VALIDACION DE TÉCNICAS
ANALÍTICAS
Jose Carlos Fuentes Fuentes
LISTA DE PRUEBAS CON
ESPECIFICACIONES TECNICAS CRITERIOS DE ACEPTACIÓN
OTROS
NUMÉRICOS RANGOS
CRITERIOS
MATERIAL O SUSTANCIA ES CONSIDERADO
ACEPTABLE PARA EL USO PROVISTO
Incluye ensayos generales y específicos según el
material.
Ensayos Generales Ensayos Específicos
Descripción Disolución / Desintegración
Identificación pH; volumen; dureza, agua;
Contenido Uniformidad de dosis
Análisis/Prueba/Ensayo Impurezas Contenido microbiano
CLASIFICACION DE METODOS SEGÚN FUENTE
1.Métodos Normalizados ó
Farmacopeicos
Desarrollados por un
normalización organismo de u
reconocido que son otrogeneralmente
aceptados por organismo
el sector técnico
correspondiente y se consideran
oficiales. F. Americana USP
F. Británica BP
F. Europea
F. Alemana
F. Internacional
F. Helvética
F. Belga
F. Coreana
2. Métodos Normalizados modificados
Métodos que siendo normalizados han sido modificados en sus
condiciones analíticas.
CLASIFICACION DE METODOS SEGÚN FUENTE
3. Métodos Normalizados de uso fuera de su alcance
Métodos que siendo normalizados se han adaptado a
matriz diferente.
pos de Ej. Método tabletas en Cápsulas; Métodos de Activo en
Méto Producto Terminado
egún
Fuent
4. Métodos Propios
Métodos analítico desarrollados por
el Laboratorio.
TIPO DE METODOS SEGÚN PROCESO
FISICO QUIMICOS MICROBIOLOGICOS
Cromatográficos
HPLC / UPLC / Gases / Potencia Microbiana
HPLC – MASA / GC - MASA
Espectrofotométricos Endotoxinas
UV-VIS / Abs. Atómica /
Fluorescencia
Esterilidad
Potenciométricos
Recuento Microbiano
Volumétricos
Características de funcionamiento de un método analítico
Características de fiabilidad.- c ) La dispersión de una serie de resultados
Son los que demuestran la capacidad de un método alrededor del valor medio o central
analítico para mantener a lo largo del tiempo los (precisión)
criterios fundamentales de validación
d) La diferencia entre el valor hallado en el
a) La capacidad de un método para
análisis y el valor verdadero
determinar el analito sin interferencia de
( exactitud)
impurezas ,productos de degradación,
e) La cantidad mínima de analito requerida para
excipientes u otras sustancias presentes
obtener un resultado significativo
en la muestra (Selectividad).
(límite de detección y límite de
b) La proporcionalidad entre la
cuantificación)
concentración del analito y respuesta
del instrumento (linealidad y rango)
Características de funcionamiento de un método analítico
Características de practicabilidad. Características de idoneidad.- Son el
Son los que deciden si el procedimiento conjunto de parámetros que garantizan
analitico es fácil o difícilmente que el sistema responde en el momento
realizable en la práctica. del análisis a los requisitos fijados en la
validación del método .
Esta relacionado con las BPL. (robustez)
CATEGORÍAS
(SEGÚN DIFERENTES PROCEDIMIENTOS DE PRUEBA) USP
PROCEDIMIENTO CATEGORÍA
Cuantificación de:
Componentes principales del fármaco a granel
I
Ingredientes activos (incluyendo conservantes
en productos terminados)
Determinación y/o Cuantificación o Pruebas de Límite de:
Impurezas de fármacos a granel II
Productos de Degradación en productos terminados
Características de Desempeño (Ejem.):
Prueba de Disolución III
Liberación de Fármacos
Identificación IV
CATEGORIA DE METODOS PARA VALIDACION
Categoría I Categoría II
Pruebas de Valoración o Contenido Pruebas de Contenido de Impurezas:
- Pruebas Cuantitativas
del Principio Activo.
Actividad o Potencia. - Pruebas Límite
Categoría III Categoría IV
Para Pruebas de Desempeño: Para pruebas de Identificación:
- Disolución - TR
- Uniformidad de Dosis - Espectro UV-VIS
- CCF
DATOS REQUERIDOS PARA LA VALIDACION (segun USP)
CATEGORIA II
Características
de desempeño CATEGORIA I CATEGORIA III CATEGORIA IV
analitico Prueba Prueba de
de limite limite
cuantitativa cualitativa
Exactitud SI SI * * NO
Precision SI SI NO SI NO
Especificidad SI SI SI * SI
Limite de detection NO NO SI * NO
Limite de NO SI NO * NO
quantification
Linealidad SI SI NO * NO
Intervalo SI SI * * NO
*Pueden requerirse, dependiendo de la naturaleza de la prueba
específica. 1
VALIDACION vs VERIFICACION ANALITICA
Metales
Identificac
pesados pH Identificación HPLC
CARACTERIST.
ión VALORACION
Sustancias
DE DESEMPEÑO IR,UV,HPL
relacionadas
C
VAL VERIF VAL VERIF VAL VERIF VAL VERIF
EXACTITUD NO NO NO NO NO NO SI PUEDE SER
PRECISION NO NO NO NO NO NO SI SI
ESPECIFICIDAD SI PUEDE SER SI NO SI SI SI SI
LDD NO NO SI NO NO NO NO NO
LDC NO NO NO NO NO NO NO NO
LINEALIDAD NO NO NO NO NO NO SI NO
PRUEBAS A
EFECTUAR EN
VALIDACIONES
PASOS PREVIOS A LA VALIDACIÓN DE UN MÉTODO ANALÍTICO
Evaluar la Desarrollo de Evaluar los
Selección de Optimizar la
factibilidad de la técnica parámetros de
una técnica técnica
la técnica analítica. validación
ESPECIFICI
DAD¿Por qué?
ESPECIFICIDAD
Es la capacidad de evaluar de manera inequívoca el analito
en presencia de componentes que se pueden esperar que
estén presentes, tales como impurezas, productos de
degradación, y componentes de la matriz.
Identificación: Asegurar la
identificación de la sustancia
en análisis.
Tests de pureza: Declaración
OBJETIVOS
precisa del contenido de
DE LA impurezas de la sustancia en
ESPECIFICIDAD análisis (compuestos
relacionados,
metales pesados, solventes
residuales, etc.)
Contenido: Resultado exacto que
permite la declaración precisa del
contenido o potencia de la
sustancia en análisis presente en la
muestra.
ESPECIFICI ¿CON QUE LO HACEMOS?
DAD
Capacidad de evaluar de manera inequívoca
Placebo o matriz (producto sin el p.a a estudiar)
Principio activo (p.a)
el analito en presencia de componentes que se
pueden esperar que estén presentes, tales Solvente de dilución
como impurezas, productos de degradación, y Fase Móvil
componentes de la matriz.
Se hace para : ¿COMO LO HACEMOS?
* IDENTIDAD (categoría IV) Respetando las condiciones del analisis ,evaluar:
* TEST DE PUREZA(categoría II) Analisis de muestras SIN (placebo o matriz)
* CONTENIDO (categoría I) Analisis (o corridas) del blanco de solventes
* TEST DE DESEMPEÑO(categoría III) (diluyente/fase móvil)
Analisis del p.a (solo, como Materia prima o
estándar)
Muestras degradadas
Condiciones de Estrés
PRUEBAS PRINCIPIO ACTIVO FO R M A FARMACEUTICA
√ √
CALOR (50°C)
LUZ √ √
ACIDO √ *
(HCl 0.1N)
BASE √ *
(NaOH 0.1N)
OXIDANTE √ *
((H2O2 3%)
* √
HUMEDAD (85%)
* Se pueden hacer otras pruebas según
correponda
“Procedimiento de análisis cuantitativo que
ha sido validado y que puede detectar los
cambios en el tiempo por las propiedades
pertinentes del principio activo ,como
materia prima y como producto terminado.
Métodos
Mide con precisión los ingredientes activos,
indicadores de sin interferencia de los productos de
degradación, impurezas del proceso,
estabilidad excipientes, o de otras impurezas
potenciales.”
FDA Guidance for Industry - Analytical
Procedures and Methods Validation, 2000
ESPECIFICIDAD MUESTRAS
INDICADORAS DE ESTABILIDAD
CARACTERISTICAS ¿COMO LO HACEMOS?
Degradación en condición mas Degradar las muestras !!!!!
severa que una estabilidad
Las condiciones de degradación pueden ser :
Calor (50°C)
¿CON QUE LO HACEMOS? Luz (tiempo suficiente para efectuar degradación)
• Producto terminado Acido (HCl 1 N ó 0.1N)
• Placebo o matriz Base (base 1N ó 0.1N)
• Principio activo Oxidante (peróxido 3%)
• Producto sólido y/o solución Humedad (85%)
CONDICIONES DE STREES PARA METODOS INDICADORES DE ESTABILIDAD
Algunos ejemplos :
Solución en HCl 0,05 M (8 horas) IMPORTANTE
Solución en NaOH 0,02 M (8 horas) En lo posible, la muestra debe de
degradarse por lo menos un 20% para
Solución en H2O2 0,15% (1,5 horas) definir que una Degradación nos
proporcionará datos significativos
Calentamiento de la solución de la
muestra a 100°C (9 horas)
Calentamiento de la muestra sólida a
120°C (17 horas)
Exposición a la luz UV (14 días)
CONDICIONES DE STREES PARA METODOS INDICADORES DE ESTABILIDAD
Degradación con luz Degradación con humedad
Someter la muestra ( placebo, p.a , y producto Trabajar en cámaras cerradas con
terminado) a condiciones de exposición a luz por lo control de humedad ; el tiempo
menos 7 días. (verificar los luxeles ) varia según el tipo de producto.
REACCIONES DE HIDROLISIS ACIDA-BASICA -OXIDATIVA
La cantidad de ácido o base adicionada debe ser neutralizada antes de proseguir el analisis .
Debe propiciarse la reacción de hidrólisis, para ello someter a temperatura las muestras .
En el caso de la reacción oxidativa ,tambien debe someterse a calor.
Los tiempos de la reacción con calor dependerán del tipo de muestra.
HIDROLISIS ACIDA /BASICA
Peso Fiola (disolver con el diluyente de la
técnica)
MP
adicionar el 10% del vólumen de
ácido (normalmente HCL)
Disolver y someter a
calor (ebullición (x) min)
UN
EJEMPLO
Add hidróxido (misma cantidad que se
adicionó )
Enfriar
CONTINUAR EL ANALISIS TAL CUAL INDICA EL
MÉTODO
EJEMPLOS DE CROMATOGRAMAS RESULTANTES
Tests de Identificación
Resultados positivos : Comparación vs. patrón de referencia,
utilizando muestras que contengan la sustancia en análisis.
Condiciones:
Método analítico establecido
Patrón de referencia caracterizado
Resultados negativos : muestras que no contienen la sustancia
en análisis
Contenido y Tests para Impurezas
Cromatogramas representativos deben ser utilizados para
demostrar especificidad.
Cada componente individual debe ser identificado de manera
apropiada
Separaciones críticas : pueden ser demostradas por la resolución
de dos componentes que eluen próximos uno de otro -
Verificación del sistema.
Contenido y Tests para Impurezas
Contenido y Tests para Impurezas
Dos situaciones para verificar especificidad:
Impurezas disponibles
Conocimiento de las impurezas generadas durante el proceso de
síntesis y degradación a partir de datos históricos
Colección de impurezas y productos de degradación desarrollados y
caracterizados
Existe en el mercado cantidad suficiente y disponible.
Procedimiento
Contaminar el fármaco o la forma farmacéutica con cantidades
apropiadas de impurezas
Demostrar separación individual de esas impurezas y separación de los
otros componentes presentes en la matriz de la muestra y que permita la
declaracion exacta y precisa del contenido de la muestra.
Comparar con muestras no contaminadas
Contenido y Tests para Impurezas
Impurezas no disponibles
Comparación de los resultados obtenidos con
muestras conteniendo impurezas o productos de
degradación con otro método bien caracterizado
(método farmacopéico, método independiente
validado).
Muestras almacenadas en condiciones de
estrés:
luz, calor, humedad, hidrólisis ácido/base, y
oxidación.
Condiciones de Estrés
Pueden ser realizadas tanto en la forma sólida como con
soluciones.
Condiciones más severas que las utilizadas en los estudios
de estabilidad acelerada.
Un lote del material
Degradación térmica, hidrolítica, oxidativa, y fotolítica del
fármaco y de la forma farmacéutica.
Guideline for submitting samples and analytical data for methods validation, FDA,
1987.
Mostrar que el pico cromatográfico
de la sustancia en análisis no es
atribuída a más de un componente.
TEST Analísis subsequentes utilizando
DE otras técnicas: diode array,
espectrometria de masa, sistema
PUREZA DE
cromatográfico diferente,etc.
PICO
Programa para evaluación
estadística
- cálculo del factor de semejanza.
Condiciones del análisis
Columna C18, 5 µm, 4,6 mm x 25 cm
Diluyente tampón hexano-1-ácido sulfónico
sódio 0,01 M, pH 3.5
Método por HPLC para Fase móvil tampón/acetonitrilo/metanol
(900:94:6)
Contenido y
Longitud de onda 265 nm
compuestos
Comparación de los siguientes
relacionados para el
cromatogramas:
fármaco ABC diluyente
solución de verificación del sistema
solución patrón conteniendo el fármaco
ABC
solución de la muestra expuesta a
condiciones de estrés.
test de pureza de pico y análisis
espectral del pico principal
Diluyente no debe presentar ningún pico
detectable en los tiempos de retención de las
impurezas
Criterios
a Impurezas conocidas deben estar separadas
Cumplir entre si y del pico principal (Resolución
1,5)
Productos de degradación deben estar
separados del pico principal (Resolución
1,5)
Pureza del pico principal en el test de
estrés (factor de similaridad 980)
Cromatograma del diluyente - ausencia de picos
en los tiempos de retención del componente
principal e impurezas
Cromatograma de la Solución patrón - impurezas
conocidas deben estar separadas unas de otras y
del pico principal
Resolucion : debe ser >1,5
Solución en HCl 0,05 M (8 horas)
Solución en NaOH 0,02 M (8 horas)
Solución en H2O2 0,15% (1,5 horas)
CONDICIONES
Calentamiento de la solución de la
DE STRESS
MAS USADAS muestra a 100°C (9 horas)
Calentamiento de la muestra sólida a
120°C (17 horas)
Exposición a la luz UV (14 días)
C O M O DEBERIAMOS PRESENTAR LOS RESULTADOS
Realizarla con :
Placebo o blanco o matriz Solvente de dilución. Ingrediente
Farmacéutico activo solo (IFA) . Producto terminado o placebo cargado
con el IFA.
Muestras tal cual y sometidos a algún tipo de degradación:
temperatura ,luz, humedad, hidrólisis acida, básica, peróxido (cuando
no se conozca los productos de degradación)
Mínimo dos muestras de cada condición, analizados por duplicado
Exigencia
Ausencia de interferencia con referencia al estándar (IFA) y/o interferencia menor al 2% y/o según
lo indicado en el protocolo.
RECURSOS DIGITALES
https://www.multidlc.org/hplcsim/4_2_0/
https://hplcsimulator.org/
