Tecnicas
histologic
as Nombre:Yajaira
Gavilanez Docente:Dr.
Andres Muenala 1ro F
Técnicas
Para el estudio morfológico de las células, tejidos y
histológicas
órganos (histología), que permite hacer una
descripción de la estructura de sus componentes, se
recurre a una serie de métodos para conseguir
preparados histológicos permanentes, llamados
laminillas o preparaciones, ya que los órganos son
gruesos y es necesario obtener cortes finos,
suficientemente delgados para examinarse
al
microscopio óptico. Los cortes se efectúan con un
aparato denominado micrótomo, pero antes los
tejidos deben pasar por diversos tratamientos que
constituyen la técnica histológica.
Paso
1)Obtención del tejido
s
El tejido se puede obtener de una biopsia de un órgano de un paciente o de un animal vivo,
o una muestra de
un órgano o tejido de una persona o de un animal post mortem; en dicho caso, se dice que
el material proviene de una necropsia.
2)Fijación
Tiene por objetivo preservar la estructura, la ultraestructura y la composición química de
las células y de los tejidos de manera tal que su observación por medio del microscopio
revele fielmente la morfología y la localización de sus distintos componentes.
Los fijadores pueden ser:
Fijadores químicos: Fijadores simples: microscopia óptica es el formaldehído 4% P/V, microscopia electrónica es el
glutaraldehído.
Fijadores complejos: La más empleada en la microscopia óptica es la mezcla de Bouin, que contiene ácido pícrico, formol y
ácido acético. Otras mezclas son el líquido de Zenker (bicromato, acético) y el líquido de Helly (bicromato, formol).
Fijadores físicos: Frío: Se emplea la congelación, la cual se puede realizar en nitrógeno líquido o por medio de mezclas
refrigerantes con hielo seco y acetona. Los bloques de tejido se mantienen en congeladores (freezers) y se cortan en
secciones utilizando un equipo denominado crióstato.
3)Deshidratación
La deshidratación se logra mediante pasajes en alcoholes de gradación creciente (alcohol 50°, 70°, 96°
y 100°). Luego el tejido se sumerge en un solvente orgánico, generalmente xileno o tolueno, que
desplaza al alcohol y que es solvente de la parafina. Durante este paso, el tejido se vuelve translúcido,
razón por la que esta fase se conoce como aclaración. Si la muestra se ve de «aspecto lechoso», la
deshidratación ha sido insuficiente y hay que recomenzar el proceso.
4)Inclusión
El bloque se embebe en parafina o medios sintéticos análogos como el paraplast.
A temperatura ambiente, la parafina (o el paraplast) tiene la consistencia de una vela.
A continuación, se hacen otros dos pasajes de 2 h cada uno en parafina líquida pura
durante los cuales la parafina desplaza al xilol.
5)Corte
Los tacos de parafina que contienen la muestra se cortan con un instrumento
denominado micrótomo, generalmente, las secciones para microscopio óptico tienen
un espesor de 5 mm. Las secciones se levantan con un pincel y se sumergen en un
baño termostático con agua a 40 °C. Esto hace que las secciones se estiren.
6) Desparafinación e
Para colorear las secciones, dado quehidratación
los colorantes son soluciones acuosas, es necesario quitar la
parafina. Esto se logra sumergiendo los portaobjetos con las secciones en xilol dentro de un recipiente ad
hoc denominado Coplin. Este solvente orgánico remueve la parafina. Luego, las secciones se hidratan
sumergiéndolas en soluciones con alcoholes de graduación decreciente (100°, 96°, 70° y 50°) y, finalmente,
se hace un pasaje en agua destilada
7) Coloración
Las secciones se tiñen de rutina con hematoxilina y eosina. La hematoxilina es un colorante natural que
se obtiene de una leguminosa de América Central, el «palo de Campeche», y la eosina es un colorante
artificial derivado de la fluoresceína. Primero se sumergen los portaobjetos en una solución con
hematoxilina, luego se realiza el viraje con agua de canilla o una solución alcalina débil (el color de la
hematoxilina cambia del rojo al azul) y, por último, se sumergen las secciones en eosina (color rojo).
8) Deshidratación
El siguiente paso es el montaje, para el que se emplea una sustancia hidrofóbica. Dado que
las secciones están en un medio acuoso durante la coloración, es necesario
deshidratarlas mediante pasajes en alcoholes de graduación creciente (50°, 70°, 96° y
100°) y luego sumergirlas en xilol, el cual desplaza al alcohol y permite la penetración del
medio de montaje.
9) Montaje
Se añade una gota de bálsamo de Canadá o de un medio de montaje sintético (DPX® o Histomount®) e
inmediatamente se deposita una delgada lámina de vidrio —denominada cubreobjeto— sobre la sección evitando la
formación de burbujas de aire. Una vez que el medio de montaje se solidifica, el preparado está listo para su
observación al microscopio sin riesgos de que se mueva el cubreobjeto
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