Microscopio
electrónico
- Docente: Hernán Lioi
- Adscripta: Romina Mione
¿Qué es?
Es un instrumento con el cuál es posible
aumentar imágenes de muestras hasta
niveles muy superiores a los del
microscopio óptico.
Límite de resolución = 1,22 x λ / ⌀PE
Si se utiliza una menor longitud de onda, se
consigue un mayor límite de resolución. Para
ésto, se reemplazan los rayos de luz visible
por haces de electrones.
¿Qué es?
Acelerando estos electrones a gran velocidad
en el vacío, se pueden obtener longitudes de
onda 100.000 veces menores que las
longitudes de onda del rango visible. Esto
significa, que se pueden conseguir
aumentos 100.000 veces mayores.
Funcionamiento
El haz de electrones es lanzado por
un cañón electrónico
➔ Impacto con la muestra
De igual manera que la luz
visible la iluminaría.
➔ Refracción y reflexión
Algunos electrones atraviesan
la muestra y otros se reflejan.
➔ Formación de imagen
Se detecta la interacción de
los electrones con la muestra
y se forma una imagen en un
sensor determinado..
¿Cómo se direcciona
el recorrido del
electrón dentro Los electrones no se
del microscopio desvían al
atravesar las
lentes del
electrónico?
microscopio
óptico y, por lo
tanto, no son
apropiadas para su
uso en un
Lentes
electromagnéticas
Crean un campo electromagnético para interactuar
con los electrones y que éstos se junten en un punto
determinado.
⨠ El camino del electrón se desvía por los campos
generados de la misma manera que la luz se
desvía por las lentes en un microscopio óptico.
Lente electromagnética del
microscopio CM200
Al vacío
Importante: Esto
sucede dentro de un
espacio de alto vacío
para que los
electrones no
tengan interacción
con materia durante
su recorrido y no se
desvíen.
Propiedades de las
lentes
➔ Todas las lentes
electromagnéticas son
positivas
➔ No afectan a la velocidad
de los electrones
➔ Generan aberraciones
Esfericidad
Distorsión
Cromática
Otras
¿Cuáles son los tipos
principales de
microscopio
electrónico?
Los 2 más
utilizados:
⨠ Microscopio electrónico de
barrido o SEM
⨠ Microscopio electrónico de
transmisión o TEM
SEM
La muestra debe ser conductora
o recubierta con una capa
delgada de algún material
conductor y es barrida por un
haz de electrones.
Cuando este haz interactúa con
la muestra, se crean electrones
secundarios, electrones
retrodispersados y rayos X. Éstos
son captados por un detector y
la señal es enviada a un monitor,
donde se observará la imagen
ampliada.
SEM
Cada punto leído de la muestra
corresponde a un píxel en el
monitor. Cuanto mayor sea el
número de electrones contados
por el dispositivo, mayor será
el brillo del píxel en la
pantalla.
SEM
Tiene gran profundidad de
campo.
Produce imágenes de alta
resolución.
Permite la observación y
caracterización superficial de
materiales inorgánicos y
orgánicos.
Puede capturar imágenes
tridimensionales en blanco y
negro de muestras delgadas o
gruesas.
Imágenes obtenidas
con SEM
Virus SARS-CoV Óvulo con espermatozoides
TEM
Utiliza un amplio haz de
electrones para crear una
imagen de la estructura interna
de la muestra. Éste haz se
transmite a través de ella,
creando una imagen que detalla
la morfología, composición y
estructura cristalina de la
muestra.
TEM
Las muestras deben ser muy
delgadas para permitir que los
electrones pasen a través de
ellas. Para ello, se las debe
cortar en capas ultrafinas,
generalmente de menos de 150
nm de espesor.
TEM
Luego de que los electrones
atraviesan la muestra, pasan a
través de las lentes que están
debajo. Estos datos se utilizan
para crear imágenes
directamente en una pantalla
fluorescente o en la pantalla de
una computadora.
Imágenes obtenidas
con TEM
Grupo de partículas de Glóbulo blanco
coronavirus
SEM
TEM
Haz fino y enfocado Haz ancho
Imagen superficial Estructura interna
Imagen 3D Imagen 2D
Muestras finas y Muestras ultrafinas
gruesas
Penetra la muestra
No penetra la muestra
Grano de polen
Observación con Observación con
SEM TEM
¿Qué diferencia
existe con el
microscopio
óptico?
MICROSCOPIO MICROSCOPIO
ÓPTICO ELECTRÓNICO
FUENTE DE LUZ Rango visible Electrones
LONGITUD DE λ = 500 nm λ = 0,005 nm
ONDA
LENTES De cristal o de Electromagnética
vidrio s
AUMENTOS 25-2000x 2000-
>1.000.000x
LÍMITE DE 200 nm 0,1 - 10 nm
RESOLUCIÓN
Observaciones de una muestra biológica
Con Microscopio Óptico Con Microscopio Electrónico
