Parasitologia

PRUEBA ELISA
P/ HECES
Graciela Verastegui Zelaya
Waletr Roca Delgado
Luz Nardita Pones Narvaez
¿ Q u é e s ?
n d e a n t í g e n o s o
e r m i t e l a d e t e c c ió
m u n o l ó g i c a q u e p r r a m i e n t a
E s u n a té c n i c a i n v e r t i d o e n u n a h e
p r u e b a s e h a c o n
p e c í f i c o s , , e s t a s p a r a s i t a r i a s
a n ti c u e r p o s e s n ó s t i c o d e d i v e r s a s i n f e c c i o n e
u n a
l p a r a e l d i a g u s o p e r m i t e
f u n d a m e n ta t e e n m u e s t r a s d e h e c e s . S u
s
s , e s p e c i a l m e n o n l o s m é t o d o
in te s ti n a l e s e n s i b l e e n c o m p a r a c i ó n c
e c i s a y
d e te c c ió n m á s p r a d i c i o n a l e s .
a r a s i t o s c ó p i c o s t r
co p r o p
Que parasito se detectan en la prueba ELISA

• Giardia lamblia
• Entamoeba histolytica
• Cryptosporidium spp.
• Strongyloides stercoralis (en algunos kits)
 Principio del método:
La prueba se basa en la interacción específica entre un
anticuerpo (inmovilizado en una placa) y un antígeno
parasitario presente en la muestra. Posteriormente, se añade
un conjugado enzimático y un sustrato cromogénico que
permite visualizar el resultado por cambio de color .
 o f u n c i o n a : A t i e n e p o c i l l o s
Cóm o : L a p l a c a d e E L I S
d e l a n t í g e n e n
1. Captura p o s e s p e c í f i c o s q u e r e c o n o c
e r t o s c o n a n t i c u e r r d i a ,
re c u b i ( p o r e je m p l o , G i a
e c i e r t o s p a r á s i t o s
a nt í g e n o s d
r y p t o s p o r i d i u m ). l h a y
E n t a m o e b a , C n l a m u e s t r a f e c a
- a n t i c u e r p o : S i e
a n t í g e n o u e r p o s
2. Unión s t o s s e u n i r á n a l o s a n t i c
n o s p a r a s i t a r i o s , e
a n tí g e
o s e n l a p l a c a . g o s e a ñ a d e u n
f ija d o e n z i m á t i c o : L u e
i ó n d e l c o n j u g a d a d o ) , q u e
3. A d i c a e n z i m a ( c o n j u g
c u e r p o u n i d o a u n
se g u n d o a n t i .
o m p l e j o f o r m a d o
b i é n s e u n e a l c
ta m
4. Reacción enzimática: Al añadir el sustrato cromogénico, la enzima
reacciona y produce un cambio de color (normalmente azul), cuya
intensidad está relacionada con la cantidad de antígeno presente.

5. Lectura de resultados: Se mide la absorbancia del color en un lector de

ELISA. Si la absorbancia supera el punto de corte establecido por el
fabricante del kit, se considera positivo.
Importancia de la
prueba ELISA: Este tipo de diagnóstico es
1. Alta sensibilidad y especialmente útil en casos
especificidad donde los parásitos se
2. Diagnóstico temprano y encuentran en bajas
confiable concentraciones, están en
3. Reducción del error humano fases no detectables al
4. Aplicación en estudios microscopio o en pacientes
epidemiológicos y tamizajes asintomáticos pero con
masivos potencial de transmisión.
5. Complementa métodos
tradicionales
Muestra y materiales:
Toma de muestra:
• Tipo de muestra: Heces
• Cantidad requerida: De 0.5 a 1 gramo de muestra fecal
Conservación:
• Las muestras deben recogerse en un frasco estéril, sin preservantes.
• Si no se procesan de inmediato, deben refrigerarse a 2-8 °C por un máximo de 48 horas.
• Algunas pruebas permiten el uso de heces fijadas con formol al 10%, dependiendo del fabricante del kit.
Materiales:
• Kit ELISA para detección de antígenos parasitarios
• Placa de microtitulación
• Puntas estériles para micropipeta
• Tubo de dilución o tampón diluyente
• Conjugado enzimático (anticuerpo marcado con enzima, proporcionado por el kit)
• Sustrato cromogénico (comúnmente TMB: tetrametilbenzidina)
• Solución detenedora de la reacción (por ejemplo, ácido sulfúrico diluido)
• Lector de microplacas (espectrofotómetro) con longitud de onda de lectura de 450 nm
Procedimiento:

Pre p a ra ció n d e la m u e s tra añ o d e u n a

1. s (a p ro x im ada m e n te d e l ta m
ca n ti d a d d e h e c e
• Tomar una pequeña
arveja). a d o p o r e l k it h a s ta o b te n er
ta m p ó n d il u y e n te p ro p o rc ion
• Mezclar bien con e l
.
una suspensión homogénea ra r la m ues tr a p a ra e li m in a r s ó li d o s .
e , c e n tr if u g a r o fi lt
• Si el kit lo permit
ió n d e la m u es tr a a la p laca u id a en
2. Adic e n te 10 0 µ L ) d e la m u e s tr a d il
o lu m e n e x a c to (u s u a lm
• Distribuir un v a n ti cu e rp o s .
b ie rt a c o n
los pocillos de la placa recu o s p ro v is to s p o r e l kit.
sy n e g a ti v
• Incluir controles positivo
3. Incubación n te o e n es tu fa (u s u a lm e n te 3 7 °C)
lac a a te m p e ra tu ra a m b ie
• Incubar la p ca n te (ge n era lm e n te 3 0 -6 0 m in u to s ).
o q u e in d iq u e e l fa b ri
durante el tiemp s tá p re sente , s e u n ir á a lo s a n ti cu e rp o s en
p o , s i e l a n tí g en o e
• Durante este tiem
los pocillos.
Procedimiento:

4. Lavado n d e la v a d o p ara eli m in ar

c u id a d o s a m e n te c o n la s o lució
• Lavar los pocillos
s y s u s ta n cia s n o u n id a s .
residuo v ad o s .
h a c e n e n tr e 3 y 5 la
• Generalmente se o
l c o n ju g a d o e n z im á ti c
5. Adición de o a u na en zim a (c o m o p e ro x id a s a ).
u e rp o s ec u n d a ri o u n id
• Añadir el antic e e l p ro toco lo (u s u a lm e n te 3 0 m in u to s).
n te s e g ú n lo in d iq u
• Incubar nuevame
6. Segundo lavado in a r e l ex c es o d el c o n ju g ado.
el p ro c e s o d e la v a d o p ara elim
• Repetir
e l s u s tr a to cr o m o g én ic o
7. Adición d es tá p re s e n te , s e p ro d u c ir á un
a to (c o m o T M B ). S i la e n zima
• Añadir el sustr
co lo r (g e n e ra lm en te a z u l) .
cambio de
 o ced i mi en t o :
Pr
r e s u l t ad o . E l
r e a c c i ó n ) p a r a f i j ar e l
t en c i ó n d e l a a l m e n t e áci d o
8. D e t e n e d o r a ( u s u
l a s o l u ció n d e
•A ñ a d i r l l o .
m b i a a a m a r i
c o l o r a z u l c a
d e l r e s u l t a d o S A a 4 5 0 n m . l k i t.
9. L e c t u r a l e ct o r d e E L I b le c i d o p o r e
n c i a e n u n e c o r t e e s t a
e d i r l a a b s o rb a t r o l y el p u n to d o s , l o s
•M a l o res d e c o n i d e r a n p o s i t i v
a r a r c o n l o s v c o r t e s e co n s p e n d i en d o
• Co m p d e l p u n t od e e d u d o s o s, d e
e s p o r enc i m a n c o n s i de r ar s
• Los v al o r r ca n o sp u ed e
t i v o s ,y l o s c e
e s , n e g a
inferior
e l p r o t o c o l o .
d
Resultado
s
Estos se interpretan a partir de la intensidad del color generado
en los pocillos y del valor de absorbancia obtenido mediante
un lector de microplacas. Si el valor supera el punto de corte
establecido por el kit, el resultado se considera positivo,
indicando la presencia del parásito. En cambio, si está por
debajo, se considera negativo.
Esta técnica permite obtener resultados cuantificables, rápidos
y confiables, facilitando el diagnóstico de parasitosis
intestinales, incluso en fases tempranas o con baja carga
parasitaria.
Resultado
s

GIARDIA LAMBIA

ENTAMOEBA
HISTOLITYCA

CRYPTOSPORIDIUM
SPP
Resultado
s
GIARDIA LAMBIA

ENTAMOEBA
HISTOLITYCA

CRYPTOSPORIDIUM
SPP
 Conclusión
La prueba de ELISA aplicada a muestras fecales es una
herramienta moderna y eficaz en el diagnóstico de parasitosis
intestinales. Su sensibilidad y facilidad de uso la convierten en una
técnica valiosa, especialmente en casos donde los métodos
tradicionales no son concluyentes. Aunque no reemplaza
completamente a las técnicas microscópicas, sí las complementa y
fortalece el diagnóstico integral.
MUCHAS
GRACIAS