Cultivos bacterianos

Test aglutinación
Test inmunocromotagráfico
 Diagnóstico de las
enfermedades
bacterianas

Diagnóstico
Diagnóstico de
clínico laboratorio.
 Diagnóstico
bacteriológico
se inicia

Indicación
médica Muestra
 Toma de muestras

Es el procedimiento que se
lleva a cabo para obtener el
material biológico a investigar
según el proceso infeccioso
que se desea diagnosticar
 Toma de muestras
Cumplir siempre las normas de Bioseguridad
 Toma de muestras
Toma de muestras
de sangre. Toma de muestras
de faringe.
Requisitos para la toma de muestras
1. Antes del tratamiento con
antibiótico o después de
suspenderlo, 48 horas antes de la
toma de muestra.
2. La muestra debe ser representativa
del proceso infeccioso.
3.La muestra debe ser tomada en el
momento adecuado
 Requisitos para la toma de muestras

4. Su cantidad ha de ser suficiente para

realizar un estudio completo
5. Prevenir la contaminación de la muestra

6. Si no se va a llevar al laboratorio
inmediatamente debe utilizarse un
medio de transporte y conservación.

7. La indicación debe llevar los datos de

identificación del paciente.
 Toma de muestras
Colocar la muestra en un recipiente para su
transporte, evitar derrame y mantener las
medidas de bioseguridad apropiadas.
Hisopo con medio Envase estéril de boca ancha
de Stuart
 Toma de muestras
Colocar la muestra en un recipiente para su
transporte, evitar derrame y mantener las
medidas de bioseguridad apropiadas.
Transporte para
Chlamydias Tubo plástico para
Frascos
transporte de muestras
hemocultivos
 TIPOS DE MUESTRAS
1. Sangre: hemocultivo
2. Secreción: heridas, conjuntival,
ótico, vaginal, uretral.
3. L C R
4. Orina
5. Esputo: bacteriológico y BAAR
6. Liquido pleural
7. Liquido amniótico
Métodos de estudios en
bacteriología
 Métodos de estudios en
Bacteriología
1. Directos: Cuando se realiza la
identificación del agente
causal.

2. Indirectos: Cuando se
identifica la respuesta del
hospedero frente al
microrganismo.
Métodos directos de estudio en
bacteriologia

1. Microscopía

2. Aislamiento
en cultivo
3. Detección
del antígeno
4. Biología
molecular
Método directo: examen microscópico

Coloración de Gram
Coloración de Ziehl Neelsen
Campo oscuro
Coloración de Giemsa
 Inmunofluorescencia
Impregnación argéntica
Método directo : cultivo

• Agar sangre
• Agar chocolate
• Medio de CLED
• Caldo soya triptona
• Agar Mac Conkey
• Agar Salmonella Shigella
• Otros
 Métodos indirectos de estudio
en bacteriología
Demostrar respuestas significativas en
el paciente de:

 Anticuerpos: pruebas serológicas.

 Inmunidad mediada por células a un

agente infeccioso: prueba cutánea.
Métodos indirectos.
Determinación de anticuerpos.

La detección de anticuerpos
específicos y sus títulos en
sueros: mono sueros o
sueros pares).
Pruebas serológicas para
determinar anticuerpos

• Inmunofluorescencia.
• Fijación del complemento.
• Radioinmunoensayos.
• Hemaglutinación.
• Ensayos inmunoenzimáticos
• Prueba de Látex
Biología molecular. Diagnóstico rápido

Estudios de ácido nucleico

PCR (amplificación de fragmentos

genómicos).

Análisis de ADN o ARN con enzimas de

restricción. (ER).
Hibridación de ácidos nucleicos
Secuenciación de ácidos nucleicos.
 Diagnóstico rápido.
Métodos de detección de antígenos
bacterianos.
Tiras reactivas, detecta anticuerpos
específicos con fácil interpretación.

 Inmunofluorescencia directa
Estafilococo. Diagnóstico de laboratorio
Muestras:
Dependen de la localización del proceso:

- Pus de abscesos
- Hisopados de heridas
- Secreciones endotraqueales
- Sangre
-Esputo, LCR y otras.
Estafilococo. Diagnóstico de laboratorio
Microscopía frotis:
•Se realiza frotis de la muestra y
coloración de Gram; se observan
cocos Grampositivas agrupados en
racimos.
racimos

•Tiene valor en muestras estériles

Estafilococo. Diagnóstico de laboratorio
Cocos en racimo
(observación al
Cocos Gram positivos
microscopio
(observación de una
electrónico, con
muestra)
tinción de contraste)
Estafilococo. Diagnóstico de laboratorio
Cultivo:

Las muestras deben ser sembradas

en placas de agar sangre, deben
incubarse durante 18 a 24 horas a
temperatura entre 34 y 37ºC en
presencia de oxigeno.
Estafilococo. Cultivo en agar sangre
lisis total de los eritrocitos. Pigmento
amarillo de las colonias
Estafilococo. Prueba de la catalasa,
observe el burbujeo en la lámina
inferior.

Estreptococos

Estafilococos
Estafilococo. Diagnóstico de laboratorio
Identificación: Staphylococcus
aureus

Prueba de coagulasa
positiva
Otras pruebas: manitol, lactosa,
DNA asa,
Estafilococo. Prueba de coagulasa
Coagulasa positiva
 Identificación del
Estafilococo patógeno

Pigmento amarillo dorado

Colonias con beta hemolisis
Prueba de Coagulasa positiva
 Estreptococos beta
hemolíticos y Neumococos
Muestras:

Dependen de la localización del

proceso
--Exudado faríngeo, ótico
--Pus
--LCR, liquido pleural
--Sangre
--Esputos
Estreptococo. Diagnóstico de laboratorio
Microscopía
Frotis: Tinción de Gram
Se observan cocos agrupados en
cadenas grampositivos, en caso de
ser un Neumococo observamos
diplococos lanceolados
grampositivos.
Tiene valor en muestras estériles
Estreptococo. Diagnóstico de laboratorio
Cultivo:

Las muestras deben ser sembradas

en placas de agar sangre, deben
incubarse durante 18 a 24 horas a
temperatura entre 34 y 37ºC en
presencia de oxigeno.
Streptococcus pyogenes
Cultivo en placa
Coloración de Gram Agar Sangre

Cocos en cadena
Gram positivos
Estreptococo. Cultivo en medio agar
sangre. (β) hemólisis total de los eritrocitos
Estreptococo. Diagnóstico de laboratorio

Pruebas presuntivas:
•Streptococcus pyogenes (grupo A):
sensible a la bacitracina.
•Streptococcus agalactiae (grupo B):
prueba de CAMP positiva
Prueba de CAMP para Streptococcus
beta-hemolíticos

Positivo

Negativo
Estreptococo. Diagnóstico de laboratorio
Prueba comfirmativa de grupo:
Clasificación serológica:

Métodos de aglutinación látex para

determinar los carbohidratos
específicos de grupos.
Diagnóstico. Neumococos

Muestras:

Dependen de la localización del

proceso
--Exudado ótico y conjuntival
--Pus
--LCR y liquido pleural
--Sangre
--Esputos
 Streptococcus pneumoniae

Cocos lanceolados en Aprecie la cápsula

parejas

α hemólisis( lisis parcial de los eritrocitos)

 NEUMOCOCOS.
Cultivo y Antibiograma.
En agar sangre colonias alfa hemolíticas
pequeñas.
Identificación.
Negativo
Prueba optoquina
Biología molecular.

Positivo
Neisseria gonorrhoeae (gonococo)
Diagnóstico de laboratorio

Muestra:
Exudados endocervicales
 Exudados uretral
Exudados conjuntival
Exudados rectal y otros
Neisseria gonorrhoeae (gonococo)
Diagnóstico microscópico.
Cocos arriñonados en
parejas (microscopio
Cocos en parejas Gram electrónico)
negativos arriñonados.
Coloración de Gram
 Morfología del GONOCOCO en Tinción de Gram
Gonococo Se observan diplococos
gramnegativos arriñonados intra y extra
celulares
Neisseria gonorrhoeae (gonococo)
Diagnóstico de laboratorio

Cultivo:
►El cultivo se necesita para confirmar el
diagnóstico, especialmente cuando se trata
de muestras obtenidas de la mujer. Cultivo
en agar chocolate y Thayer-Martin
La incubación se realiza a 37ºC durante 24
a 48 horas, con humedad y un 5% de CO2.
 Neisseria gonorrhoeae (gonococo)
Diagnóstico de laboratorio
Pruebas de identificación:

1.Prueba de oxidasa + y catalasa +

2.Fermentación de carbohidratos:
• Glucosa: positivas
•Maltosa, lactosa y sacarosa: negativas.
Neisseria meningitidis
(meningococo)

Muestras:
•Sangre
•LCR
•Aspirados de petequias
•Liquido sinovial y pleural
•Exudado nasofaríngeo
•Material de necropsia
Neisseria meningitidis Diagnóstico de
laboratorio.
Microscopía
Frotis: Tinción de Gram
El examen microscópico directo de
los fluidos corporales, exudados y
tejidos por tinción de Gram permite
visualizar los típicos diplococos
arriñonados intra y extracelulares
Gram negativos
Neisseria
Neisseriameningitidis
meningitidisDiagnóstico
Diagnósticodede
laboratorio.
laboratorio.
Examen
Examendirecto
directopor
pormicroscopia:
microscopia:
Se
Seobservan
observandiplococos
diplococosGram
Gramnegativos
negativosarriñonados
arriñonados
intra
intrayyextracelulares.
extracelulares.
Neisseria meningitidis Diagnóstico
de laboratorio.
Cultivo:
•Para cultivo de muestras estériles,
se emplean agar-chocolate, agar y
caldo de Mueller- Hinton, en
atmósfera húmeda de 35 a 37
grados C y con 5 a 10 % Co2.
 Neisseria meningitidis
Diagnóstico de laboratorio.
Pruebas de identificación

1.Prueba de oxidasa + y catalasa +

2.Fermentación de carbohidratos:
•Glucosa y maltosa: positivas
•Lactosa y sacarosa: negativas.
 Neisseria meningitidis
Diagnóstico de laboratorio.

Fermentación de
carbohidratos:
•Glucosa y maltosa:
positivas
• Lactosa y sacarosa:
negativas.
Paciente de 5 años de edad que acude al
cuerpo de guardia, la madre refiere que
presenta fiebre, cefalea y ha tenido dos
vómitos. Después del examen médico se
concluye que el paciente debe ser
trasladado a un hospital pediátrico por la
sospecha de una meningoencefalitis
bacteriana.
a)¿Qué muestras Ud. tomaría para
confirmar el diagnóstico y que bacterias
causan la enfermedad?
Escherichia coli.
Bacilos Gram negativos
(Muestra de heces) E. coli (microscopio electrónico)
Bacilos con flagelos
Bacilos flagelados.
Observación al
microscopio electrónico
Salmonella enterica Bacilos, observación al
microscopio electrónico
Shigella diseteriae
 Cultivo de
enterobacterias
Medio agar Mac Conkey.
Escherichia coli, colonias Medio agar SS,
rojas. Salmonella enterica colonias de Shigella
colonias blancas. dysenteriae
Enterobacterias

Muestras: según forma clínica

y enterobacteria que lo causa

•Sangre
•LCR
•Heces
•Orina
•Líquidos orgánicos
•Material de necropsia
 Cultivo: Se utilizan diferentes
medios de cultivo diferenciales,
selectivos, universales

Identificación:
• Pruebas bioquímicas

• Pruebas serológicas

Antibiograma
Muestras :
Heces recién emitidas y muestras
tomadas del recto con hisopos.

 Cultivo: Se utilizan diferentes

medios de cultivo
• Identificación: pruebas bioquímicas
y serológicas.
• Antibiograma
Formas clínicas de las salmonelas

Fiebres intestinales
Salmonella typhi agente causal
SALMONELAS de la Fiebre tifoidea

Septicemia.

Enterocolitis
•Depende de la forma clínica y el
momento de evolución de la
enfermedad
 Muestras

1ra semana,
sangre
(Hemocultivo) 3ra semana
2da semana Heces fecales y
Orina y médula bilis
ósea.( urocultivo, ( coprocultivo
(medulocultivo) bilicultivo)
 Septicemia
Muestras

Sangre ,
para
Hemocultiv
o desde el
inicio de la
enfermedad
 Muestras

Heces recién emitidas enviadas

de inmediato al laboratorio
(coprocultivo), desde el inicio de
la enfermedad.
Localizaciones
extra intestinales:
LCR, orina,
sangre, pus Portador
crónico de
Salmonella typhi:
Heces y bilis
Cultivo de enterobacterias
Cultivo de enterobacterias
PROXIMA ACTIVIDAD DOCENTE
Conferencia
SUMARIO:
• Bacilos gramnegativos no fermentadores:
Pseudomonas y Acinetobacter.
• Vibrio cholerae y parahaemolyticus. Plesiomonas,
Aeromonas, Campylobacter, Helicobacter pylori.
• Bacilos grampositivos aerobios: Corinebacterias,
Listeria y Bacillus.
• Bacilos grampositivos anaerobios: Clostridium
perfringens y tetani.
• Clostridium botulinum y Actinomyces.
 La bibliografía básica: capítulos:
Pseudomonas Capítulo 29
Acinetobacter Capítulo 30
Vibrios: Vibrio cholerae, Capítulo 32
V.parahaemolyticus
Plesiomonas. Aeromonas Capítulo 33
Campylobacter . Helicobacter Capítulo 34
pylori
Corynebacterium Capítulo 21
Listeria Capítulo 21
Bacillus Capítulo 22
Clostridios Capítulo 23
Actinomyces Capítulo 35
Gracias