Mort cellulaire Programme
(Apoptose)
I)
II)
III)
IV)
V)
Introduction-definition
Cytologie de lapoptose
Mcanismes molculaires de lapoptose
Rgulation des voies de signalisation
Pathologies lies une drgulation de lapoptose
[Link]
I)
Introduction-dfinition
XIXme sicle
mort cellulaire :
rle physiologique important
chez les organismes pluricellulaires
(embryogense, mtamorphose)
1964
mort cellulaire programme (dveloppement):
squences dtapes contrles menant une
destruction tissulaire transitoire et localise
1972
apoptose (Grec: tomber, laisser tomber )
terme dsignant la mort cellulaire programme:
rgulation et maintenance des populations cellulaires
dans des conditions physiologiques et pathologiques
[Link]
contextes physio-pathologiques de lapoptoses:
a) dveloppement
production en excs de cellules:
lapoptose permet un remodelage
des organes et tissus
Caenorhabditis elegans ([Link]):
mort de 131/1090 cellules somatiques
Formation des membres:
sparation des doigts par destruction
du tissu msenchymateux interdigital
ablation tissulaire
- disparition de la queue au cours
de la mtamorphose (Anour)
- diffrenciation des organes
reproducteurs (limination des
canaux de Wolff ou Mller)
[Link]
Systme nerveux:
surproduction des neurones et limination par mort cellulaire
pour aboutir un systme nerveux fonctionnel (- 50% des neurones)
motifs dune surproduction cellulaire ?:
quilibre nbr cellules nerveuses/ cellules cibles
et prcision du rseau de connexions neuronal (synaptogense)
comptition entre neurones pour les facteurs de croissance
produits en petites quantits par les cellules cibles
rponses slectives de population de neurones certains facteurs
de croissance
rpression du suicide cellulaire par certain facteurs de croissances
si rceptivit au facteur de croissance faible mort cellulaire
slectivit des connexions synaptiques
[Link]
b) processus physiologiques chez ladulte
rpression de lapoptose par lrythropose
nombre de globule rouge
homostasie cellulaire: constance du nombre de cellule
ex: 100 000 cellules produites/sec par mitoses chez lhomme
= nbr cellules limines par apoptose
95% de la production journalire de lymphocytes B et T
mort par apoptose (slection des lymphocytes fonctionnels)
destruction des cellules:
- dommages svres de l ADN
- infectes
- caractre auto-immun
- signal mitogne inappropri (apoptose/cycle cellulaire)
[Link]
c) processus pathologiques
dysfonctions du programme apoptotique
pathologies diverses:
dfaut :
cancer
maladie auto-immune
propagation des infections virales
excs :
maladies neurodgnratives
SIDA
ischmie
[Link]
II)
Cytologie de lapoptose
Apoptose (processus actif):
contraction cellulaire
condensation de la chromatine
fragmentation de lADN
fragmentation du noyau
maintient de lintgrit des organites
bourgeonnements cellulaires et formation
de corps apoptotiques
maintient de lintgrit mb plasmique
phagocytose des corps apoptotiques
pas de processus inflammatoire
[Link]
C A
mise en vidence de lapoptose:
marquage au bromure dethidium (BET)
fragments
internuclosomiques
terminal deoxynucleotidyl transferase
technique tunnel :
contrle
[Link]
apoptose
autre type de mort cellulaire:
Ncrose (ex: trauma; processus passif)
gonflement cellulaire
destruction des organites
rupture de la mb plasmique
libration incontrle du contenu cytoplasmique
inflammation
[Link]
ncrose
apoptose
III)
Mcanismes molculaires de lapoptose
une famille de protine occupe une place centrale dans le mcanisme
molculaire de lapoptose: les caspases
signal inducteur = signal apoptotique
procaspases initiatrices
caspases initiatrices
auto activation
(inactives)
(actives)
procaspaces effectrices
(inactives)
caspases effectrices
(actives)
Protolyse de substrats (nuclaires, cytoplasmiques)
[Link]
signal inducteur = signal apoptotique:
dclenchement de lapoptose par diffrents stimuli
intra- et extracellulaires:
- mcanismes de rparation de lADN dfectueux
- molcules cytotoxiques ou irradiation
- dfaut de signalisation du cycle cellulaire
- signaux de mort cellulaire (TNF-, FasL, TRAIL...)
[Link]
phase latente (qq heures plusieurs jours)
dbut de phase latente: processus rversible (facteurs de survie)
phase dexcution de lapoptose:
changements morphologiques mort cellulaire
[Link]
dissection gntique du mcanisme apoptotique:
chez [Link]:
mort cellulaire oligomrisation ced-3+ced-4
inducteur
([Link])
ced-3
ced-4
inhibiteur
(mammifres...)
caspases
Apaf-1 (Apoptotic Protease Activating Factor)
= pice principale de lapoptosome
[Link]
([Link])
egl-1
ced-9
(mammifres...)
protines de la famille Bcl-2
(pro- et anti-apoptotiques)
rle important dans la mdiation et la rgulation
des voies de signalisation apoptotiques
[Link]
les caspases:
pro-domaine
DED
DED
procaspase
grande
petite
sous-unit sous-unit
caspase
active
Death Effector Domain
(-8, -10)
caspases initiatrices
(-9, -2)
pro-domaine
CARD
caspases effectrices
(-3, -6, -7)
CAspase
Recruitment
Domain
[Link]
signal extracellulaire
via rcepteur de mort
recrutement des
caspases initiatrices
via leur pro-domaine
signal intracellulaire
[Link]
voie extracellulaire
recrutement de procaspase-8 via
ses DEDs par DISC (Death Inducing
Signaling Complex)
DISC = complexe initi par fixation
des ligands de la famille TNF-
trimrisation du rcepteur
association homophile de FADD
(Fas Associated Death Domain)
avec FAS-R via domaines DD
association homophile de procaspase 8
et de FADD via domaines DED
agrgation de procaspase-8
[Link]
proximit de plusieurs procaspases-8
activations mutuelles par
autoprotolyse
active caspase-8
clivage (activation)
de caspases effectrices
clivages de substrats
[Link]
voie intracellulaire
A) voie mitochondriale de lactivation des caspases:
Procaspases-9 active par des signaux proapototiques mitochondriaux
formation de lapoptosome = complexe protique cytoplasmique
sous linfluence du cytochrome C relargu par la mitochondrie
[Link]
voie intracellulaire
B) formation de lapoptosome et activation:
Cyt C + dATP chgt de conformation de Apaf-1
heptamrisation de Apaf-1
association homophilique procaspase-9/ Apaf-1 via domaines CARD
activation de Caspase-9 par dimrisation
activation protolytique des caspases effectrices
[Link]
voie de signalisation de type I:
- rcepteur TNFR
- adaptateur FADD
- complexe DISC
- procaspase-8
voie de signalisation de type II:
voie I insuffisante pour dclencher lapoptose
amplification par la voie mitochondriale ncessaire
[Link]
Bid (famille Bcl-2) cliv par caspase-8
active le relargage de Cyt C de concert
avec Bax et Bak (pro-apoptose, famille Bcl-2)
activation cascade
des caspases
formation apoptosome
[Link]
voie mitochondriale:
- amplifie la voie des rcepteurs membranaire
- intgre et propage des signaux de mort cellulaire
dorigine intracellulaire (altration de lADN, stress oxidatif,
faibles ressources en mtabolites, mdicaments)
[Link]
altrations de lADN:
activation du facteur de transcription p53
stimule la production de molcules pro-apoptotiques
[BH3 (ex:Bid), Bax, Bak..]
[Link]
mitochondrie:
linduction de lapoptose change la permabilit de la mb interne
(= Transition de Permabilit)
gonflement de la mitochondrie (influx H2O)
rupture de la mb externe
libration de facteur pro-apoptotiques
arrt de la synthse dATP
NADH, NADPH oxids
production de ROS
(Reactive Oxygne Species)
stress oxidatif
(oxidation de lipides, protines, ADN)
[Link]
Transition de Permabilit: mcanisme ?
formation dun pore de transition de permabilit (PTP):
VDAC (Voltage Dependant Anion Channel)
mb externe
(= porine)
ANT (Adenin Nucleotide Translocator)
(exportation dATP contre ADP)
mb interne
lassociation VDAC/ANT gnre des sites de contact
mb ext/ mb int
ou
canaux dans la mb externe:
homodimres Bax ou htrodimres Bax/VDAC
[Link]
Consquences de lactivation de caspases:
(substrats des caspases)
les caspases elles-mmes (procaspases)
des protines du cytosquelette (gelsoline, lamin, fodrine, actine)
des protines de rgulation de lapoptose (Bid, Bcl-2)
des inhibiteurs dendonuclases (Inhiteur CAD = ICAD)
libre la CAD: Caspase Activated DNAse
des protines impliques dans la rgulation du cycle cellulaire (p21, PRb)
des enzymes de rparation de lADN
[Link]
IV)
Rgulation des voies de signalisation
de lapoptose
cellules saines fonctionnelles:
mcanismes de contrle et de blocage de lapoptose
Hypothse 1: les voies de signalisation de lapoptose sont dans un tat
inactif et sactivent quen cas de signal de mort
mais: les composants de lapoptoses sont encods par la plus part des cellules
sous une forme prte lemploi
Hypothse 2: toutes les cellules sont programmes pour lautodestruction
mais survivent par rpression de lapoptose sous linfluence
de facteurs de croissance, dhormones, de nutriments
et en effet: diffrentes molcules anti-apoptotiques ont t caractrises
(et pro-apoptotiques galement)
[Link]
A) famille Bcl-2
Bcl-2 (oncogne): effet anti-apoptotique (autres oncognes prolifration Caire )
(cancers: contrle prolifration cellulaire et apotose)
familles des protines Bcl-2: domaines BH1 BH4:
30 protines de cette famille chez lhomme avec effets pro- ou anti-apoptotique
pro-survie (anti-apoptotiques): Bcl-XL, Bcl-w, A1, Mcl-1
(BH1,2,3,4)
pro-apoptotiques): Bax, Bak, Bok (BH1,2,3) et
Bid, Bim, Bik, Bad, Bmf, Hrk, Noxa,
Puma, Blk, BNIP3, Spike (BH3 only )
domaine suffisant pour
induire la mort cellulaire
[Link]
mode daction de la famille Bcl-2:
[Link]
interaction ced-9/caspases
dplacement de
egl-1 ced-9
inhibition apoptose
desinhibition de lapoptose
mammifres
pas dinteractions Bcl-2/Apaf-1
[Link]
les Bcl-2 antiapoptotiques
chez les mammifres:
contrle du relargage
du cytochrome C,
de lintgrit mitochondriale
[Link]
Double knock-out Bax et Bak (pro-apoptotiques):
diminution de lapoptose pdt le dveloppement
accumulation de cellules surnumraires (cerveau et cellules immunes)
celulles Bax -/- Bak -/- : insensibles aux irradiations !!
Bax
Bak
canaux propres
particicipation au
PTP
[Link]
permabilit
mb externe Mito
protines anti-apoptotique famille Bcl-2
bloquent (Bax, Bak,...) via interaction domaine BH3
antagonise les effets de Bcl-2
oligomrisation
Bax ou Bak
[Link]
A) famille IAPs
Inhibitor of Apoptosis Proteins (et aussi Bcl-2 et Bcl-XL)
+
NF-B: facteur de transcription (rgulateur du systme immun)
protines IAP: domaine BIR
domaine RING
inhibition caspases 3, 7, 9
catalysent leur propre ubiquitinisation
dgradation (protasome)
[Link]
[Link]
V)
Pathologies lies une drgulation de lapoptose
dfaut
cancer:
accumulation de cellules cancreuses,
rsistances aux mdicaments,
autoimmunit:
impossibilit dliminer les lymphocytes autoractifs
excs
neurodgnrescence:
maladies dAlzheimer, Parkinson, Huntington
[Link]
dysfonctions: mutation de gnes impliqus dans linitiation, la mdiation
ou lexecution de lapoptose
mutation Bax et Bak
survie des cellules cancreuses
surexpression de Bcl-2 dans les processus tumoraux
survie des cellules cancreuses
p53: point de contrle important dans lapoptose:
inactiv dans plus de 50% des cancers humain
[Link]
facteur de transcription
supresseur
de tumeur
kinase
stress
gnotoxiques
altrations ADN
dommages ADN rparables: p53 bloque
le cycle cellulaire avt phase S
dommages irrparables: p53 induit lapotose
[Link]
