Etude des effets antimicrobiens des extraits de thym
1-Activation des inocula bactriens
0,25 g Lactobacillus bulgaricus (lyophilis) 0,25 Streptococcus thermophilus (lyophilis)
Ensemencement
10 ml 10 ml
Bouillon nutritif Bouillon nutritif
(Extrait de viande (Extrait de viande
+Peptone+NaCl ou +Peptone+NaCl ou
KCL) KCL)
Incubation
Etuve
37C /03 heures
0,1 ml 0,1 ml
Solution mre Solution mre
Ensemencement en surface par
inondation
Boite Ptri Boite Ptri
Milieu MRS Milieu M17
Incubation
37C/24 heures
Culture bactrienne
1
Etude des effets antimicrobiens des extraits de thym
2 -Mthode de contact direct (Bourgeois et Leveau, 1980).
Lactobacillus bulgaricus Streptococcus thermophilus
Anse de platine Anse de platine
10 ml 10 ml
Bouillon nutritif Bouillon nutritif
(Extrait de viande (Extrait de viande
+Peptone+NaCl ou +Peptone+NaCl ou
KCL) KCL)
Incubation
37C/24 heures
Etuve
Solution mre Solution mre
Lactobacillus bulgaricus Streptococcus thermophilus
1ml 1ml
1ml 1ml
A jeter A jeter
Eau
9 ml
9 ml
9 ml
9 ml
9 ml
9 ml
9 ml
9 ml
9 ml
9 ml
physiologique
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5
Dultions dcimales Dultions dcimales
2
Dilution des extraits
Aprs extraction si on obtient 50 ml dextrait pur, les dilutions leau distille raison
de 0, 20, 40, 60, 80 et 100% doivent tres ralises comme suit :
1- On partage lextrait pur (100ml) sur 5 tubes de 10 ml
2- Les dilutions seront ralises comme suit
0% 0 ml deau distille est ajoute 10 ml de lextrait pur.
20% 10 ml dextrait pur on ajoute 2 ml deau distille
40% 10 ml dextrait pur on ajoute 4 ml deau distille
60% 10 ml dextrait pur on ajoute 6 ml deau distille
80% 10 ml dextrait pur on ajoute 8 ml deau distille
100% 10 ml deau distill (Tmoin).
3
Lactobacillus bulgaricus Streptococcus thermophilus
Ferments
9 ml
9 ml
9 ml
9 ml
9 ml
9 ml
9 ml
9 ml
9 ml
9 ml
lactiques dans
leau
physiologique
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5
1ml 1ml
Eau distill
Eau distill
Extrait pur
Extrait pur
9 ml
9 ml
9 ml
9 ml
9 ml
9 ml
9 ml
9 ml
9 ml
9 ml
9 ml
9 ml
20% 40% 60% 80%
20% 40% 60% 80%
Incubation/37C Incubation/37C
LECTURE DES RESULTATS APRES 24, 48,72 HEURES
4
Etude des effets antimicrobiens des extraits de thym
3- Mthode des disques par diffusion sur glose (Prescott et al., 2003).
a-Confection des disques
Disque de 6mm de diamtre
Papier filtre Whatman n1
Strilisation lautoclave
120 C /20mn
b-Test de diffusion
Streptococcus thermophilus Streptococcus thermophilus
dans le bouillon nutritif dans le bouillon nutritif
1ml 1ml
Ensemencement par Ensemencement par
inondation sur boites ptri inondation sur boites ptri
15 15
MRS M17
5
Trois disques sont imbibs dans Trois disques sont imbibs dans
Lextrait pur, 20%,40%,60%,80%. Lextrait pur, 20%,40%,60%,80%.
Pendant 5mn Pendant 5mn
Disque imbib dans
lextrait pur
20%
40%
60%
80%
Pnicilline
15 boites
La lecture des diamtres dinhibition se fera aprs incubation des boites de Ptri 37C
pendant 24, 48 72 heures laide dun pied colis (Guignar, 1998).
6
Etude des effets antimicrobiens des extraits de thym
4-Dtermination de la concentration minimale inhibitrice CMI
0,25 g Lactobacillus bulgaricus (lyophilis) 0,25 Streptococcus thermophilus (lyophilis)
Ensemencement
10 ml 10 ml
Bouillon nutritif Bouillon nutritif
(Extrait de viande (Extrait de viande
+Peptone+NaCl ou +Peptone+NaCl ou
KCL) KCL)
Incubation
Etuve
37C /03 heures
0,2 ml 0,2 ml
Solution mre Solution mre
Ensemencement en tube
Contenant 2 ml (Muller-
Hinton
Extrait pur
Muller-Hinton
2 ml
2 ml
2 ml
2 ml
2 ml
2 ml
20% 40% 60% 80%
Chaque tube 3
Ex : 20 % on ajoute 0,4 de Muller Hinton lextrait 7
pur
Etude des effets antimicrobiens des extraits de thym
5-Dtermination de la concentration minimale bactricide (CMB)
La concentration minimale bactricide dune espce de germe lactique tudi reprsente la plus petite
concentration dextrait de la plante qui laisse 0,01% au moins de survivant de linoculum initial aprs
incubation (Moroh et al., 2008).
Lactobacillus bulgaricus Streptococcus thermophilus
Ferments
9 ml
9 ml
lactiques dans
leau
physiologique
10-4 10-4
Ensemencement
Par strie
Glose Mueller Hinton Glose Mueller Hinton
Incubation
37C/18-24 heures
Dnombrement
8
Le nombre de colonies de bactries obtenu sur la strie de la dilution 10-4 est compar celui de chaque
tube exprimental contenant linoculum, galement ensemenc sur le mme milieu de culture en strie de 5cm
et incub 37 C durant 18 24 heures. Ainsi, le premier tube exprimental dont le nombre de colonies
prsent sur sa strie est infrieur ou gal celui de la dilution 10-4 correspondra la CMB.
