Universidad Nacional Jorge Basadre Grohmann
Facultad de Ciencias – E.A.P Biología Microbiología
FAMILIA LACTOBACILLACEAE
Copyright © 2016 Dr. César Cevallos Columbus
“Porque nada trajimos a este mundo, y
nada podemos llevarnos. Así que, si
tenemos ropa y comida,
contentémonos con eso. Los que
quieren enriquecerse caen en la
tentación y se vuelve esclavos de sus
muchos deseos…”
I timoteo 6:7-10
INTRODUCCIÓN PROBIOTICOS
Los microorganismos en el organismo desarrollan tres (03)
funciones básicas:
Metabólicas
Barreras
Interacción con el huésped.
Microbiota inicial. (Recién nacido): Bifidobacterium y
Lactobacillus
Cada individuo posee cepas “propias” y específicas, y
aunque la composición bacteriana puede ser variable.
Principales M.O flora intestinal hombre
GÉNEROS OBS. MICROSCÓPICA PRODUCTOS FERMT.
Bacteroides Bacilos Gram positivos A, P, S
Eubacterium Bacilos Gram positivos A, B, L
Bifidobacterium Bacilos Gram positivos A, L, F , E
Clostridium Bacilos Gram positivos A, P, B, L, E
Lactobacillus Bacilos Gram positivos L
Ruminococcus Cocos Gram positivos A
Peptostreptococcus Cocos Gram positivos A, L
Peptococcus Cocos Gram positivos A, B, L
Metanobrebivacter Cocobacilo Gram positivo M
Propionobacterium Bacilos Gram positivos A, P
Actinomyces Bacilos Gram positivos A, L, S
Enterococcus Cocos Gram positivos L, A
Fusobacterium Bacilos Gram negativos B, A, L
Escherichia Bacilos Gram negativos Mezcla de ácidos
A= acetato; B= butirato; E= etanol; F= formiato; L= lactato; M= metano.
Criterios de evaluación de un probiótico
Según Castro y De Rovetto (2006):
Formar parte de la microbiota del intestino humano
No ser patógeno ni toxigénico
Mantenerse viable en medio ácido del estómago y en
contacto con la bilis.
Capacidad de adhesión en el epitelio intestinal
Adaptarse a la microbiota nativa sin desplazarla
Producir sustancias antimicrobianas
Capacidad para aumentar de forma positiva las
funciones metabólicas e inmunológicas.
Mecanismos de acción de los probióticos
Producción de sustancias antimicrobianas (ácido
láctico, peróxido de hidrogeno, diacetilo y
bacteriocinas).
Disminución del pH intestinal favoreciendo el
crecimiento de M.O beneficiosos.
Aumento a la resistencia de colonización por
competencia con los patógenos.
Competición por nutrientes
Estimulación de la respuesta inmune.
BACTERIAS POTENCIALMENTE PROBIÓTICAS
Grupo integrado por:
LACTOBACILLUS
LACTOCOCCUS
LEUCONOSTOC
PEDIOCOCCUS
AEROCOCCUS
BIFIDOBACTERIUM
WEISELLA
LACTOBACILLUS ES EL GÉNERO QUE PRESENTA
MAYOR CANTIDAD DE ESPECIES CON
CARACTERÍSTICAS PROBIÓTICAS Y PROPIEDADES
BENÉFICAS PARA LA SALUD.
BACTERIAS ÁCIDO-LÁCTICAS USADAS COMO
PROBIÓTICOS
LACTOBACILLUS STREPTOCOCCUS BIFIDOBACTERIUM
L. acidophilus S. cremoris B. bifidum
L. delbrueckii subsp S. salivarius subsp B. adolescentis
bulgaricus thermophilus
L. brevis S. faecium B. animalis
L. cellobiosus S. diacetylactis B. infantis
L. curvatus S. intermedius B. longum
L. casei B. thermophilum
L. fermentum
L. lactis
L. plantarum
L. reuteri
BACTERIOCINAS PRODUCIDAS POR
LACTOBACILLUS
BACTERIOCINAS
LACTACIN – B
LACTACIN – F
HELVETICIN – J
HELVETICIN – V
FERMETICIN
SAKACIN – A
SAKACIN – M
SAKACIN – P
LACTICINAS - A y B
LACTOCIN - S
LACTOCIN – LP27
PLANTARICIN - BN
PRINCIPALES GÉNEROS DE M.O PROBIÓTICOS Y
POSIBLE EFECTOS SALUD EN CONSUMIDORES
GÉNERO EFECTOS
Lactobacillus En ningún caso son patógenos. Algunas cepas oportunistas
en personas inmunodeprimidas.
Lactococcus En ningún caso son patógenos
Streptococcus Sólo Streptococcus thermophilus se utiliza en productos
lácteos.
Enterococcus Oportunistas. Algunas cepas resistentes s antibióticos.
Bacillus Sólo a Bacillus subtilis se le reconoce como organismos
GRAS (Generally Recognized As Safe = generalmente
reconocido como seguro) y se puede utilizar como
probiótico.
Bifidobacterium Algunas cepas se han aislado a partir de procesos
infecciosos.
Saccharomyces En ningún caso son patógenos. Algunas cepas han sido
aislados de procesos infecciosos.
PRINCIPALES EFECTOS BENEFICIOSOS DE LAS
CEPAS PRINCIPALES DE PROBIÓTICOS.
CEPA EFECTOS BENEFICIOSOS
Lactobacillus acidophilus Adherencia epitelio intestinal humano
Equilibrio de la microbiota intestinal
Mejora respuesta inmune
Lactobacillus rhamnosus Prevención de la diarrea asociada a antibióticos
Tratamiento de la diarrea por rotavirus
Tratamiento de la diarrea causada por C. difficile
Mejoras en la enfermedad de Chron
Lactobacillus casei Shirota Prevención de alteración microbiota intestinal
Prevención de cáncer de vejiga.
Lactobacillus gasseri Reducción de enzimas carcinógenos
Bacillus subtilis Utilización en la bacterioterapia oral
Restauración de la microbiota normal
Inmunoestimulación
Bifidobacterium bifidum Prevención de la diarrea viral
Propionibacterium Crecimiento y estimulación de otras bacterias beneficiosas.
freudenreichii
APLICACIONES CLÍNICAS
Actividad frente a enfermedades inflamatorias
gastrointestinales
Prevención y tratamiento de diarreas
Actividad contra Helicobacter pylori
Reducción del riesgo de padecer cáncer de colon
Actuación frente infección del tracto genitourinario
Efecto protector y estimulación del sistema inmune
Reducción de la intolerancia a la lactosa
Actuación frente a hipertensión
Aplicación frente a alergias
PRUEBAS IN VITRO SELECCIÓN DE
PROBIÓTICOS UTILES AL HOMBRE
Para que una cepa bacteriana pueda ser considerada un
potencial probiótica debe cumplir las siguientes
premisas:
Resistencia a la acidez gástrica y a las salas biliares.
Adherencia al mucus y a las células epiteliales del TGI
Habilidad para reducir la adhesión de M.O patógenos
Capacidad para hidrolizar las sales biliares.
EFECTOS DE LOS PROBIÓTICOS
EFECTOS DE LOS PROBIÓTICOS
History of Lactobacillus
acidophilus
Historia de Lactobacillus acidophilus. Los principales hitos
en el desarrollo de la toxonomía de Lactobacillus, y los
efectos resultantes sobre su ubicación taxonómica.
SEGURIDAD DE LOS PROBIÓTICOS
Las cepas más utilizadas en la elección de un probiótico son del
género: LACTOBACILLUS y
BIFIDOBACTERIUM
Catalogados como M.O seguros en la fermentación de alimentos.
Aunque se consideran M.O GRAS, se recomienda que sean
sometidos a diferentes pruebas:
Resistencia a antibióticos
Evaluación de posibles actividades metabólicas perjudiciales
(producción de ácido láctico).
Estudios epidemiológicos sobre posibles efectos adversos.
Determinación de la producción de posibles toxinas y capacidad
hemolítica.
Ausencia de infectividad en animales inmunosuprimidos.
SEGURIDAD DE LOS PROBIÓTICOS
SEGURIDAD DE LOS PROBIÓTICOS
ALIMENTOS PROBIÓTICOS
FAMILIA
LACTOBACILLACEAE
FAMILIA LACTOBACILLACEAE
Las bacterias ácido-lácticas se ubican en la familia
Lactobacillaceae (Winslow, Broadhurst, Buchanan,
Krumwiede, Rogers y Smith, 1917, citados por Bergey,
1992),
Pueden ser bacilos largos o cortos, aunque también
cocos que se dividen como los bacilos, solamente en un
plano, produciendo cadenas o tétradas de forma
ocasional y filamentos, falsamente llamados ramificados.
Son microaerófilos, gram positivos y catalasa negativos.
Forman ácido láctico como producto principal de la
fermentación de los azúcares.
FAMILIA LACTOBACILLACEAE
Los Lactobacilos homofermentativos producen ácido
láctico. Este grupo está integrado por Lactobacillus
caucasicus, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus lactis,
Lactobacillus acidophilus y Lactobacillus delbrueckii.
Los Lactobacilos heterofermentativos producen además
de ácido láctico, CO2, etanol y otro productos volátiles;
ejem: Lactobacillus fermenti, capaz además, de dar buen
crecimiento a temperaturas elevadas (45 ºC, 113 ºF).
Son normalmente no mótiles, aunque también pueden
serlo (flagelación perítrica).
Rara vez producen pigmentos, aunque unas pocas
especies los producen de color amarillo, naranja, rojo o
pardo.
FAMILIA LACTOBACILLACEAE
Cocos Bacilos
HOMOFERMENTATIVAS: C6H12O6 2 CH3-CHOH-COOH
Streptococcus lactis, S. salivarius, S. pyogenes, Termobacterias (40°C) No crecen a 15°C
S. cremoris, S. thermophilus, S. diacetilactis.
Lactobacillus lactis, L. helveticus, L.
Pediococcus cerevisiae acidophilus, L. bulgaricus, L. delbruckii
Estreptobacterias (30-37°C). Crecen a 15°c
Lactobacillus casei, L. plantarum, L. inulinus
HETEROFERMENTATIVAS:
C6H12O6 CH3-CHOH-COOH + CH3-CH2OH + CO2 o CH3-COOH
Leuconostoc mesenteroides Lactobacillus brevis, L. fermenti, L.
L. citrovorum viridescens, Bifidobacterium bifidum
FAMILIA LACTOBACILLACEAE
Especies microaerófilas a veces licúan la gelatina, pero las
anaerobias estrictas lo hacen más comúnmente.
Se encuentran regularmente en la boca y en el tracto
intestinal del hombre y otros animales, en alimentos y
productos lácteos y en jugos vegetales fermentados. Unas
pocas especies son altamente patógenas (Bergey, 1992).
Los carbohidratos les resultan indispensables para su buen
desarrollo, pues los fermentan para dar lugar a ácido
láctico (a veces con ácidos volátiles), alcohol y dióxido de
carbono (CO2 ) como subproductos.
FAMILIA LACTOBACILLACEAE
ORLA-JENSEN (1919) fue responsable de los primeros
intentos de demarcación de éste grupo microbiano, y son
esos mismos criterios los que constituyen, todavía en la
actualidad, las bases de su clasificación:
[Link] morfológicos: El grupo está constituido por
cocos y bacilos Grampositivos, no esporulados e inmóviles.
[Link] fisiológicos: Microorganismos fermentativos con
producción final de ácido láctico, catalasa-negativos,
microaerófilos o anaerobios, mesófilos, y con complejos
requerimientos nutritivos.
FAMILIA LACTOBACILLACEAE
A pesar de que las características esenciales no se han
alterado desde su establecimiento por Orla-Jensen, si se ha
modificado la nomenclatura del grupo.
De los seis géneros establecidos inicialmente
(Betabacterium, Streptobacterium, Thermobacterium,
Betacoccus, Streptococcus y Tetracoccus) por (Orla-Jensen.
1919), solamente se mantiene el género Streptococcus.
Los otros 5 han sido sustituidos por los géneros
LactobaciIIus (englobaría a Betabacterium,
Streptobacterium y Thermobacterium ), Leuconostoc y
Pediococcus.
Clasificación: Grupos Fisiológicos (Buyze)
Heterofermentativas obligadas: poseen los enzimas
glucosa-6-PDH y 6-fosfogluconato-DH, pero carecen de
la fructosa-DP-aldolasa, originando como productos finales
de la fermentación de las hexosas CO2 y ácido láctico.
Como fuente de hidratos de carbono sólamente pueden
utilizar las hexosas.
Homofermentativas obligadas: poseen fructosa-DP-
aldolasa, pero carecen de las dos deshidrogenasas. Al
igual que las anteriores son incapaces de utilizar las
pentosas como fuente de hidratos de carbono.
Homofermentativas facultativas: poseen las dos
deshidrogenasas pero metabolizan la glucosa por la vía de
Embden-Meyerhof (glicolisis); utilizan las pentosas y se
corresponden con las Streptobacteria de Orla-Jensen.
GÉNERO LACTOBACILLUS
El género Lactobacillus (lactis-leche; bacillus-pequeños
bacilos) se caracteriza por presentar células en forma de
bacilos largos y extendidos, aunque con frecuencia pueden
observarse bacilos cortos o coco-bacilos coryneformes.
No esporulan y algunas cepas presentan cuerpos bipolares
que probablemente contengan polifosfato.
Los grandes bacilos homofermentativos presentan gránulos
internos revelados por tinción de Gram o por tinción con azul
de metileno.
Pared celular: Gram positiva (contiene peptidoglicano: del tipo
Lisina-D-Asparagina sea el más ampliamente distribuido, pero
solo presenta ácido teicoicos).
GÉNERO LACTOBACILLUS
Fotografías de tinciones Gram de la cepa de
Lactobacillus seleccionada.
GÉNERO LACTOBACILLUS
Lactobacillus acidophilus
Lactobacillus bulgaricus Lactobacillus sake
GÉNERO LACTOBACILLUS
Lactobacillus casei
BACTERIAS ÁCIDO-LÁCTICAS USADAS COMO
PROBIÓTICOS (FULLER, 1993).
ESPECIES DEL GÉNERO LACTOBACILLUS
Kandler y Weiss, citados por Bergey (1992): dividen el género
Lactobacillus en 44 especies. Algunas de estas especies se
subdividen en varias subespecies; tales son los casos de:
Lactobacillus delbrueckii (tres subespecies: bulgaricus, lactis
y delbrueckii).
Lactobacillus salivarius (dos subespecies: salivarius y
salicinus).
Lactobacillus casei (cuatro subespecies: casei,
pseudoplantarum, rhamnosus y tolerans).
Lactobacillus coryniformis (dos subespecies: coryniformis y
torquens).
GÉNERO LACTOBACILLUS
CARACTERÍSTICAS CULTURALES
Colonias de Lactobacillus: son pequeñas (2-5 mm), convexas,
suaves, con márgenes enteros, opacas y sin pigmentos. Sólo en
algunos casos presentan coloración amarillenta o rojiza.
Algunas especies colonias rugosas. Otras, como Lactobacillus
confusus, colonias viscosas por excepción.
Generalmente no presentan actividad proteolítica ni lipolítica
que pueda apreciarse mediante halos claros formados en
medios sólidos que contengan proteínas o grasas.
Normalmente no reducen los nitratos, pero esta reacción
puede ocurrir en algunos casos, cuando el pH está por encima
de 6,0.
GÉNERO LACTOBACILLUS
No producen indol ni ácido sulfídrico (H2S).
Son catalasa negativos, pero algunas cepas producen la
enzima pseudocatalasa que descompone el peróxido de
hidrógeno.
Son citocromo negativos, por la ausencia de porfirinas;
presentan una reacción benzidinanegativa.
Crecimiento en medio líquido: sus células precipitan
rápidamente después que el crecimiento cesa.
No desarrollan olores típicos al crecer en medios comunes,
pero contribuyen a modificar el sabor de alimentos
fermentados (compuestos volátiles como diacetilo y sus
derivados y H2S y aminas en el queso.
GÉNERO LACTOBACILLUS
LACTOBACILOS HOMOFERMENTATIVOS OBLIGADOS:
Fermentan las hexosas casi exclusivamente a ácido láctico por la vía
Embden-Meyerhoff; no fermentan las pentosas ni el gluconato. Entre
estas especies y subespecies se encuentran:
L. delbrueckii subsp. delbrueckii, L. delbrueckii subsp. lactis,
L. delbrueckii subsp. bulgaricus, L. acidophilus,
Lactobacillus amylophilus, Lactobacillus amylovorus,
Lactobacillus animalis, Lactobacillus crispatus,
Lactobacillus farciminis, Lactobacillus gasseri,
Lactobacillus helveticus, Lactobacillus jensenii,
Lactobacillus ruminis, L. salivarius,
Lactobacillus sharpeae, Lactobacillus vitulinus y
Lactobacillus yamanashiensis.
GÉNERO LACTOBACILLUS
LACTOBACILOS HETEROFERMENTATIVOS OBLIGADOS:
Carecen de enzimas principales de la vía FDP. Degradación de la
glucosa se efectúa exclusivamente por la vía de la
PENTOSAFOSFATO. Entre estas especies y subespecies se
encuentran:
Lactobacillus bifermentans, Lactobacillus brevis,
Lactobacillus buchneri, Lactobacillus collinoides,
Lactobacillus confusus, Lactobacillus divergens,
Lactobacillus fermentum, Lactobacillus fructivorans,
Lactobacillus fructosus, Lactobacillus halotolerans,
Lactobacillus hilgardii, Lactobacillus kandleri,
Lactobacillus kefir, Lactobacillus minor,
Lactobacillus reuteri, Lactobacillus sanfrancisco,
Lactobacillus vaccinostercus y Lactobacillus viridescens.
GÉNERO LACTOBACILLUS
NUTRICIÓN Y CONDICIONES DE CRECIMIENTO .
Presentan particularidades para cada especie respecto a los
requerimientos nutricionales complejos: aminoácidos,
péptidos, derivados de ácidos nucleicos, vitaminas, sales,
ácidos grasos o ésteres de ácidos grasos y carbohidratos
fermentables (suplementación con jugo de tomate,
manganeso, acetato y ésteres del ácido oleico, especialmente
Tween 80, resulta estimuladora y hasta esencial para muchas
especies..).
Estos microorganismos carecen de sistemas de citocromos
para ejecutar la fosforilación oxidativa y no poseen enzimas
superóxido dismutasas ni catalasas.
GÉNERO LACTOBACILLUS
pH: crecen bien en medios ligeramente ácidos, con pH inicial
de 6,4 - 4,5 y con uno óptimo de desarrollo entre 5,5 y 6,2.
Necesidad de O2: La mayoría de las cepas de
Lactobacillus son principalmente aerotolerantes (crecimiento
óptimo se alcanza bajo condiciones microaerofílicas o
anaeróbicas).
Temperatura: Rango de temperaturas para el crecimiento
oscila entre 2 y 53°C. Mayor parte de los lactobacilos son
mesófilos (30 - 40°C), con un límite superior de 40ºC.
GÉNERO LACTOBACILLUS
ESTRUCTURA ANTIGÉNCIA
La mayoría de las cepas de Lactobacillus se han asignado a
siete grupos serológicos, basándose en los determinantes
antigénicos específicos que poseen. Estos grupos se
denominan: A, B, C, D, E, F y G.
Como ejemplos ilustrativos pueden citarse los casos de
Lactobacillus helveticus, perteneciente al Grupo A, cuyo
antígeno específico es el GTA (ácido teicoico glicerol),
localizado en pared celular y membrana y cuyo determinante
antigénico es el a-Gle (D-glucosil); así como L. plantarum, de
antígeno RTA (ácido teicoico ribitol), localizado en la pared
celular y con igual determinante antigénico que en el caso
anterior (Sharpe, 1981; citado por Bergey, 1992).
SENSIBILIDAD A ANTIBIÓTICOS Y DROGAS:
Los lactobacilos son sensibles ante la mayoría de los
antibióticos activos contra las bacterias Gram-positivas.
La resistencia a la bilis es también una propiedad importante
a tener en cuenta para la colonización del intestino por los
lactobacilos y se ha estudiado principalmente en el caso de
Lactobacillus acidophilus.
PATOGENICIDAD
PUEDE OCASIONAR: caries dental, abscesos, septicemias
sistémicas y endocarditis bacterianas, provocados por L.
casei subsp. rhamnosus, L. acidophilus, L. plantarum y
ocasionalmente Lactobacillus salivarius.
DIAGNÓSTICO BACTERIOLÓGICO
TINCIÓN GRAM: leche fermentada, secreción o hisopado
vaginal, hisopado bucal, heces de neonato, plantas en
descomposición….
CULTIVO: Cultivo de pre-aislamiento: en caldo MRS
Cultivo de aislamiento: agar MRS
PRUEBAS DE IDENTIDAD.
Pruebas fisiológicas: cultivo en caldo a concentraciones
diferentes de NaCl y crecimiento a diferentes temperaturas.
Pruebas bioquímicas: crecimiento a pH 3.9
Pruebas moleculares: basadas en secuencias de ADN
ribosomal, para identificar las bacterias aisladas de su ambiente
natural, como PCR (bacterias probióticas).
PRUEBAS MOLECULARES
Determinación de oligonucleótidos del coeficiente de
sedimentación (16S) del rRNA (RNA ribosomal) (Stackebrandt y
cols; 1983; citados por Bergey, 1992).
Estudios serológicos que involucran antisueros contra enzimas
málicas, del tipo de la fructosa-1,6-difosfato aldolasa y de la
gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa de varias bacterias
ácido lácticas y de algunas bacterias aeróbicas y anaeróbicas
(London y Chace, 1983; citados por Bergey, 1992).
Porciento molar de Guanina+Citocina del ADN (Schleifer y
Stackebrandt, 1983; citados por Bergey, 1992).
Nivel de homología ADN/ADN, poco significativo entre la mayoría
de las especies (Mayr y cols; 1982; citados por Bergey, 1992).
Hibridización ARN/ ADN (Schillinger; citado por Bergey, 1992).
“Hace dos mil años vine como
cordero, pronto vendré como
León”.
MUCHAS GRACIAS
