1re STL
Fiche technique n26
LE MILIEU UREE-INDOLE
1. Intrt
Ce milieu permet de mettre en vidence les caractres suivants :
prsence dune urase
prsence dune tryptophanase
prsence dune tryptophane dsaminase (TDA)
Ce milieu est utilis pour lidentification des entrobactries (bacille gram -, oxydase -).
Milieu synthtique
2. Composition
Composant
Quantit (g/L)
Rle
Ure
Lecture dun caractre biochimique (substrat de lurase)
L-tryptophane
0,3
Lecture dun caractre biochimique (acide amin, permet la
recherche de lindole et de la TDA)
Chlorure de sodium
Dihydrognophosphate
de potassium
Hydrognophosphate
de potassium
0,5
Rouge de phnol
0,0025
0,1
Source de sels minraux
Maintien de la pression osmotique
0,1
pH
Indicateur de pH
7
3. Principe
recherche de lurase
Lurase dgrade lure selon la raction suivante :
Ure
H2O
2 NH4+
CO32-
Les ions CO32- vont entraner une forte alcalinisation du milieu qui sera rvle par un virage
de lindicateur de pH (le rouge de phnol) sa teinte basique (rouge).
recherche de la production dindole (mise en vidence de la tryptophanase)
La tryptophanase hydrolyse le tryptophane selon la raction suivante :
Tryptophane + H2O indole + acide pyruvique + NH3
Lindole forme un complexe color en rouge en prsence dun ractif : le ractif de Kovacs.
recherche de la tryptophane dsaminase
La TDA dgrade le tryptophane selon la raction suivante :
Tryptophane + H2O acide indole pyruvique + NH3
Lacide indole pyruvique forme un prcipit marron fonc en prsence dun ractif : le
chlorure de fer en solution acide.
4. Ensemencement
Ensemencer avec quelques gouttes de suspension bactrienne ou avec une colonie prleve
lanse sur un milieu solide.
Incubation 24 heures 37.
1re STL
Fiche technique n26
5. Lecture
Recherche de
l'urase
Recherche de
la tryptophanase
(production dindole)
Ajout de ractif de
Kovacs
Ajout de chlorure de
fer III
Recherche de
la TDA
Milieu
Ure-Indole
24h
dincubation
Caractre
recherch
Urase
(lecture aprs
24 heures
dincubation)
Observation
Milieu rouge
Milieu orang
(inchang)
Interprtation
Alcalinisation du milieu
due la dgradation de
lure
Pas dalcalinisation du
milieu
Conclusion
La bactrie possde lurase
Elle est dite urase +
La bactrie ne possde pas lurase
Elle est dite urase -
Aprs avoir effectu la lecture, sparer le milieu ure indole en deux (prlever une partie du milieu et le
transvaser dans un tube hmolyse propre) puis raliser les tests suivants :
1er tube : recherche de la production dindole :
Ajouter 3 gouttes du ractif de Kovacs et effectuer la lecture sans agiter le milieu
Apparition dun
anneau rouge
Prsence dindole.
Le tryptophane a donc
t hydrolys
La bactrie a produit de lindole
Elle est dite indole +
Indole
Lanneau reste
orang
La bactrie na pas produit dindole
Absence dindole
Elle est dite indole -
2me tube : recherche de la tryptophane dsaminase (TDA) :
Ajouter 3 gouttes du ractif (= chlorure de fer III en solution acide) et effectuer la lecture
Coloration
marron fonc
Prsence dacide indole
pyruvique.
Le tryptophane a t
dsamin.
La bactrie possde la tryptophane
dsaminase.
Elle est dite TDA +
TDA
Coloration inchang
Absence dacide indole
pyruvique
La bactrie ne posssde pas la
tryptophane dsaminase.
Elle est dite TDA -
