LABORATORIO DE
MICROBIOLOGIA
María Isabel Durango lozano
Rol del Laboratorio de
microbiología
• Apoyo en el diagnóstico de las enfermedades infecciosas
1. Identificación del agente etiológico: selección del
mejor examen y de la mejor muestra.
2. Informe de susceptibilidad a antimicrobianos.
3. Contribuir al control de la resistencia bacteriana
4. Implementación de tecnología moderna: tiempo de
respuesta, sensibilidad y especificidad.
Métodos de diagnóstico
microbiológico
• Observación c/s tinciones
• Cultivos:
• Mayor
Identificación/sensibilidad
rapidez
• Detección de antígenos
• Alta calidad
• Detección de anticuerpos: •
serología Costo/benefici
• Detección de ácidos nucleicos o
Tinción de Gram
• Se debe solicitar siempre
• De bajo costo y gran utilidad:
1.Orientación diagnóstica rápida
2. Características inflamatorias
3. infecciones mixtas (anaerobios)
• Sensibilidad analítica: 100.000 bacterias/ml
muestra
Baciloscopía
•Se debe solicitar en TODO paciente con síntomas
respiratorios.
• De bajo costo y gran utilidad:
1. Rápida
2. Fácil disponibilidad
3. Indice de infectividad
Tinción de Ziehl Neelsen
• Sensibilidad analítica: 5.000 a 10.000 bacilos por
ml de muestra.
Tinciones para Hongos
• Diagnóstico de infecciones invasoras en muestras clínicas es
difícil.
• Blanco de calcoflúor es una tinción específica para hongos
(quitina).
• Mejora la sensibilidad
Cultivos
• Se considera el método de referencia porque permite la
confirmación de género y especie y la determinación de la
susceptibilidad a drogas.
• En el caso de bacterias y hongos la automatización ha
permitido disminuir los tiempos de respuesta (mejores
sistemas de detección).
Cultivos bacterianos y de
hongos
• Requiere bacterias y hongos viables
• Requieren medios de transporte, especialmente
anaerobios
• Medios líquidos son más sensibles que los sólidos
• Una buena alternativa en punciones y muestras
líquidas es la inoculación en botellas de hemocultivos
Cultivos bacterianos y de
hongos
• Diagnóstico macroscópico y microscópico
• Identificación y sensibilidad a drogas
Diferentes plazos de
entrega:
Cultivo corriente: 48 horas
Cultivo anaeróbico: 7 días
Cultivo de hongos: 7 días a 4
semanas
Cultivo de Micobacterias: 8
semanas
Susceptibilidad bacteriana
• La resistencia bacteriana es un problema emergente
Staphylococcus aureus R a meticilina
Streptococcus pneumoniae R a penicilina
Enterococcus R a Vancomicina
E. coli y K. pneumoniae R a todos los -lactámicos (ESBL)
• Test de susceptibilidad:
Estandarización de AAM ensayados e informados
Depende de complejidad de los pacientes y patrones locales de R
Resultado requiere reporte selectivo e interpretación adecuada
Kirby-Bauer
S -I - R
Susceptibilidad bacteriana
Concentración inhibitoria
mínima
Métodos: Dilución en agar
Ej. Cefazolina, Escherichia coli
Cortes : Sensible= 2 g/ml Intermedio =4- 8 g/ml
Resistente: 16
2 4 8 16 CIM 2 S2
2 4 8 16 CIM = 4 I4
2 4 8 16 CIM = 8 I8
2 4 8 16 CIM = 16 R16
2 4 8 16 CIM 16 R 16
microbiología
Cumplimiento de la fase pre analítica
Adecuada muestra
Medios de cultivos atemperados
Libres de agua de condensación.
Trabajar en una campana de
bioseguridad muestras.
Uso de mecheros o incinerador
Fernández y cols. 2005. Gestión de calidad en el laboratorio
•Recogida de muestras
• Responsabilidad y supervisión
facultativa
• Normas de asepsia
• Muestra representativa del proceso
• Cantidad/Recipiente/Identificación
correcta
•Evitar contaminación con flora
saprófita
• Retrasar tratamiento
•Transporte rápido (refrigeración)
ORINA
•Frasco de boca ancha y tubo con
vacío
•Porción media de 1ª orina de la
mañana
• Limpieza escrupulosa de genitales
•La bolsa (niños) se cambiará cada
hora
• Volumen mínimo 10 ml para
cultivo bacterias y Levaduras
•50 ml para tuberculosis
HECES (coprocultivo)
•No se admitirán heces formes
• Frasco de boca ancha
•2-5 g de heces recientes (pus,
moco, sangre)
•Remitir rápidamente al
laboratorio
mantener a 4ºC si se demora el
envío
Exudados /Abscesos
Limpiar la superficie con suero
fisiológico y gasa
Recoger el pus mediante jeringa y
aguja aspirando de las zonas profundas
Cuando sea necesario instilar suero y
aspirarlo nuevamente
Sólo cuando lo anterior no sea posible
se utilizaran escobillones enviando
FASE ANALITICA
microbiología
Uso de asas calibradas ( recuento de
microorganismos ).
Buena siembra en estría. ( trabajar con
colonias perfectamente aisladas ).
Elston D. 2008. Clin Lab Med 28:173-
177
Medios de cultivo
Selección de medios de cultivo
Generales, selectivos, selectivos-
diferenciales.
Necesidades particulares de cada
hospital
Comunicación laboratorio – área
clínica .
Realización de tablas de siembra.
2007. Clinical Microbiology Procedures Hanbook 2nd Edition
. ASM
Identificación de
microorganismos
PRIMERA
ETAPA : Observación de
la colonia.
Ahorro de tiempo
y dinero en el
Dx.
Morfología, color
Interacción con
el medio
( hemolisis )
Segunda etapa :
Diagnostico presuntivo
Medios cromogénicos
Sensibilidad a antibióticos:
S. pneumoniae S opt
S. pyogenes S bac
Pruebas complementarias:
Oxidasa,catalasa,coagulasa
Aglutinación con antisueros
específicos.
Tercera etapa: dx.
confirmativo
Basa en realización pruebas
bioquímicas
A partir de cultivos puros.
Bioquímicas: manuales o por sistemas
semi automatizado.
Control de calidad en el
laboratorio microbiológico
Toma de muestra y adecuado
transporte.
Manipulación de la muestra
rigurosamente.
Control de material y equipos:
Temperatura estufas, refrigeradores
Campanas de incubación
Pipetas automáticas: calibración
Sistemas automatizados
CONTROL DE MEDIOS
CULTIVO
Esterilidad del medio: se comprobara
en cada lote
Eficacia del medio (utilización de
cepas ATCC).
Control de reactivos y discos
pruebas diferenciales
Los reactivos se controlan cada vez
que se preparan o nuevo frasco
Colorantes de tinción, fijadores
reveladores de pruebas bioquímicas.
Eficacia se comprueba con
microorganismos que dan respuesta
positiva y negativa.
Discos para pruebas diferenciales
refrigerado con un desecante
Control de discos de antibiograma :
cepas cuya sensibilidad conocida: E.
coli ATCC 25922, Pseudomonas
aeruginosa ATCC 27853.
Control de antisuero y antígenos
Control de resultados intralaboratorios
e interlaboratorios.
Fase Postanalítica.
Captura de resultados : manual o
automática.
Validación de resultados
Envió de resultados impresos-
internet
Impresión de Diarios de Trabajo.
Indicadores de calidad fase
Postanalítica
Tiempo de respuesta del lab para sol
urgentes ( min )
Proporción de reediciones diarias de
informes ya entregados:
No. reediciones de informes/No. total
informes
Proporción de informes reclamados por
demoras.
Indicadores herramientas objetivas evaluar las
disposiciones establecidas y ver posibilidades de mejora.
Errores en el proceso
Analítica Post analítica.
Procedimientos técnicos. Revisión y aprobación de
Manipulación de muestras resultados.
Interpretación Envió de reporte
Educación Resultados en el expediente
Almacenaje de muestras.
Uffff…gracias
