NUTRICIÓN MICROBIANA
MEDIOS DE CULTIVO
MICROBIOLOGIA
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Molécula % del peso seco
(2.8x10-13 g)
• Macromoléculas totales 96
Proteínas 55
Polisacáridos 5
COMPOSICIÓN Lípidos 9.1
QUÍMICA DE DNA 3.1
RNA 20.5
UNA BACTERIA • Monómeros totales 3
Aminoácidos y precursores 0.5
Azúcares y precursores 2
Nucleótidos y precursores 0.5
• Iones orgánicos 1
TOTAL 100%
Microorganismos
CLASIFICACIÓN
Fuente de energía
Óxido-reducción Luz
Quimiótrofas Fotótrofas
Compuestos orgánicos Compuestos inorgánicos
Quimioheterótrofos
Fuente de carbono
Quimiolitótrofos
Fuente de Compuestos orgánicos Compuestos orgánicos
carbono Mixótrofos Fotoheterótrofos
Compuestos
orgánicos CO2
CO2
Quimioheterótrofo Litoautótrofo
Fotoautótrofos
s s
CO2
MACRONUTRIENTES EN LOS MEDIOS DE CULTIVO
Elemento Forma encontrada en el Forma química en los
medio ambiente medios de cultivo
Carbono (C) CO2, compuestos orgánicos Glucosa, malato, acetato,
piruvato, cientos de otros
compuestos o en mezclas
complejas (extracto de
levadura, peptona y otros)
Hidrógeno H2O, compuestos orgánicos H2O, compuestos orgánicos
(H)
Oxígeno (O) H2O, O2, compuestos H2O, O2, compuestos orgánicos
orgánicos
Nitrógeno (N) NH3, NO3, N2, compuestos Inorgánicos: NH4Cl, (NH4)2SO4,
orgánicos nitrogenados KNO3, N2
Orgánicos: Aminoácidos, bases
nitrogenadas de nucleótidos y
otros
MACRONUTRIENTES EN LOS MEDIOS DE
CULTIVO
Elemento Forma encontrada en el Forma química en los
medio ambiente medios de cultivo
Fósforo (P) PO43- KH2PO4, Na2HPO4
Azufre (S) H2S, compuestos Na2SO4, Na2S2O3, Na2S, cisteína
orgánicos de S, metales u otros compuestos orgánicos
(FeS, CuS, ZnS, NiS y con azufre
otros)
Potasio (K) K+ en solución o varias KCl, KH2PO4
sales
de K
Magnesio Mg2+ en solución o varias MgCl2, MgSO4
(Mg) sales de Mg
MACRONUTRIENTES EN LOS MEDIOS
DE CULTIVO
Elemento Forma encontrada en el Forma química
medio ambiente en los medios de
cultivo
Sodio (Na) Na+ en solución o como NaCl
NaCl y otras sales de Na
Calcio (Ca) Ca2+ en solución o como CaCl2
CaSO4 y otras sales de Ca
Hierro (Fe) Fe2+ o Fe3+ en solución como FeCl3, FeSO4 y otras
FeS, Fe(OH)2, otras muchas soluciones de fierro
sales de Fe (o Fe3+ EDTA, Fe2+
citrato)
ELEMENT FUNCIÓN CELULAR
O
Cobalto Vitamina B12, transcarboxilasa
Cobre Proteínas, citocromo c oxidasa,
SOD
Manganeso Activador enzimático, SOD.
Molibdeno Enzimas, nitrogenasa de
MICRONUTRIENTE molibdeno, nitrato reductasa.
S EN LOS MEDIOS
DE CULTIVO Niquel Hidrogenasa, monóxido de
carbono deshidrogenasa
Selenio Hidrogenasas, aminoácido
selenio-cisteína.
Tungsteno Formato deshidrogenasa.
Vanadio Nitrogenasa de vanadio.
Zinc Anhidrasa carbónica, alcohol
deshidrogenasa.
VITAMINA FUNCIÓN
Ácido p-amino Precursor del ácido fólico
benzoico (PABA)
Ácido fólico Metabolismo de un carbono,
transferencia de grupos metilo
Biotina Biosíntesis de ácido grasos, beta
descarboxilaciones, fijación de CO2
Niacina (ácido Precursor del NAD+; transferencia de
nicotínico) electrones en reacciones redox
FAC T OR E S D E Cobalamina (B12) Reducción y transferencia de fragmentos
C R E C IM IE N T O de un solo carbono.
Rivoflavina Precursor de FAD, FMN, transporte de
electrones.
Ácido pantoténico Precursor de la CoA
Tiamina (B1) Alfa descarboxilaciones, transcetolasas
Complejo B6 Transformaciones de aminoácidos y
(piridoxal, cetoácidos
piridoxamina)
Grupo Vitamina k, Transportadores de electrones
quinonas (ubiquinonas, menaquinonas, etc)
MEDIOS DE
CULTIVO
Es un conjunto de nutrientes,
factores de crecimiento y
otros componentes que
crean las condiciones
necesarias para el desarrollo
de los microorganismos. La
diversidad metabólica de
estos es tan grande que la
variedad de medios de
cultivo es enorme, no
existiendo un medio de
cultivo universal adecuado
para todos ellos, ni siquiera
refiriéndonos a las bacterias
con exclusividad.
CONSTITUYENTES HABITUALES
AGAR. Se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los
medios de cultivo.
EXTRACTOS. Su preparación consiste en que ciertos órganos o
tejidos animales o vegetales (p.e. carne, hígado, cerebro, semillas,
etc.) son extraídos con agua y calor y posteriormente concentrados
hasta la forma final de pasta o polvo.
PEPTONAS. Son mezclas complejas de compuestos orgánicos,
nitrogenados y sales minerales, que se obtienen por digestión
enzimática o química de proteínas animales o vegetales (soja
caseína carne, etc.).
FLUIDOS CORPORALES. sangre completa, sangre desfibrinada,
plasma o suero sanguíneo, sobre todo para conseguir el primer
aislamiento a partir del hospedador.
SISTEMAS AMORTIGUADORES. Para mantener el pH dentro del
rango optimo del crecimiento bacteriano.
INDICADORES DE PH. Con el objeto de poder detectar variaciones
en el pH debido a fermentaciones u otros procesos.
AGENTES REDUCTORES. Con el objetivo de crear en los medios de
cultivo condiciones que permitan el desarrollo de los gérmenes
microaerofilos ò anaerobios.
AGENTES SELECTIVOS. Para frenar desarrollo de otros
microorganismos.
CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
SINTÉTICOS MEDIOS DE
CULTIVO
USO
COMPOSICIÓN
ESTADO
NATURALES
ó
COMPLEJOS LIQUIDO
SÓLIDO * ENRIQUECIDOS O
NUTRITIVOS
FLUIDO * DE
ENRIQUCIMIENTO
SEMISOLID * SELECTIVOS
O * DIFERENCIALES
* DE TRANSPORTE
* DE
MANTENIMIENTO
COMPOSICIÓN
NATURALES
Ó
COMPLEJOS
Son medios que no tienen una
composición definida. Sangre,
suelo, frutas, etc. o medios que
contengan ingredientes cuya
composición no esté
completamente definida como
el extracto de levadura,
peptonas o el agua de la llave.
Es el ideal para cuando
simplemente se pretende
obtener un buen crecimiento
microbiológico
COMPOSICIÓN
SINTÉTICOS
Se preparan a partir de
ingredientes
químicamente puros y
por lo tanto se puede
conocer exactamente su
composición cualitativa
y cuantitativa. Por su
costo sólo se emplean
en procedimientos
especiales, se emplean
en investigación.
ESTADO (FLUIDO)
Son los que contienen agar en una concentración aproximada a 0.1%, el
medio tiene una consistencia líquida pero la presencia de agar
disminuye la velocidad de disolución de O2 ambiental. Se emplea
generalmente en el cultivo de microorganismos anaerobios y
microaerofílicos.
ESTADO
(LÍQUIDOS)
No contiene ningún agente
gelificante, por lo que los
microorganismos crecen por
todo el medio. El crecimiento
en este tipo de medios es
más rápido puesto que la
movilidad permite acceder
de una forma más fácil a los
nutrientes.
Son útiles en la propagación
de microorganismos pero
tienen la desventaja de que
no se pueden detectar
contaminaciones.
ESTADO (SEMISÓLIDOS)
Son los que contienen de entre el 0.2 y el 0.8% de agar, son suaves y
permiten observar la movilidad de los microorganismos. Esta
consistencia es utilizada en los medios de transporte, las pruebas de
movilidad, pruebas bioquímicas y pruebas genéticas.
ESTADO (SÓLIDOS)
Son los que contienen entre 1.5 a 2.0% de
agar, esto los hace tener una consistencia dura
y forman un soporte para el crecimiento
microbiano. Se emplean para cultivo,
aislamiento, diferenciación, cuantificación,
pruebas de sensibilidad y en algunos casos
para conservación (inclinados).
El crecimiento se desarrolla en la superficie del
medio. Estos medios pueden depositarse en
placas de Petri o en tubos de ensayo.
USO
(GENERALES Ó
NUTRITIVOS)
Permiten el crecimiento de
la mayoría de los
microorganismos, por ser
muy generales. Son usados
normalmente como rutina
para todo tipo de bacteria.
Es muy útil porque
permanece sólido incluso a
relativamente altas
temperaturas. Por ejemplo:
agua de peptona, caldo de
tripticasa-soja,
USO (DE ENRIQUECIMIENTO)
Son medios líquidos que favorecen o permiten la multiplicación de las
bacterias cuando la muestra obtenida es muy pobre, por ejemplo:
Caldo tioglicolate, favorece el crecimiento de las bacterias anaeróbicas.
Caldo tetrationato favorece crecimiento de bacterias microaerófilas.
Los caldos bilis y de Muller-Kauffman, favorecen el crecimiento del género
Salmonella.
USO
(ENRIQUECIDOS)
Son medios simples o
comunes, a los que se le
añaden ciertos elementos
como sangre, suero, líquido
ascítico, huevo, glucosa,
vitaminas, etc. lo que permite
el aporte de factores de
crecimiento o sustancias que
neutralizan agentes
inhibidores del crecimiento en
bacterias exigentes
nutricionalmente, entre
algunos ejemplos: agar sangre,
medio de Löwenstein-Jensen,
enriquecido con huevo para
facilitar el crecimiento de
Mycobacterium; agar
desoxicolato lactosa (DLA),
enriquecido con lactosa y
desoxicolato.
USO (SELECTIVOS)
Se consiguen añadiendo al agar nutritivo compuestos químicos nocivos para algunas
bacterias cuyo crecimiento no es de interés o también mediante una alteración de las
condiciones físicas del medio, entre algunos ejemplos tenemos
• El agar Mac Conkey que contiene cristal violeta.
• Thayer-Martin medio selectivo para Neissar, ya que este posee antibióticos como la
vancomicina colistina y nistatina.
• Caldo lactosado bilis verde brillante en donde la bilis inhibe el crecimiento de
bacterias gran positivas.
• Löwenstein-Jensen con verde de malaquita es selectivo para Mycobacterium.
USO
(DIFERENCIALES)
A estos medios se le adiciona
sustancias para que solo crezcan
ciertas bacterias y estas, al actuar
sobre alguna de las sustancias
adicionadas, permiten observar
macroscópicamente ciertas
propiedades de crecimiento que
ayudan a diferenciar sus colonas de
otras especies diferentes, entre
algunos ejemplos encontramos:
Agar eosina azul de metileno (EMB),
diferencia E. coli (color verde metálico
brillante) de colonias de Enterobacter
aerogenes (color rosado, consistencia
mucosa y crecimiento abundante).
Agar sangre, diferencia variedades de
Streptococcus pyogenes en
Streptococcus betahemolíticos de
Streptococcus alfa hemolítico y gama
hemolítica.
Agar Salmonella-Shigella tiene lactosa
y un indicador de pH que permite
diferenciar las colonias de bacterias
fermentadoras de este disacárido.
USO (TRANSPORTE)
Son un medio de cultivo para microbiología, capaz
de mantener viva una muestra o cepa de
microorganismos por un periodo de tiempo
prolongado, manteniendo a los microorganismos
vivos y sobre todo sin alterar su concentración y
composición.
• Almacenan temporalmente los especímenes que
se transportan al laboratorio para su cultivo.
• Mantienen la viabilidad de todos los organismos
presentes en la muestra sin alterar su
composición.
• Mantienen regulada la falta de carbono, nitrógeno,
y factores de crecimiento orgánico con el fin de
evitar la multiplicación microbiana.
• Se mantiene libre de oxígeno molecular para el
mantenimiento.
USO (PRUEBAS BIOQUÍMICAS)
Son esenciales para la caracterización de especies y cepas de bacterias,
hongos, arqueas y demás organismos microscópicos, ya que son muy
comúnmente utilizadas para determinar aspectos importantes del
metabolismo: qué comen, qué excretan, qué respiran, de qué están
cubiertos, el pH al que crecen, etc.
