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doc
CONTRLE DU DEGRE ALCOOLIQUE D'UNE BIERE
Une bire doit rpondre aux critres suivants: - alcool : 4,5 % en volume
1. Dosage de l'alcool par mthode chimique:
On ralise la mthode de rfrence pour les bires faible teneur alcoolique: distillation suivie d'une oxydation sulfochromique.
[Link]:
* Dcarboniquer la bire (agitation mcanique 30 min 20C, ou fiole vide, ou ultrasons) * Prlever 20 mL la fiole jauge, l'introduire dans un ballon distiller. Joindre les eaux de rinage de la fiole. * Distiller et recueillir environ 30 mL de distillat dans une fiole jauge 50 mL. (bain d'eau glace) * Ajuster la fiole avec de l'eau distille.
[Link] de l'alcool:
Dans une fiole d'Erlenmeyer bouchant meri introduire: * 20 mL de solution de bichromate de potassium 33,79 g/L * 10 mL de solution d'acide sulfurique 50 % * 10 mL de distillat Boucher la fiole, attendre 30 min l'obscurit en agitant de temps en temps.
1.3. Dosage de l'excs de dichromate:
* Ajouter 100 mL d'eau distille * Doser par une solution de sel de Mohr environ 135 g/L, en prsence de diphnylsulfonate de baryum.
1.4. Tmoin:
Raliser un tmoin sur 10 mL de solution de bichromate de potassium 33,79 g/L en remplaant la bire par de l'eau.
1.5. Rsultats:
crire les quations du dosage. tablir l'expression littrale du pourcentage volumique en alcool de cette bire. tablir un tableau de rsultats. Calculer le pourcentage volumique en alcool.
Donnes: dichromate de potassium : 294,2 g/mol sel de Mohr FeSO4 , ( NH 4 ) 2 SO4 ,6 H 2O , : 392,16 g/mol masse volumique de l'thanol 15C : 0,794 kg/L Sr = 0,15% et Uc =0,20 % sur le degr alcoolique
[Link]
2 Dosage de l'thanol produit par mthode enzymatique en point final:
Pour ce dosage, la quantit d'thanol dans la cuve doit tre comprise entre 0,5 et 6 g. Principe du dosage: En prsence de l'alcool-dshydrognase (ADH), l'thanol est oxyd en actaldhyde par le nicotinamide adnine dinuclotide (NAD+) ADH actaldhyde + NADH + H+ thanol + NAD+ Grce une seconde raction la semicarbazide, qui pige l'actaldhyde, la premire raction est rendue totale. La quantit de NADH,H+ form est proportionnelle la quantit d'thanol prsent dans le mot de fermentation. Elle est suivie par spectrophotomtrie 340 nm.
2.1. Mode opratoire:
Oprer directement dans les cuves selon le tableau suivant. Raliser deux essais.
Introduire dans des cuves
Tmoin
Essai
solution tampon pH8,7 3,00 mL 3,00 mL solution de NAD 0,10 mL 0,10 mL eau distille 0,10 mL Echantillon E (ventuellement dilu) 0,10 mL Mlanger; aprs environ 3 min temprature ambiante, lire contre l'aire l'absorbance (A1) des solutions. Dclencher la raction par addition de: Solution enzymatique d'ADH 0,05 mL 0,05 mL Mlanger. En fin de raction (10 min temprature ambiante), lire contre l'air l'absorbance (A2) des solutions, immdiatement les unes aprs les autres. Prcautions: Compte tenu de la grande volatilit de l'thanol, la dilution ventuelle de l'chantillon doit tre ralise avec les prcautions suivantes: remplir au 3/4 d'eau distille la fiole jauge, ajouter la prise d'essai d'chantillon en plongeant la pipette sous l'eau, puis complter jusqu'au trait de jauge avec l'eau distille. conserver les chantillons dans la glace pile. Essais doser : une solution talon d'thanol 0,80 g/L (1 essai) la bire dcarbonique (2 essais)
2.2. Rsultats et compte rendu.
Fournir le relev des valeurs exprimentales Justifier la dilution pralable de chaque chantillon ventuellement effectue. tablir la formule permettant de calculer la concentration massique de l'thanol dans la bire en tenant compte de la solution talon.
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tablir la formule permettant de calculer la concentration massique de l'thanol dans la bire en tenant compte de NADH,H+ Faire les applications numriques dans chaque cas et comparer les rsultats obtenus. Le CVde rptabilit de la mthode est valu 5% sur le domaine de concentration concern.
Donnes: trajet optique = 1 cm NADH,H+ = 6300 [Link]-1 ou 630 [Link]-1 Uc = 0,30 % sur le degr alcoolique
[Link]
[Link] Etude d'une bire matriel tiquette Bire 4,5% alcool fiole vide + bouchon appareil pour distiller l'alcool du vin pierre ponce diphnysulfonate de baryum H2SO4 50 % sol. de K2Cr2O7 33,79 g/L K2Cr2O7 33,79 g/L sel de Mohr 135 g/L dans H2SO4 0,1 N pipette de 50 mL fioles de 50 mL glace pile
quantit rpartition 2 L au frigo 8 15
1L+ pompe de 5 mL 2L 3L 15 15 1 bac
15 fl 15 fl
Dosage de l'thanol UV
chantillon E : solution d'thanol 0,8 E g/l (conserver au frigo) 100 mL 2 mL dans la glace (tube bouch) 400 ml 20 ml 20 mL 0,5 mL 0,2 mL
Tampon pH8,7 (cf preparation aprs) Tp pH8,7 Solution de NAD+ 24 mmol/L (frigo) NAD Solution d'ADH (alcool dshydrognase) : ADH
PRPARER AU DERNIER MOMENT 165 mg d'ADH pour 6,0 mL d'eau distille (frigo)
fiole jauge de 20 mL cuves UV grand volume rserve de glace dans le frigo parafilm
Tampon pH8,7 pyrophosphate semicarbazide glycocolle eau
1 bote sur la paillasse
1 3
75 mmol/L 75 mmol/L 21 mmol/L
250 mL 8,37 g 2,1 g 0,4 g qsp250 ml
Matire duvre CPG Chromatographe Hlium Seringue Hamilton Pillulier Solution dthanol 50 g/L ( 50 mL)
