“COOPERATIVIDAD”

ENZIMOLOGIA APLICADA
NOVENO SEMESTRE
ORIENTACION ALIMENTOS

FACULTAD DE QUIMICO-FARMACOBIOLOGIA
U.M.S.N.H.

PRESENTA
D.C. CONSUELO DE JESUS CORTES PENAGOS
SEPTIEMBRE 2023
Cooperatividad: ecuacion de Hill

• La concentración de sustrato puede

influir en la velocidad de reacción de las
enzimas reguladoras,dando lugar a la
mencionada cinética sigmoidea.
Cooperatividad: ecuación de Hill

• El efecto cooperativo se atribuye a que

la enzima presenta varios centros
activos – uno por cada monómero – ya
que puede adoptar dos conformaciones
espaciales distintas; la forma R
(relajada), más activa, y la forma T
(tensa), menos activa, en equililbrio
dinámico.
 Cooperatividad: ecuación de Hill
• La presencia del sustrato puede desplazar el
equilibrio, favoreciendo la adopción de una
de ellas,
Cooperatividad: ecuacion de Hill

Explicación del efecto cooperativo

respecto al sustrato en una enzima
regulador de naturaleza dimérica.

En este caso el sustrato desplaza el

equilibrio hacia la forma R
(cooperatividad positiva).
Cooperatividad: ecuación de Hill
La ecuación simplificada de Hill explica
matemáticamente la cinética sigmoidea, al
suponer la capacidad preferente de la
enzima para unirse simultáneamente a n
moléculas de sustrato, según la ecuación:

E+nS ESn E + Productos

 Cooperatividad: ecuación de Hill

Análogamente a la deducción de la ecuación de

Michaelis, se llega ala expresión:

v = Vm [S]n____
Kn0.5 + [S]n

El sentido químico de K0.5 – análogo al descrito para

Km – es el de aquella concentración de sustrato que
permite a la enzima trabajar a velocidad mitad de la
máxima.
 Cooperatividad: ecuación de Hill
Operando matemáticamente con la ecuación
anterior, se llega con facilidad a la siguiente
expresión:
v = [S] _ n

Vm - v K0.5

Al aplicar logaritmos a la ecuación anterior, se

obtiene la ecuación de una recta en la que n es su
pendiente.
 Cooperatividad: ecuación de Hill
log v = n log [S] - n log K0.5
Vm - v

A n se le denomina coeficiente de Hill.

Si su valor es uno, no existe cooperatividad; si es
mayor que uno, hay cooperatividad positiva; y si
es menor que uno, la cooperatividad es negativa.
Sus valores habituales en los enzimas reguladores
oscilan entre 2 y 3.
La enzima aspartato transcarbamilasa (ATCasa) de E. Coli transforma el

aspartato en carbamilaspartato, siguiendo una cinetica no michaeliana,

respecto al Asp.

Asp (mM) Vel. (nm/min)

Los datos de un ensayo hipotetico se muestran enseguida.
1 0.15
2 1.11
3 2.97
4 5.00
5 6.61
6 7.71
8 8.89
10 9.41
12 9.64
Determinar los valores de Vm y K0.5 en las
representaciones directa y doble reciproca,
calcular el coeficiente de Hill de esta enzima
compleja.

• Necesitamos para doble reciproca:

1/v , 1/S, deducimos Vm y K0.5

• Para la representaciond e Hill requerimos:

Log S, log v_____
Vm - v
v
1/v

Vm

K0.5 1/ K0.5

S 1/S
log v___

Vm - v tg = n

log [S]
 Efectores alostéricos

• Las enzimas reguladoras modifican su

actividad catalítica al fijar determinados
ligandos sobre el centro activo: sustrato
natural, sustratos análogos, inhibidores
competitivos,...

• Estos ligandos se podrían denominar

“ligandos homotrópicos”
 Efectores alostéricos
• Con frecuencia los ligandos u otros
compuestos pueden fijarse a centros
diferentes del “centro catalítico”, llamados
“centros alostéricos” (alostérico significa
“en otro lugar”).
• Estos ligandos serán “heterotrópicos” y
también son capaces de modificar la
actividad catalítica de las enzimas
reguladoras.
 Efectores alostéricos

• Los “inhibidores alostéricos” disminuyen o

anulan la actividad catalítica de la enzima.
• Los “activadores alostéricos” la aumentan.

• En realidad es más fácil inhibir que activar,

y por ello se considera que la mayoría de
los activadores son, en realidad, eliminación
de inhibiciones previas que tenía la enzima.
 Efectores alostéricos

• La activación o inhibición puede afectar a

diversos parámetros de la cinética
enzimática.
• Entre los modelos clásicos se consideran los
sistemas K, en los que se fe afectada la K0.5 y
los sistemas V, en los que resulta alterada la
velocidad máxima.
Modificaciones en la cinética enzimática
producidas por un activador (A) o un inhibidor
(I) en el sistema K.
v

Vm
+A
+I

[S]
K0.5
Modificaciones en la cinética enzimática
producidas por un activador (A) o un inhibidor
(I) en el sistema V.
v

Vm
+A

+I

[S]
K0.5
 Efectores alostéricos

• Para justificar el comportamiento de las

enzimas reguladoras y la acción de los
activadores e inhibidores alostéricos
sobre ellos, se han propuesto diversos
modelos teóricos, más o menos
adecuados, de los que describiremos
los dos más clásicos.
• Monod (1963) definió a los ligandos
de una enzima que no tuvieran
similitud por el sustrato como
inhibidores alostéricos y postuló que
se unían a sitios distintos de los del
sustrato. De ahí el nombre
alostéricos por “otro sitio”

• De esta forma los equilibrios entre

las formas T y R se pueden alterar
por unión de efectores positivos o
negativos
Modelo de Monod – Wyman – Changeux (1965)
(MWC) de transiciones alostéricas.

• Se considera una proteína dimérica que

podía existir en cualquiera de dos estados
conformacionales, R o T.

• Cada subunidad en este dímero tiene un

sitio de unión para el sustrato S y un sitio
para el efector alostérico, F.
 Modelo (MWC)

• Los promotores están simétricamente

relacionados uno con otro en la proteína, y
la simetría conserva el estado
conformacional de la proteína.

• Los diferentes estados de la proteína, con o

sin ligando unido, están unidos a uno u otro
a través de varios equilibrios.
 Modelo (MWC)
• Así, la población relativa de moléculas protéicas
en el estado R o T es función de esos equilibrios y
la concentración de varios ligandos, sustrato (S), y
efectores (los cuales se unen a FR o FT).
• Cuando la [S] se incrementa, el equilibrio T/R se
da en favor de un incremento de proporción de
conformeros R en la población total (esto es, mas
moléculas protéicas en el estado conformacional
R).
Modelo MWC de
transiciones
alostéricas.
Efectos heterotrópicos alostéricos
Efectos heterotrópicos alostéricos
 Efectos alostéricos heterotrópicos
• A e I unidos a R y T, respectivamente.
• El equilibrio de unión lleva a los cambios en
cantidades relativas de R y T y, de este modo,
las uniones en la curva de saturación de
sustrato.
• Este comportamiento, descrito en la gráfica,
define un sistema alostérico
K.
 Efectos alostéricos heterotrópicos
• Los parámetros de cada sistema son:

(1) S y A (ó I) tienen diferentes afinidades por R

yT

(2) A (ó I) modifica el parámetro K0.5 para S por

la unión de la población relativa de R contra
T.
Modelo concentrado o de simetría (Monod –
Wyman – Changeux) (MWC)

1. La proteína es un oligómero
2. La proteína existe en un equilibrio
entre dos estados: T (tenso) y R
(relajado)
3. La forma T tiene la misma
constante Kt de unión al sustrato
para todos sus sitios.
Modelo concentrado o de simetría (MWC)

4. La forma R tiene la misma

constante Kr de unión al sustrato
para todos sus sitios
5. Kt> Kr
6. El cooperativismo está dado por la
constante de equilibrio entre las
formas T y R, la constante
alostérica, L.
Modelo concentrado o de simetría (MWC)

• La enzima puede adoptar las dos

formas extremas R o T, de acuerdo
con la máxima simetría.
• No existen híbridos RT.
• La unión de un ligando homotrópico
o heterotrópico modifica el
equilibrio:
Tn Rn
 Modelo concentrado o de simetría

• La unión de un ligando homotrópico

o heterotrópico modifica el
equilibrio:
Tn Rn

Esto puede repercutir en la K 0.5 o en la

Vm.
Modelo concentrado o de simetría (MWC)

• Este modelo explica bien la

cooperatividad positiva del
sustrato y la activación o inhibición
alostérica; pero no da cuenta de la
cooperatividad negativa.
Modelo concentrado o de simetría (MWC)
Modelo MWC de
transiciones
alostéricas.
 Efectos alostéricos heterotrópicos
• A e I unidos a R y T, respectivamente.
• El equilibrio de unión lleva a los cambios en
cantidades relativas de R y T y, de este modo,
las uniones en la curva de saturación de
sustrato.
• Este comportamiento, descrito en la gráfica,
define un sistema alostérico K.
 Efectos alostéricos heterotrópicos
• Los parámetros de cada sistema son:

(1) S y A (ó I) tienen diferentes afinidades por R

yT

(2) A (ó I) modifica el parámetro K0.5 para S por

la unión de la población relativa de R contra
T.
Modelo secuencial (Koshland – Nemethy
– Filmer) 1966 (KNF)
1. En ausencia de ligando la proteína
existe como una única conformación
2. Cuando el ligando se une, induce
un cambio conformacional que es
trasmitido al resto de la enzima
modificando las constantes de
afinidad
3. El modelo de KNF= modelo de
ajuste inducido
 Modelo secuencial (KNF)

• Los cambios T R son

progresivos.
• Existen conformaciones hibridas
RT.
• La unión de los ligandos modifica
la subunidad que los recibe pero
no necesariamente la afinidad de
las otras unidades.
 Modelo secuencial (KNF)

• Este modelo explica las

cooperatividades positiva o
negativa, porque la presencia de
sustrato en una subunidad puede
favorecer o dificultar la fijación de
otra molécula de sustrato en las
otras subunidades.
 Modelo secuencial (KNF)

En el modelo secuencial, la presencia del sustrato o de

los efectores alostéricos puede desplazar el equilibrio
T2 TR R2
en uno u otro sentido.
 Manfred Eigen
(1967)

''Por sus estudios acerca de las

reacciones químicas de vida corta,
que tienen lugar debido a la
disturbación del equilibrio en
impulsos de energía cortos"