SÍNTESIS
DE
PROTEÍNAS
TRADUCCIÓN 1
SÍNTESIS DE PROTEÍNA
La traducción es el paso de la información transportada
por el ARNm a Proteína.
La especificidad funcional de los polipéptidos reside en su
secuencia lineal de aminoácidos que determina su
estructura primaria, secundaria y terciaria.
Los aminoácidos libres que hay en el citoplasma tienen
que unirse para formar los polipéptidos y la secuencia
lineal de aminoácidos de un polipéptido depende de la
secuencia lineal de ribonucleótidos en el ARN que a su
vez está determinada por la secuencia lineal de bases
nitrogenadas en el ADN
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SÍNTESIS DE PROTEÍNA
Los elementos que intervienen en el proceso de
traducción son fundamentalmente:
Aminoácidos,
ARNt (ARN transferentes)
Ribosomas
ARNr (ARN ribosómico y proteínas ribosomales)
ARNm (ARN mensajero)
Enzimas, Factores Proteicos
Nucleótidos trifosfato (ATP, GTP)
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SÍNTESIS DE PROTEÍNA
El primer paso que tiene que producirse es la activación de
los aminoácidos y formación de los complejos de
transferencia.
Los aminoácidos por sí solos no son capaces de reconocer
los tripletes del ARNm de manera que necesitan unirse a
un ARN de pequeño tamaño (constante de sedimentación
4S), ARN adaptador, ARN soluble o ARN transferente.
Crick (1958) postuló la necesidad de la existencia de un
adaptador que acoplará cada aminoácido a su
correspondiente codón.
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Pseudouridina (ψ), metilguanosina (mG), dimetilguanosina
(m2G), metilinosina (mI) y dihidrouridina (DHU, UH2). 15
SÍNTESIS DE PROTEÍNA
ESTRUCTURA DE LOS ARN TRANSFERENTES (ARN-t)
Los primeros estudios sobre la estructura de los ARNt se
realizaron por R. W. Holley y col. (1965) trabajando con el
ARNt de alanina de levaduras.
A partir de sus trabajos se estableció el modelo general de
estructura de los ARNt en (1968).
Las moléculas encargadas de transportar los aminoácidos
hasta el ribosoma y de reconocer los codones del ARNm
durante el proceso de traducción son los ARNt.
Los ARN-t tienen una estructura en forma de hoja de
trébol con varios sitios funcionales:
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SÍNTESIS DE PROTEÍNA
Normalmente el ARNt adopta una estructura de hoja de
trébol plegada en forma de L o forma de boomerang con
varios sitios funcionales:
Extremo 3': lugar de unión al aminoácido (contiene
siempre la secuencia ACC).
Lazo dihidrouracilo (DHU): lugar de unión a la aminoacil
ARNt sintetasa o enzimas encargadas de unir un
aminoácido a su correspondiente ARNt.
Lazo de T ψ C: lugar de enlace al ribosoma.
Lazo del anticodón: lugar de reconocimiento de los
codones del mensajero.
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RIBOSOMAS (ARNr Y PROTEÍNAS RIBOSOMALES)
El reconocimiento entre los tripletes del mensajero y los
anticodones de los ARN-t cargados con su aminoácido, así
como el establecimiento de los enlaces peptídicos entre dos
aminoácidos sucesivos tiene lugar en los ribosomas.
Estructuras o partículas citoplásmicas formadas por la unión de
ARN ribosómicos con proteínas ribosomales.
Se encuentran en la membrana del retículo endoplasmático.
La estructura general consta de: una subunidad pequeña
una subunidad grande
dos sedes: aminoacídica (Sede A) lugar de entrada de los ARN-t
cargados con un aminoácido (aminoacil-ARN-t)
sede peptídica (Sede P) lugar en el que se encuentran los
ARN-t cargados con un péptido (peptidil-ARN-t). 24
SÍNTESIS DE PROTEÍNA
Las constantes de sedimentación de cada subunidad, los
tipos de ARN ribosómico (ARN-r) y las proteínas
ribosomales que forman parte de ambas subunidades en
los ribosomas eucarióticos y procarióticos se indican en la
siguiente grafica:
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SÍNTESIS DE PROTEÍNA
ACTIVACIÓN DE LOS AMINOÁCIDO Y FORMACIÓN DE
LOS COMPLEJOS DE TRANSFERENCIA
La activación de los aminoácidos para formar los
complejos de transferencia es el paso previo necesario
para que pueda comenzar la traducción, y consiste en la
unión de cada aminoácido a su ARNt específico mediante
la intervención de un enzima, aminoacil-ARNt sintetasa
y el aporte de energía del ATP.
aa1 + ARN-t1 + ATP → ARN-t1-aa1 + AMP + Ppi
La unión del aminoácido al ARNt tiene lugar por extremo
3' del ARN-t.
Todos los ARNt en su extremo 3' contienen la secuencia
3' ACC 5'. 26
SÍNTESIS DE PROTEÍNA
Las aminoacil-ARNt sintetasas tienen tres sedes
distintas, una para el reconocimiento del aminoácido,
otra para el ARNt y otra para el ATP.
Debe existir al menos una aminoacil-ARNt sintetasa
diferente por cada ARNt distinto.
El ARNt se une a la aminoacil-ARNt sintetasa a
través del lazo dihirouracilo (DHU).
La especificidad de reconocimiento de las aminoacil-
ARNt sintetasas y el correspondiente aminoácido no
reside en el anticodón del ARN-t.
Esta especificidad reside en el par de bases G y U
que ocupan las posiciones 3 y 70, respectivamente
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del ARN-t.
SÍNTESIS DE PROTEÍNA
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SÍNTESIS DE PROTEÍNA
Una vez activados los aminoácidos y formados los
complejos de transferencia (ARNt cargados con el
aminoácido correspondiente) ya puede comenzar la
síntesis de la cadena polipeptídica y la incorporación
de los aminoácidos.
En este proceso se pueden distinguir tres fases
diferentes:
Iniciación
Elongación
Terminación
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SÍNTESIS DE PROTEÍNA
INICIACIÓN DE LA CADENA POLIPEPTÍDICA
En la iniciación de la cadena polipeptídica intervienen:
ARNt-Formilmetionina, iniciador de la traducción
Subunidades ribosomales
ARNm
Enzimas y factores de iniciación IF1, IF2 e IF3
Fuente de energía como GTP.
Las subunidades ribosomales están separadas cuando no
están ocupadas en la síntesis de polipéptidos.
Para poder iniciar la traducción es necesario que ambas
subunidades se ensamblen.
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SÍNTESIS DE PROTEÍNA
Se pueden distinguir tres fases en el proceso de iniciación:
Fase 1: Unión del mensajero (ARN-m) a la subunidad pequeña
30S de los ribosomas estimulada por la acción del factor IF3.
Fase 2: El ARNt iniciador (ARN-t-Formilmetionina) se une al
factor IF2 y a GTP y se situa en la Sede P.
Fase 3: Unión de las dos subunidades ribosomales 30S y 50S
mediante la hidrólisis del GTP unido a IF2 catalizada por una
proteína ribosomal.
Una vez unidas ambas subunidades se sueltan o disocian los
factores IF2 e IF3.
La función de IF1 no se conoce con exactitud aunque se cree que
interviene en el proceso del reciclado de los ribosomas.
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SÍNTESIS DE PROTEÍNA
Iniciación. Comienza por el triplete iniciador del ARNm (AUG),
que está próximo a la caperuza 5'.
Este triplete va precedido de la secuencia AGGAGG (secuencia de
Shine-Dalgarno ) que es la zona de unión con el ribosoma.
Se forma el complejo de iniciación con los factores de iniciación
(FI) y la energía suministrada por el GTP, la subunidad menor
del ribosoma reconoce la caperuza y se une al ARNm en la
zona proxima al triplete o codón iniciador.
Esta caperuza aporta el ARNt iniciador que a su vez aporta el
aminoácido metionina.
Este ARNt contiene un triplete complementario al AUG, es decir el
UAC, llamado anticodón (la proteína sintetizada contiene en su
extremo el aminoácido metionina) 33
SÍNTESIS DE PROTEÍNA
Una vez encajado el ARNt-metionina, se liberan los FI y
dejan paso a la subunidad mayor del ribosoma,
formandose así el ribosoma completo y funcional.
En él hay dos sitios claves:
- Sitio P (sitio peptidil) ocupado por el ARNt-metionina
- Sitio A (sitio aminoacil) que está libre para recibir un
segundo ARNt (sólo el que su anticodón coincida con el
del codón del ARNm) cargado con un nuevo aminoácido
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SÍNTESIS DE PROTEÍNA
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SÍNTESIS DE PROTEÍNA
ELONGACIÓN DE LA CADENA POLIPEPTÍDICA
Una vez formado el complejo de iniciación se puede comenzar la
elongación del polipéptido.
La elongación o crecimiento de la cadena polipeptídica tiene lugar
en esencia mediante la formación de enlaces péptídicos entre los
aminoácidos sucesivos.
Intervienen en este proceso:
Peptidil-ARN-t
Aminoacil-ARN-t
Ribosomas
ARN-m,
Enzimas, factores proteicos de elongación EF-Tu, EF-Ts y EF-G
Fuentes de energía como GTP.
Se dan cuatro fases esenciales en el proceso de elongación: 36
SÍNTESIS DE PROTEÍNA
Fase 1: El aminoacil-ARNt correspondiente al siguiente triplete del ARNm entra en
la sede A del ribosoma por la intervención del factor EF-Tu. Para ello EF-Tu se
une primero a GTP activándose y después el complejo activado (EF-Tu-GTP)
se une al aminoacil- ARNt.
Luego la hidrólisis de GTP a GDP favorece la entrada del aminoacil ARNt en
la sede A y el complejo EF-Tu-GDP se libera.
Fase 2: La liberación del ribosoma del complejo EF-Tu-GDP es mediada por la
intervención del factor de elongación EF-Ts.
Este factor, EF-Ts, interviene en la regeneración y activación del factor EF-Tu.
Fase 3: Transferencia de la cadena del peptidil-ARNt que está en la Sede P al
aminoacil-ARNt que ha entrado en la sede A. Esta reacción es catalizada por
la peptidil-transferasa.
Después el ribosoma avanza un codón sobre el ARNm en la dirección 5'→3'
(se transloca). Mediado por el factor EF-G, activado por la hidrólisis de GTP.
En esta fase se libera el ARNt descargado de la sede P y al moverse el
ribosoma el péptidil-ARNt recién formado que estaba en la sede A pasa a
ocupar la sede P. 37
SÍNTESIS DE PROTEÍNA
Estas tres fases del proceso de elongación se repiten tantas
veces como aminoácidos posea el polipétido sintetizado menos 38
uno (metionina).
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SÍNTESIS DE PROTEÍNA
TERMINACIÓN DE LA CADENA POLIPEPTÍDICA
La terminación de la cadena polipeptídica se da cuando los ribosomas en su
avance a lo largo del ARNm se encuentran con cualquiera de los
siguientes tripletes de terminación o codones de fin: UAA, UAG y UGA.
En la terminación intervienen los factores de
terminación RF1, RF2, RF3
No hay ARNt que reconozca los tripletes de terminación, son los factores de
terminación los que se encargan de reconocer los codones STOP.
El factor RF1 reconoce codones UAA y UAG y el RF2 a codones UAA, UGA
Cuando el peptidil-ARNt está en sede P los factores de terminación en
respuesta a la existencia de un codón de terminación en el ARNm entran
en la sede A.
Como consecuencia el polipéptido se libera de la sede P, se disocian las dos
subunidades del ribosoma y se libera el ARN-t que estaba en la sede P.
Esta reacción de terminación se lleva a cabo mediante la hidrólisis de GTP.
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