeurs limites de
température et la valeur optimale de
croissance
Mode opératoire
4 tubes de bouillons nutritifs (contenant 10ml de
milieu), marquer chaque tube de la température
correspondante : 4C°,20C°,37C°et 45C°
Ajouter dans chaque tube 0,1ml de bactérie 2
Incuber immédiatement chaque tube à la
température indiquée
B :variation de concentration de
Nacl :
Le but :
Favorise la croissance de certains micro-
organismes grâce à une pression de sélection
résultant de sa composition Par exemple, milieu
à concentration en NaCl pour la culture des
halophiles ou non halophile
Mode opératoire :
Ajouter dans le mélange de bouillon
nutritif :
*Pour la concertation de 0,5 % :0 g /Nacl
* Pour la concertation de 2 % : 1 ,5 g /Nacl
*Pour la concertation de 4 % : 3,5 g /Nacl
*Pour la concertation de 7,5 % :7 g /Nacl
Remplir chaque tube par une valeur
Ajouter dans chaque tube 0,1ml de
bactérie 2
Incuber immédiatement les tubes à la
même température
C : résultat :
Mesurer la DO des tubes à 600nm par
min
Pour mesurer la DO on a utilisé le
spectrophotomètre dans le quelle à chaque fois
on a rempli la cuve (après on a réglé le zéro) par
le bouillons nutritifs de la température
(4C°,20C°,37C°,45C°) et de concentration de
Nacl (0,5% ;2% ;4% ;7,5% ) pour chaque bactérie
et on a noté les mesures trouver dans le tableau
Après avoir calculé la moyenne on a trouvé les
résultats suivants :
Les La température à PH=7 Concentration de Nacl°
bactéries
4C° 20C° 37C° 45C° 0,5% 2% 4% 7,5%
B1 0,030 0,390 0,270 0,187 0,157 0,336 0,283 0,183
B2 0,011 0,191 0 ,37 0,037 0 ,209 0,3 0,315 0,350
B3 0,060 0,109 0,150 0,261 0,198 0,126 0,200 0,340
B4 0 ;33 0,370 0,299 0,270 0 ,272 0,231 0,227 0,145
DO
0.45
0.4
0.35
0.3
bactérie 1
0.25
bactérie 2
0.2 bactérie 3
0.15 bactérie 4
0.1
0.05
0
4°C 20°C 37°C 45°C
T (°C
Influence de la température sur la croissance
des bactéries
do
1.2
0.8
bactérie 4
0.6 bactérie 3
bactérie 2
0.4
bactérie 1
0.2
0
0.5 2 4 7.5
Nacl
Influence de la concentration de Nacl sur la
croissance des bactéries
Interprétation
Résultats Résultats étudiés
expérimentaux
température Nacl température
Nacl
Bactérie 1 mésophile Non mésophile Non
Halophile halophile
(E,coli)
Bactérie 2 Thermophil Halophile thermophil halophile
(Staphylococcie
s aureus)
Bactérie 3 thermophil Halophile thermophil Halophile
Pseudomonas
Bactérie 4 mésophile Halophile mésophile Halophile
Bacillus
On a observe que les résultats expérimentaux
identique avec les résultats étudie
E,coli Staphylococcies
Bacillus
pseudomonas
II. Test mannitol
But :
il s’agit d’apprécier la mobilité de la bactérie dans
un milieu
Mode opératoire
mesure 55 ,5g de mannitol par la
balance
Mélanger le mannitol avec un 500ml d
eau distillé
Mettez le mélange dans la plaque de
chauffage pendant 5mn
Remplir les 4 tubes par 10ml de le
mélange
Prend un échantillon de bactérie 3 par
l’anse après rincée l’anse Horizontalement
dans deux tubes
La même chose avec les autres deux tubes
mais par la bactérie 4
Incuber immédiatement les tubes à la
même température
Résultat
Bactérie 3
prendre une couleur
jeune
La distribution de la
bactérie dans le tub
Bacterie 4
Prendre une couleur
rouge
Assembler dans une
ligne verticale
interprétation :
Bactérie 3
Lorsque le mélange prendre une couleur jeune
donc c est un mannitol
La distribution de la bactérie dans le tub donc
c’est mobile
Bactérie 4
Lorsque le mélange prendre une couleur rouge
donc c est un mannitol
L Assembler dans une ligne verticale
Représente que la bactérie est immobile
III. Coloration de gram :
But :
la coloration de base en bactériologie qui
permet de distinguer les bactéries en Gram
positif et en Gram négatif, cette distinction est
fondamentale pour leur identification
Réactifs :
-Violet de gentiane phénique-
Lugol (iodo-iodure de potassium)
-Alcool à 95% (ou mélange alcool absolu+
1/5
èmed’acétone)
Safranine (ou Fuchsine phéniquée de ziehl
Mode opératoire :
1* Réaliser un frottis et le fixer à la flamme
2*. Verser le Violet de Gentiane sur la lame ;
laisser en contact 1 minute
3.* Jeter le colorant et finir de la chasser par la
solution de Lugol ; laisser agir le Lugolenviron 1
min
4*. Jeter le Lugol et faire couler de l’alcool sur la
préparation ; rincer immédiatement àl’eau
5. *Recouvrir la préparation de Safranine, laisser
agir environ 1 min. lavé abondamment
.6.Sécher au dessus de la flamme d’un bec Bunsen.
1 Prélever une partie
d’une colonie isolée
2 Réaliser un
étalement sur lame
3. Fixer à la chaleur
4. Réaliser les étapes de
coloration
Résultats :
A l’issue de cette coloration, on peut distinguer :-
Des bactéries colorées en violet foncé ; elles ont
gardé le violet, ‘le gram’ elles sont dites ‘Gram
positif’
Des bactéries colorées en rose ou rouge pâle ; elles
ont perdu le violet, ‘le Gram’ elles sont dites ‘gram
négative
:
Ces travaux explique que chaque bactérie a des
conditions précis pour leur croissance exemple de
la cette séance on a étude l’influence de la
température et la concentration de Nacl sur la
croissance de 4 bactéries différents. et on a vu la
technique de coloration de base en bactériologie
qui permet de distinguer les bactéries en Gram
positif et en Gram négatif, cette distinction est
fondamentale pour leur identification, et après le
test de mannitol pour déterminer la mobilité des
bactéries
