CRISPR/CAS9
¿Qué es la tecnología CRISPR/Cas9
y cómo nos cambiará la vida?
• La tecnología CRISPR/Cas9 es una herramienta
molecular utilizada para “editar” o “corregir” el
genoma de cualquier célula. Eso incluye, claro
está, a las células humanas.
• algo así como unas tijeras moleculares que son
capaces de cortar cualquier molécula de ADN
haciéndolo además de una manera muy precisa y
totalmente controlada.
• Esa capacidad de cortar el ADN es lo que permite
modificar su secuencia, eliminando o insertando
nuevo ADN.
Las siglas CRISPR/Cas9 provienen de
Clustered Regularly Interspaced Short
Palindromic Repeats.
en español “Repeticiones Palindrómicas
Cortas Agrupadas y Regularmente
interespaciadas.”
Cas9, es el nombre de una serie de
proteínas, principalmente unas
nucleasas, que las llamaron así por
CRISPR associated system (es decir:
“sistema asociado a CRISPR”).
¿Cómo surgió?
• Todo comenzó en 1987 cuando se publicó un
artículo en el cual se describía cómo algunas
bacterias (Streptococcus pyogenes) se
defendían de las infecciones víricas.
• Estas bacterias tienen unas enzimas que son
capaces de distinguir entre el material
genético de la bacteria y el del virus y, una
vez hecha la distinción, destruyen al material
genético del virus.
• Sin embargo, las bases de este mecanismo no
se conocieron hasta más adelante, cuando se
alinearon los genomas de algunas bacterias y
otros microorganismos.
Utilidad del sistema CRISPR/Cas9 de edición del
genoma para el desarrollo de tratamientos en
enfermedades hereditarias
El sistema CRISPR/Cas9 de edición del genoma, reconocido
como el avance tecnológico del 2015, presenta una gran
versatilidad y puede potencialmente ser adaptado según el
objetivo de la investigación o, en el futuro, de su aplicación
terapéutica.
El sistema CRISPR-Cas9 consta de dos componentes
básicos:
• una enzima, Cas9, especializada en cortar el ADN
• y un ARN guía que le indica a la enzima dónde actuar.
Una vez que el fragmento de ADN de interés es
identificado y el ADN cortado,
la rotura en el ADN es reparada por la célula.
Esta reparación resulta en la aparición de
mutaciones de inserción o deleción, que si están
localizadas dentro de un gen pueden dar lugar a
la pérdida de producción de la proteína que
codifica.
Así, la primera aplicación es la de inhabilitar
genes.
Sin embargo, si se proporciona a la célula una
molécula de ADN que sirva como molde durante
la reparación, a la que se ha añadido un cambio,
la célula lo copiará y el cambio quedará
incorporado en el ADN.
Esta segunda aplicación, la introducción de
cambios específicos en posiciones concretas
supone uno de los aspectos más prometedores
de la técnica, ya que permitiría corregir errores
en los genes responsables de causar
enfermedades.
Además, el sistema también puede ser
utilizado para regular la expresión génica, o
incluso para introducir modificaciones
epigenéticas,
inactivando la actividad nucleasa de Cas9 e
incorporándole módulos que interaccionen con
elementos reguladores de la expresión génica o
capaces de llevar a cabo cambios en metilación
o modificaciones de las histonas.
El complejo CRISPR/Cas9 está
siendo usado para múltiples fines,
como por ejemplo:
• como herramienta para inactivar
microARNs, involucrados en la
regulación de diversos genes
incluidos genes asociados a distintos
tipos de cáncer (Chang et al, 2016),
• creación de virus oncolíticos, con un
gran potencial aplicativo debido a su
especificidad (Yuan M et al, 2016) o
método para detectar y modificar in
vivo genes que intervienen en el
cáncer de páncreas. (Friedrich et al,
2016)
Además, el sistema CRISPR-Cas9 ha
sido usado para la corrección de una
mutación conocida en el cromosoma
X relacionada con la hemofilia
tipo B.
En este caso, sin embargo, no se ha
logrado aún un efecto terapéutico ya
que causó hepatotoxicidad; (Guan et
al, 2016)
.
Estas repeticiones estaban
separadas entre sí mediante
unas secuencias denominadas
“espaciadores” que se parecían
a otras de virus y plásmidos.
Justo delante de esas
repeticiones y “espaciadores”
hay una secuencia llamada
“líder”.
Estas secuencias son las que se
llamaron CRISPR (“Repeticiones
Palindrómicas Cortas Agrupadas
y Regularmente
interespaciadas”). Muy cerca de
este agrupamiento se podían
encontrar unos genes que
Cuando un virus entra dentro de la
bacteria toma el control de la
maquinaria celular y para ello
interacciona con distintos
componentes celulares.
Pero las bacterias que tienen este
sistema de defensa tienen un
complejo formado por una proteína
Cas unida al ARN producido a partir
de las secuencias CRISPR.
Entonces el material génico del virus
puede interaccionar con este
complejo. Si ocurre eso, el material
Las proteínas Cas son capaces de coger una pequeña parte del ADN
genético viral es inactivado y
viral, modificarlo e integrarlo dentro del conjunto de secuencias CRISPR.
posteriormente degradado.
De esa forma, si esa bacteria (o su descendencia) se encuentra con ese
mismo virus, ahora inactivará de forma mucho más eficiente al material
genético viral. Es, por lo tanto, un verdadero sistema inmune de
bacterias.
Todo comienza con el diseño
de una molécula de ARN
(CRISPR o ARN guía) que
luego va a ser insertada en
una célula.
Una vez dentro reconoce el
sitio exacto del genoma
donde la enzima Cas9
deberá cortar.
El proceso de editar un
genoma con CRISPR/Cas9
incluye dos etapas.
En la primer etapa el ARN
guía se asocia con la enzima
Cas9.
Este ARN guía es específico Entonces actúa Cas9, que es una
de una secuencia concreta enzima endonucleasa (es decir, una
del ADN, de tal manera que proteína que es capaz de romper un
por las reglas de enlace en la cadena de los ácidos
complementariedad de nucléicos), cortando el ADN.
En la segunda etapa se activan al menos dos
mecanismos naturales de reparación del ADN
cortado.
El primero llamado indel (inserción-
deleción) hace que, después del sitio de corte
(la secuencia específica del ADN donde se unió
el ARN guía), bien aparezca un hueco en la
cadena, bien se inserte un trocito más de
cadena.
Esto conlleva a la perdida de la función original
del segmento de ADN cortado.
Un segundo mecanismo permite la
incorporación de una secuencia concreta
exactamente en el sitio original de corte. Para
esto, hemos de darle a la célula la secuencia
trabajo de investigaciones:
American Journal of Human
Genetics
En el trabajo de investigación:
• En primer lugar, el equipo adaptó el sistema
CRISPR/Cas9 para aumentar la cantidad de
utrofina, (un modificador de la distrofia muscular
de Duchenne).
• Para ello fusionaron una enzima Cas9 inactivada a
un elemento activador de la transcripción y
utilizaron un ARN guía dirigido hacia el promotor
del gen que codifica la utrofina.
A continuación utilizaron el sistema para eliminar de
forma selectiva el alelo dominante negativo del gen
FGFR3 (El receptor 3 del factor de crecimiento de
fibroblasto) responsable de la acondroplasia en
fibroblastos de un individuo afectado por la condición.
En este caso, introdujeron en las células la enzima
Cas9 funcional y un ARN guía complementario al alelo
patogénico de manera que la nucleasa identificara
Por ejemplo, en un reciente estudio, el equipo
de Juan Carlos Izpisúa Belmonte, en el
Instituto Salk de Estudios Biológicos,
rediseñó el sistema CRISPR para
identificar el material hereditario del VIH
y destruirlo.
Los investigadores consiguieron eliminar tanto
las copias del material hereditario del virus
libre en el interior de la célula tras la infección,
como las integradas en el genoma de las
células inmunes utilizadas en el estudio.
“Eliminando el virus en las etapas tempranas de su
ciclo vital se puede prevenir la infección de las células
humanas de una forma análoga al funcionamiento de
las vacunas convencionales.”
Debido a la alta tasa de mutación del VIH, el
siguiente paso del equipo de Izpisúa será evaluar la
efectividad de incluir más fragmentos de
reconocimiento del ARN viral para reducir las
probabilidades de que el virus desarrolle resistencia
Un trabajo dirigido por investigadores de la
Universidad Emory,
ha adaptado el sistema CRISPR para eliminar el
ARN del virus de la hepatitis, consiguiendo reducir
la progresión de la infección en células hepáticas.
Igualmente, se están realizando
estudios donde se utiliza el sistema
de edición genómica CRISPR-Cas9
en el sistema nervioso central,
con el fin de elucidar cómo las
mutaciones genéticas juegan un rol
importante en las enfermedades
tanto neurodegenerativas como
psiquiátricas
De la misma forma, se están
estudiando errores congénitos
que producen cataratas. Gracias al
complejo CRISPR/Cas9 se ha iniciado
el diseño de una nueva herramienta
que va a servir tanto para el
despistaje de esta patología, como
también para generar un tratamiento
definitivo. (Yuan L et al, 2016)
Por otro lado, recientemente se
En resumen, el complejo
enzimático CRISPR/Cas9 es una
herramienta multi displinaria en el
campo de la medicina, que está
ayudando a revolucionar tanto en
el diagnóstico como tratamiento de
diversas enfermedades con base
genética.
