Facultad de Ciencias de la Salud

Departamento Académico de Ciencias

ACIDOS NUCLEICOS Y REPLICACIÒN

DEL ADN
Prof. Blga. MSc. Miriam Díaz Rios
SEMESTRE 2018 – UPAO
FORMACIÒN DE ENLACES en biomoléculas
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SECCIÓN DE POSTGRADO DE CIENCIAS DE LA COMUNICACIÓN

 ¿Qué es la REPLICACION o DUPLICACIÓN DEL DNA

Es el proceso mediante el
cual, a partir de una
molécula de DNA doble Molécula DNA
parental
hélice, se sintetizan dos
moléculas idénticas.
Tiene lugar cada vez que Cadena hija
se divide una célula, ya (nueva)

que las dos células hijas

han de tener exactamente,
la misma dotación genética Moléculas de
que la progenitora. DNA hijas

• .
CARACTERÍSTICAS DE LA REPLICACIÒN
1. Es Semiconservativa
2. Es Bidireccional
3. Es Semidiscontinua
4. Es monofocal en procariotas y multifocal en
eucariotas
5. Requiere de Cebadores
6. Ocurre en el período S.
7. Es asincrónica
8. La agregación de nucleótidos es de a uno por
vez, en el extremo 3´OH.
 1. La replicación es semiconservativa

Nucleótidos

Molécula parental Ambas cadenas parentales Dos moléculas de DNA

de DNA Sirven como molde hijas idénticas
 2. La Replicaciòn es Bidireccional
Origen de Origen de
replicación replicación
Al abrirse la doble hélice se
forma una estructura
llamada “burbuja de
replicación”, cuyo tamaño
Origen de Cadena parental
aumenta a medida que replicación
avanza la separación de las Cadena hija
dos cadenas de DNA,
evento que se produce en
forma simultánea en los 2
extremos de la burbuja. Burbuja de
Cada burbuja, tiene dos replicación
horquillas de replicación
que a partir de ese punto de
origen común avanzan en
ambas direcciones opuestas Dos moléculas de DNA hijas
 3. La Replicación es Semidiscontinua
 La cadena hija que adopta
como molde a la cadena
progenitora que corre en
dirección 3’→5’ se sintetiza en
forma continua, al crecer en
dirección 5’→3’, y se
denomina cadena adelantada
(“leading strand”).
La otra cadena hija, cuyo molde es la cadena del DNA progenitora que
corre en dirección 5’→3’ es sintetizada de un modo singular, ya que
para poder crecer en esa dirección debe sintetizarse en dirección
opuesta al avance de la horquilla de replicación. El problema se supera
haciendo de que la síntesis sea discontinua, lo cual significa que la
nueva cadena se sintetiza de a pequeños fragmentos y se le llama
cadena retrasada (“lagging strand”).
3. La Replicación es:
 4. La replicaciòn es Multifocal en Eucariotas y monofocal en
procariotas
• En eucariotas, para poder llevar a cabo la replicación en un tiempo
razonable, ha de ser multifocal, es decir, empezar por muchos puntos a la
vez. Se ha comprobado que en el DNA de células de mamíferos existen
cerca de 50 000 a 100 000 replicones.
• En cambio la replicación del DNA bacteriano es monofocal, es decir, existe
un sólo origen de replicación.

Replicación monofocal Replicación multifocal

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6/120076/bio23.swf::How%20Nucleotides%20are%20Added%20in%20DNA%20Replication
La replicación del DNA bacteriano
empieza en un único origen y procede
bidireccionalmente
• La síntesis del DNA se inicia en regiones especiales llamadas orígenes de
replicación.
• Los orígenes de replicación típicamente contienen múltiples secuencias
repetidas cortas. Estos segmentos de DNA singulares son reconocidos por
proteínas multiméricas que se unen al origen y, a su vez, reclutan hacia éste
otras enzimas de la replicación.
• Las regiones de origen suelen contener un segmento rico en AT. Esta
propiedad facilita el desenrollamiento del DNA doble hélice, porque hace
falta menor energía pares de bases de A-T que de G-C.

Secuencia del origen de

replicación bacteriano. Cada
origen está constituido por
secuencias similares; las
secuencias repetitivas de 13pb
(naranja) ricas en residuos de A
y T. Las secuencias repetitivas
de 9pb (marrón) existen en
ambas orientaciones.
 5. La replicación requiere de
Cebadores
• Para empezar la síntesis de DNA se requiere
una cadena corta de ribonucleótidos llamado
primer o cebador. Cada fragmento de Okazaki
(+- de 30 nucleótidos de largo).

REPLICACION DEL ADN

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0072437316/120076/micro04.swf::DNA%20Replication%20Fork
6. La replicación se realiza en la fase “S” del ciclo
celular
7. Es asincrónica: Las bandas R (ricas en G-C) se replican
durante la primera mitad del la fase S del ciclo celular y
las bandas G y Q (ricas en A-T) replican durante la
segunda mitad del ciclo celular.
9. La adición de desoxirribonucleótidos es de a uno por
vez en el extremo 3´ OH de la cadena en crecimiento.
 REQUERIMIENTOS DE LA REPLICACION
REQUERIMIENTOS PROTEICOS
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• DNA Helicasa: emplean ATP para separar las hebras del ADN, rompe los
puentes de H
• Proteínas SSB (Single- Strand binding), se une a las hebras simples del
ADN desenrrollado y la estabilizan.
• Topoisomerasas: Regulan el superenrrollamiento del ADN por esciciòn,
paso y cierre de la brecha del ADN. Clases: Tipo I y II(girasa, que requiere
la hidrólisis de ATP), éstas son blanco de antibióticos: Ej. novobiocina la
que impide la unión del ATP a la girasa. El ácido nalidíxico y la
ciprofloxacina dificultan la ruptura y empalme de las cadenas de ADN
(Infecciones urinarias).
 REQUERIMIENTOS DE LA REPLICACION

REQUERIMIENTOS PROTEICOS…..
• RNA primasa: Sintetiza fragmentos
cortos de ARN (3 a 12 nt),
complementarios a una de las
hebras del ADN molde: Cebadores o
primers, los que se eliminan al final
de la replicación.
• DNA Ligasa: Cataliza la formación del
enlace fosfodiéster entre el grupo 3´-
OH del extremo de la cadena con el
grupo 5´fosfato del extremo de otra.
• Pirofosfatasa: Hidroliza el
pirofosfato, favoreciendo la reacción.
 REQUERIMIENTOS DE LA REPLICACION
REQUERIMIENTOS PROTEICOS…..
• ADN Polimerasas (DNA Pol) Alargan la cadena de polinucleótidos. Se caracterizan
por:
• Sintetizan cualquier secuencia especificada por la doble cadena.
• Sintetizan en dirección 5´- 3´ agregando nt a un grupo 3´-OH
• Usan como sustratos los desoxirribonucleótidos trifosfatados (dNTPs) de Adenina,
citosina, timina y guanina.
• Necesitan un cebador para iniciar la síntesis.
• Producen cadenas nuevas que son complementarias y antiparalelas con respecto a la
cadena molde.
 REQUERIMIENTOS DE LA REPLICACION

REQUERIMIENTOS PROTEICOS….. ADN pol

• Son altamente procesivas, es decir agregan nt a la cadena sin
separarse de la cadena molde hasta finalizar la replicación.
• Pueden corregir errores de copiado, por lectura de prueba
(proofreading), que permite reconocer bases mal apareadas en el
extremo 3´ de la cadena en crecimiento, luego extraerlas gracias a
su actividad de exonucleasa.
 REQUERIMIENTOS DE LA REPLICACION

REQUERIMIENTOS NO PROTEICOS
• DNA molde o “template”
• Cebadores: Secuencias cortas de ARN
sintetizadas por la ARN primasa
• Los 4 desoxirribonucleótidos trifosfato:
(dATP, dCTP, dGTP, dTTP)
• Mg++
 DNA POLIMERASAS (DNA Pol)
 La DNA Polimerasa, agrega un nucleótido al extremo 3’ de la cadena de
DNA en crecimiento y forma un enlace fosfodiéster entre este extremo y el
grupo 5’-fosfato de nucleótido entrante.
 El nucleótido trifosfato entrante provee la energía necesaria para esta
reacción por la hidrólisis de los dos fosfatos terminales (PPi).
 Este pirofosfato es luego hidrolizado a fosfato inorgánico (Pi), lo cual
permite que la reacción de polimerización sea irreversible.

• La DNA Polimerasa no
se disocia después de
cada reacción, sino que
permanece asociada
con el DNA y se mueve
al próximo sitio de
polimerización.
 DNA HELICASAS Y PROTEÍNAS SSB.

– Una helicasa y las proteínas de unión a las monocadenas (SSB)

trabajan para desenrollar y mantener las cadenas de DNA separadas
antes del avance de la horquilla de replicación
– Las helicasas son una clase de enzimas capaces de desplazarse a lo
largo del DNA utilizando la energía de la hidrólisis del ATP, para
separar las cadenas.

- Las proteínas SSB

mantienen las
cadenas separadas
DNA Helicasa
 Topoisomerasas
Las Topoisomerasas tipo I relajan el DNA
(hacen desaparecer regiones superenrolladas)
por corte y cierre de una cadena del DNA.
Las Topoisomerasas tipo II cambian la
topología del DNa mediante el corte y la
reparación del DNA bicantenario.
 Etapas de la Replicación

Iniciación Elongación Término

Crecimiento
Reconocimien bidireccional y
to de orígenes anti paralelo Reconocimie
de de las hebras nto de
replicación, complementa señales de
separación de rias del ADN terminación,
hebras del molde,
ADN, crecimiento desemsambl
posicionamie semidiscontin aje de
nto de la ua y maquinaria
maquinaria semiconservat enzimática
enzimática. iva
coordinada
 Reconocimiento de orígenes de
Replicación del ADN
replicación Ori C (con repeticiones de 9
pb).
OriC se enrrolla alrededor de dnaA
(proteìna iniciadora).
dnaA denatura las repeticiones de 13 bp
y forma un “complejo abierto” de 45pb.
Un complejo formado por las proteínas
dnaB (helicasa) y dnaC se unen a la
EN PROCARIOTAS
región denaturada para - INICIACIÓN
formar un
“complejo pre cebador” complejo
prepriming (45bp).
dnaB y dnaC se unen a dnaA para curvar
y abrir la doble hélice. Las SSB estabilizan
al ADN.
La DNA gyrasa disminuye el
superenrrollamiento positivo, la dnaB
desenrrolla aun más el DNA.
Ingresa la primasa: dnaG , sintetiza el
primer o cebador para la síntesis de la
cadena lider.
En la cadena retrasada o discontinua la
helicasa y la primasa forman el móvil
llamado: “primosoma”, el que sintetiza
cebadores cada 1000 o 2000 nt.
En E. coli la ADNpol III está asociada a
otras proteínas accesorias: proteínas de
 Las DNApol alargan la cadena de
polinicleótidos.
E. Coli tiene por lo menos 5 ADNpol
diferentes, dos de ellas, la DNApol I y
Replicación del ADN
DNApol III participan en la replicación; las
otras tres participan en la reparación del
ADN.
La DNApol III es el encargado principal de
la replicación y agrega nt al extremo 3´.
Tiene dos actividades enzimáticas su
actividad polimerasa agregando
nucleótidos en direcciòn 3´- 5´y su
EN PROCARIOTAS-
actividad exonucleasa ELONGACIÓN
de 3´-5´
posibilitando la corrección de errores.
La cadena lider es sintetizada de modo
continuo por la ADNpol III. En la cadena
retardada o discontinua se forma un
bucle y el molde de la misma atravesaría
el centro activo de una subunidad de la
ADNpol III en el mismo sentido que el
molde de la cadena lider lo hace en la
otra subunidad. ADNpol III debe
abandonar el molde de la cadena
retrasada luego de haber añadido 1000nt,
entonces se forma un nuevo bucle y se
sintetiza un nuevo cebador para iniciar la
síntesis de otro fragmento de Okasaki.
Los cebadores de la cadena retrasada son
eliminados por la ribonucleasa ARNHasa
y la ADNpol I, ésta también rellena los
 Replicación del ADN

EN PROCARIOTAS- TERMINACIÓN
En E. coli, la replicaciòn finaliza
cuando una horquilla de replicaciòn
se encuentra con el otro lado del
cromosoma circular en el lugar de
terminación, la región ter. Hay una
proteína de terminación llamada Tus
que se une a secuencias de
terminación.
Tus bloquea a la helicasa, obstruye la
horquilla de replicación y se impide
el proceso.
Los cromosomas hijos entrelazados
son luego deligados por la
topoisomeras IV (DNA pol tipo II)
 REPLICACIÓN EN EUCARIOTAS
• Él tamaño del genoma es mucho mas grande.
• Se requiere que el inicio sea multifocal.
• Los cromosomas son lineales.
• El ADN molde esta asociado a histonas y el ensamblaje de los
nucleosomas se produce inmediatamente después de la replicación.
• Los orígenes de replicación: oriR son secuencias de replicación
autónoma: ARSs, las que presentan dos regiones que se unen a distintas
proteínas que desestabilizan la doble hélice.
• La región A se une a factores transcripcionales: EF2, así como a la
topoisomerasa, helicasa y la ARN primasa.
• Los oriR están asociadas a las proteínas ORC (origen recognition
complex), el que es requerido para la activación de los oriR.
• Al comienzo de la fase S, ORC recluta otras proteínas: MCM
(minichromosome maintenance proteins) y cdc6 (cell division cycle)
con las que forma un complejo mayor llamado pre-RC (pre replication
complex)
 REPLICACIÓN EN EUCARIOTAS…
• Él complejo mayor llamado pre-RC (pre
replication complex) cataliza el inicio de la
replicación, luego de ser inducido por el factor
SPF (S-phase promoting factor o factor
promotor de la replicación).
• La topoisomerasa II disminuye los super
enrrollamientos positivos en el DNA.
• Se han identificado mas de 12 ADNpol
eucariota, siendo las más comunes: α, β, σ, ϒ, ε
 REPLICACIÓN EN EUCARIOTAS…..
ADNpol de células eucariotas

ADNpol Actividad de Actividad 3´- 5 Función celular

ADNpol 5´-3´ ´exonucleasa
Alfa (α) Si No Iniciación de la síntesis del ADN nuclear y
reparaciòn del DNA; actividad primasa.
Beta (β) Si No Reparaciòn y recombinaciòn del ADN
nuclear.
Delta ( σ) Si Si Síntesis de la cadena lider y retrasada del
ADN nulcear, reparación del ADN y síntesis
del DNA con lesiones interpuestas.
Gamma ( ϒ) Si Si Replicación y reparación del ADN
mitocondrial.
Epsilon (ε ) Si Si Desconocida; probablemente reparación y
replicación del ADN nuclear.
 REPLICACIÓN EN EUCARIOTAS…
• La ADNpol Alfa (α) tiene actividad primasa, sintetiza el
primer.
• La ADNpol Delta ( σ) sintetiza la cadena lider como la
retardada y puede también llenar espacios entre los
fragmentos de Okasaki después de la eliminación del
cebador.
• La ADNpol se une a proteínas de enganche de carga,
factor de replicación C (RFC) reconoce y se une al ADN
entre el cebador y el molde.
• Las proteínas de enganche deslizante: antígeno nuclear
de proliferación (PCNA), se unen adyacentes a las
proteínas de enganche de carga, formando un anillo
alrededor del DNA molde.
 REPLICACIÓN EN EUCARIOTAS…
• Las proteínas de unión al DNA monocatenario,
el factor de replicación (RPA), estabilizan la
cadena molde de DNA desenrollada por la
helicasa.
• Los cebadores son eliminados por una nucleasa
reparadora y su lugar lo ocupa una secuencia
equivalente de ADN sintetizada por la ADNpol
Delta ( σ).
• El proceso culmina al actuar la ADN ligasa.
 REPLICACIÓN EN EUCARIOTAS…
• Como la ADNpol sólo agrega nt al extremo 3´-OH es un
problema en ADN lineales.
• Cuando una hebra retrasada se encuentra al final de la molécula
de ADN y se elimina el último primer por la exonucleasa 5´- 3´, el
hueco final no puede ser rellenado porque no existe extremo 3
´al que unir nt. Por tanto el ADN lineal corren el riesgo de
producir moléculas de ADN hijas mas pequeñas. Esto se
soluciona incorporando secuencias de ADN altamente repetitivo
o telómeros ( con alto contenido de G y la secuencia TTAGGG en
humanos).
• Una ADNpol llamada telomerasa cataliza la formación de copias
adicionales de la secuencia telomérica, compensando el
acortamiento gradual en ambos extremos de los cromosomas
durante la replicación.
 IMPORTANCIA DE LA REPLICACIÒN DEL ADN

• La replicación del material genético es esencial para la

perpetuación de las especies, reparación de tejidos y
crecimiento de los seres vivos.
• Errores en la replicación son el origen de las
enfermedades hereditarias y la causa primaria de
cánceres.
• Los patógenos (microbios que causan enfermedades)
también se replican, entender estos procesos permite
establecer terapias específicas.
• Muchos antibióticos inhiben la replicación de
microorganismos, controlando las infecciones.
• Replicaciòn
paso a paso http://www.learnerstv.com/animation/biology/repli
cation.swf
Sugiero visitar las siguientes direcciones, ayudará a la
comprensión de este importante proceso.
•http://www.mhhe.com/biosci/bio_animations/04_MH_DNAReplicati
on_Web/index.html
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hapter14/structural_basis_of_dna_replication.html
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hapter3/animation__dna_replication__quiz_1_.html
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s/dna_replication/index.html
• Replicaciòn del ADN en españo;
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