Moléculas de Interés Biológico

 Proteínas---------------------- ENZIMAS
 Glúcidos
 Lípidos
 Ácidos Nucleicos

Catalizan
reacciones
químicas en los
seres vivos
Las reacciones que ocurren en los seres vivos son
posibles de ocurrir en un tiempo razonable gracias a la
presencia de catalizadores

Un CATALIZADOR es una sustancia que en general actúa

acelerando una reacción química, sin formar parte de los
productos finales ni desgastarse en el proceso

Inorgánicos
Biológicos

INORGÁNICO BIOLÓGICO

• Actúan a bajas concentraciones

• No participan de la reacción
SEMEJANZAS
(o lo hacen transitoriamente y se recuperan
inalterados)

DIFERENCIAS Inespecífico Muy específicos

¿COMO ACTÚA UN CATALIZADOR?
Un catalizador disminuye la energía de activación requerida
para una determinada reacción

Con
catalizador ΔG: energía liberada en la
reacción no varía por la acción
Sin del catalizador
catalizador
 CATALIZADORES BIOLÓGICOS

99% ENZIMAS RIBOZIMAS

Proteínas globulares, con
estructura 3ª o 4ª Son moléculas de ARN que
son capaces de catalizar
Catalizan la gran mayoría procesos:
de reacciones químicas de
los procesos de la célula • Maduración de ARN
(metabolismo de glúcidos, (splicing)
lípidos, ácidos nucleicos, • Hidrólisis de nucleótidos en
aa, etc) cadenas de ARN (ej. en la
duplicación del ADN)
Pueden actuar dentro de • Formación de la unión
la célula o fuera peptídica (en la síntesis de
proteínas)
 Especificidad de las enzimas
La mayor parte de las enzimas son capaces únicamente
de actuar sobre un sustrato dado o a lo sumo sobre
moléculas muy parecidas entre si

No obstante, existen grados diferentes de especificidad,

que van desde la especificidad absoluta (sólo pueden
actuar sobre un único sustrato) a la especificidad relativa
de aquellas otras que reconocen determinado grupos
químicos

ejemplo
s

Especificidad absoluta Especificidad Relativa

Estereoisómeros: Esterasas: reconocen funciones éster
solo reconoce el Peptidasas: Reconocen uniones peptídicas
isómero D o el Fosfatasas: reconocen funciones éster fosfat
isómero L
Sobre menos compuestos actúe la enzima mas
especifica va a ser
 Clasificación y nomenclatura
Existen descriptas casi 8000 tipos de enzimas diferentes

Nomenclature Committee of the

International Union of
Biochemistry and Molecular
Sistema de clasificación en
Biology (NC-IUBMB)
grupos, según el tipo de

E.C. X.X.X.X reacción que catalizan

Enzima individual
Grupo Subgrupo Sub-subgrupo

• E.C.1: oxidorreductasas
• E.C.2: transferasas
• E.C.3: hidrolasas
• E.C.4: liasas
• E.C.5: isomerasas
• E.C.6: ligasas
• E.C.7: translocasas
 Clasificación
E.C.1: oxidorreductasas
Catalizan reacciones de oxidorreducción. Este grupo tiene
26 subgrupos dependiendo sobre qué tipo de enlaces hacen la
oxidorreducción
E.C.2: transferasas
Catalizan transferencias de grupos de una molécula a
otra. Hay 10 subgrupos dependiendo que tipo de grupos
transfieren (por ejemplo fosfato, amina, metilo, carboxilos, etc.)

E.C.3: hidrolasas
Catalizan la ruptura de enlaces químicos mediante el
agregado de una molécula de agua. Este grupo de enzimas
contiene 13 subgrupos dependiendo el tipo de enlace químico
que rompen.
E.C.4: liasas
Catalizan la ruptura de enlaces químicos sin el
agregado de agua. Este grupo de enzimas contiene 8
subgrupos dependiendo el tipo de enlace químico que rompen
 Clasificación
E.C.5: isomerasas
Catalizan reacciones de interconversión de isómeros. Este
grupo tiene 7 subgrupos dependiendo que tipo de isómeros se
producen

E.C.6: ligasas
Catalizan la unión de moléculas con gasto de energía. Este
grupo está formado por 6 subgrupos dependiendo el tipo de enlace
que forma

E.C.7: translocasas
Catalizan la translocación a través de una membrana
(entrada o salida de moléculas). Este grupo es nuevo y está
formado por 6 subgrupos dependiendo el tipo de molécula que se
transloca.
 Nomenclatura
El nombre suele describir la reacción y terminar en “asa”

Comisión
Enzimas

2. Transferasa
7. Transfiere grupos fosfato
1. Grupo funcional como aceptor
(hidroxilo)
 Retomamos conceptos…

PROTEÍNA APOPROTEINA
CONJUGADA (Proteína simple)
Termolábil

GRUPO PROSTÉTICO
(No proteico)

Termoestable
 Coenzimas, grupos prostéticos,
cofactores
Muchas enzimas necesitan para llevar a cabo su acción de
la presencia de una molécula no proteica, en general, de
pequeño tamaño llamadas COENZIMAS

HOLOENZIMA = APOENZIMA + COENZIMA

Enzima activa Porción proteica Porción no proteica
con función termolábil termoestable
biológica

Unido covalentemente Sin unión covalente

Grupo prostético Dializable
No dializable

La coenzima o el grupo
prostético se requiere
para la interacción
correcta entre el
sustrato y la enzima y
resulta esencial
 DIÁLISIS

Coenzim
Muchas coenzimasas
y grupos prostéticos derivan de
vitaminas
 Cofactor
es

Muchas metaloenzimas
requieren el metal para actuar, ya
que:

a) Estabilizan la estructura de la
enzima
b) Facilitan la unión del sustrato
c) Participan de algún modo en la
catálisis

Mg, Fe, Zn, Cu, Ca

 La reacción
enzimática
Las sustancias reaccionantes que serán transformadas,
reciben el nombre de SUSTRATOS

La enzima reconoce de manera específica al sustrato,

interacciona con el o los sustratos , se forma un complejo
transitorio ES, luego se produce la transformación del
sustrato, dando como resultado el o los productos y enzima
libre
La reacción
enzimática

La unión del sustrato

provoca un cambio
conformacional en la
enzima y entonces se
produce la
transformación en
producto
 ¿En qué se basa la especificidad de las
enzimas?
Interacción entre la enzima y el sustrato

Las enzimas son moléculas de gran tamaño y la mayoría

de sus sustratos son moléculas pequeñas

Para interactuar con el o los sustratos y formar el complejo ES la

enzima posee un dominio estructural, un sitio especial donde
interacciona con el sustrato y recibe varios nombres
Sitio activo / Centro activo o centro catalítico / Siti
catalítico
El sitio activo: una cavidad en la estructura
tridimensional

El sitio activo es un dominio formado por aminoácidos de

diferentes ubicaciones en la estructura primaria de una
proteína pero que confluyen en la estructura terciaria de modo
de generar un dominio tridimensional donde puede interactuar el
sustrato
 SITIO
ACTIVO
Interacción específica entre los átomos del sustrato y
los aminoácidos del sitio activo
 SITIO
ACTIVO

Cuando la proteína se pliega los

aminoácidos se aproximan en el
sitio catalítico.
 ¿Como se detecta la presencia de una
enzima?
Se busca algún método experimental para determinar su
actividad
biológica, es decir su capacidad de acelerar una reacción
Aparición de producto en el tiempo

Desaparición de sustrato en el tiempo

La actividad enzimática es una medida de la cantidad de enzima

activa presente. Expresa la cantidad de sustrato convertido por
unidad de tiempo, teniendo en cuenta el volumen de reacción

general, para medir la actividad enzimática se realizan reacciones colorimét

una relación entre la cantidad de producto formado y la intensidad del
Factores que afectan la actividad
enzimática

[Link]ó
n
de Enzima

2.
[Link]
Concentración
s
de Sustrato

[Link]
3. pH
a
 1. Efecto de la concentración de
enzima
¿Cómo sería en el laboratorio?
Serie de tubos con la misma
concentración de sustrato (óptima),
al mismo pH (óptimo), incubados a
la misma T°, pero con cantidades
crecientes de enzima

La actividad
aumenta
linealmente
mientras aumenta
la concentración de
enzima, hasta que
decae porque se
acaba el sustrato
 2. Efecto de la concentración de
sustrato
¿Cómo sería en el laboratorio?
Serie de tubos con la misma cantidad de enzima, al mismo pH y T°
(óptimos), pero con cantidades crecientes de sustrato
 2. Efecto de la concentración de
sustrato

Aunque se agregue
mas sustrato, la
velocidad no
aumenta porque toda
la enzima está
ocupada

Ecuación de Michaellis Menten

 2. Efecto de la concentración de
sustrato
Ecuación de Michaellis Menten

Constante de Michaellis (Km)

El Km para un sustrato es una propiedad exclusiva de cada
enzima y representa la concentración de sustrato con la que se
alcanza la mitad de la Vmax

Es una medida de la afinidad de la enzima por un sustrato

A mayor Km menor afinidad

A menor Km mayor afinidad
Velocidad máxima (Vmax)
Valor máximo de actividad que se puede alcanzar en esas
condiciones de ensayo
 2. Efecto de la concentración de
sustrato
Km: afinidad de la enzima por un
sustrato
Ej. Hexoquinasa y Glucoquinasa

Dos enzimas que catalizan la misma reacción: fosforilación de

glucosa
Glucosa + ATP Glucosa 6P + Pi

Hexoquinasa Km: 0,1 mM Hexoquinasa es más afín por el

Glucoquinasa Km: 5 mM sustrato glucosa que la
Glucoquinasa
Especificidad

En contraste la especificidad es mayor para la

Glucoquinasa porque sólo usa como sustrato a glucosa
mientras Hexoquinasa puede fosforilar otros azúcares de 6
carbonos como manosa, galactosa y fructosa

No confundir afinidad con especificidad

 2. Efecto de la concentración de
sustrato
Importancia fisiológica del Km

En condiciones de ayuno,
cuando la concentración de glucosa en sangre es muy baja, actúa la
Hexoquinasa

Después de una comida,

cuando la concentración de glucosa aumenta, puede actuar también
la Glucoquinasa
 3. Efecto del pH en la actividad
enzimática pH 3 5 7 9
¿Cómo sería en el laboratorio? 11
Serie de tubos con la misma
concentración de sustrato (óptima), la
misma cantidad de enzima incubados a
igual Tº por el mismo tiempo, pero el
buffer usado de diferentes pH

Enzima 1

Enzima 2
3. Efecto del pH en la actividad
enzimática
Se alcanza el
estado de
pH óptimo ionización de
sustrato y de
enzima que es el
más apropiado
para la
interacción

A pH mas bajos o mas altos, los grupos no tiene el

estado de ionización adecuado y la actividad
decae

A pH extremos la proteína se desnaturaliza

 3. Efecto del pH en la actividad
enzimática
Ejemplo: Succinato Deshidrogenasa

pH2 pH7 pH13

A pH 13 las cadenas
laterales tienen un estado
de ionización que no
favorece la interacción con
el sustrato
 4. Efecto de la temperatura en la actividad
enzimática
¿Cómo sería en el laboratorio? T° (C°) 10 25 37 60 70
Serie de tubos con la misma
concentración de sustrato (óptima), al
mismo pH (óptimo), con la misma
cantidad de enzima, pero incubados a
diferentes temperaturas

Condiciones
óptimas para la
actividad
enzimática

A T° altas la
actividad
disminuye porque
la enzima
comienza a
A T° bajas las moléculas
desnaturalizarse
tienen poco movimiento y no
se “encuentran”. A medida
que la T° sube, aumenta la
actividad
5. Efecto de moléculas efectoras en la actividad
enzimática
Son sustancias que pueden favorecer la actividad enzimática
(activadores) o disnminuirla (inhibidores)

Irreversibles

La actividad no se puede
recuperar. Ej
organofosforados
Inhibidores (insecticidas) Competitivos

No
Reversibles competitivos

La actividad se
puede recuperar Anticompetitiv
os
5.1 Inhibidor competitivo

Inhibidor y Sustrato se
unen en el mismo lugar
S I de la enzima: El sitio
activo

Compiten por el mismo

sitio de unión

Este tipo de inhibidores por lo general son “análogos del

sustrato”, es decir moléculas que se parecen mucho y por eso
pueden unirse en el mismo sitio
La inhibición puede revertirse aumentando la concentración de
sustrato para eliminar la competencia del inhibidor

Parámetros enzimáticos: = Vmax ↑ Km

5.2 Inhibidor no competitivo
S I
Inhibidor se une a un
sitio diferente del
sustrato

No compiten
La enzima se hace más
lenta

Este tipo de inhibidores producen un cambio conformacional en

la enzima que “deforma” al sitio activo y entonces el sustrato ya
no se puede unir

La inhibición NO puede revertirse aumentando la concentración

de sustrato

Parámetros enzimáticos: ↓Vmax = Km

5.3 Inhibidor anticompetitivo
S I
El inhibidor se une a un sitio diferente del sustrato, pero
solo al complejo Enzima–Sustrato

El inhibidor no puede unirse a la Enzima libre. Cuando se

une el Sustrato, se da un cambio conformacional y
entonces «aparece» el sitio de unión del inhibidor

Parámetros enzimáticos: ↓ Vmax ↓ Km

Medicamentos que actuan inhibiendo enzimas
Por nombrar solo algunos ejemplos…

Medicame
Enzima inhibida Enfermedad
nto
Artritis
Celecoxib Ciclooxigenasa 2 (procesos
inflamatorios)
Digoxina ATPasa de la bomba Na+/K+ Problemas cadíacos

Disulfiram Aldehído deshidrogenasa Alcoholismo

Amrubicin Topoisomerasa 1 Cáncer

Topotecan Topoisomerasa 2 Cáncer

Sildenafilo Fosfodiesterasa 5 Disfunción eréctil

Retrovir Transcriptasa reversa viral HIV

Aciclovir ADN polimerasa viral Herpes

 Enzimas útiles en diagnóstico clínico
Por nombrar solo algunos ejemplos…
Enzima sérica Principal uso diagnóstico
Aminotransferasas : GOT
(aspartato amino Infarto de miocardio
transferasa)
Aminotransferasas: GPT
Hepatitis
(alanina amino transferasa)

Amilasa Pancreatitis aguda

Trastornos musculares
Creatinina quinasa
Infarto de miocardio
Lipasa Pancreatitis aguda

Fosfatasa ácida Cáncer de próstata

Trastornos óseos
Fosfatasa alcalina
Enfermedades hepáticas
Nota: muchas de estas enzimas no son específicas para el diagnóstico
de éstas enfermedades y se evalúa su alteración en el contexto del
cuadro clínico
 Zimógenos

Enzimas que se sintetizan de una forma inactiva

(precursores inactivos) y que para activarse y ser
funcionales, necesitan que se le «corte» un fragmento de la
molécula: normalmente un péptido pequeño en uno de los
extremos Sitio activo
accesible

Sitio activo
oculto

Nosotros lo veremos nuevamente en la QBII, en las enzimas

que participan en los procesos digestivos
 Isoenzimas o isozimas

Las isoenzimas o isozimas son enzimas que difieren en la

secuencia de aminoácidos, pero que catalizan la misma
reacción química
Retomamos el ejemplo de
Hexoquinasa y Glucoquinasa
Proteínas de
secuencia diferente,
codificadas por genes
diferentes, pero la
estructura suele ser
similar y catalizan la
misma reacción
química
En este caso difieren en la
afinidad. Además
A menudo difieren en afinidad, Glucoquinasa está presente
ubicación dentro de la célula, solo en hígado y
regulación, entre otras Hexoquinasa en todos los
tejidos
 Sistemas multienzimáticos
Conjunto de varias enzimas que actúan secuencialmente
conectados por intermediarios comunes, de forma que el
producto de un enzima es a la vez el sustrato del siguiente, y así
sucesivamente

Cadena transportadora de electrones Complejo nitrogenasa

Enzimas reguladoras: Enzimas ALOSTÉRICAS

En casi todas las vías metabólicas existen una o mas

enzimas que actúan regulando esas vías, ajustándose a
las necesidades de la célula

Estas enzimas reguladoras, no sólo cumplen su función

catalizadora, sino que aumentan o disminuyen su
actividad en respuesta a señales específicas

En algunas rutas metabólicas, la

Enzima enzima de la primera etapa es la
reguladora reguladora

Cuando la cantidad de producto

final excede las necesidades, se
frena el funcionamiento de la vía
porque el producto final es el
modulador negativo de la enzima
Modulador
de la primera etapa
negativo
Enzimas ALOSTÉRICAS: ¿Qué son?

Son proteínas poliméricas: con múltiples subunidades y por

lo tanto múltiples sitios activos
Nivel de organización estructural: estructura cuaternaria

Además del sitio activo poseen sitios alostéricos (otros sitios)

a los que puede unirse el propio Sustrato u otro tipo de
compuestos efectores
Su actividad está regulada por otras moléculas efectoras:
efectores o moduladores alostéricos: activadores (+) o
inhibidores (-)
Enzimas ALOSTERICAS: ¿Qué son?

Las enzimas alostéricas presentan cinéticas diferentes

curvas sigmoideas

Enzima Michaeliana
Monómero
(una unidad)

Enzima Alostérica
Polímero
(más de una unidad)
 RECURSOS
DIDÁCTICOS
Presentamos dos videos que esquematizan algunos
conceptos que hemos visto en esta unidad a modo de cierre

Que son las enzimas Resumen Mecanismo enzimático

VIDEO VIDEO