Departamento de Análisis Instrumental

Facultad de Farmacia
Universidad de Concepción

INTRODUCCIÓN A LA
ESPECTROMETRÍA DE MASAS

Dr. Luis Bustamante Salazar, 2022

INTRODUCCION

Ocho aplicaciones emergentes de la espectrometria de masas

1. Aplicaciones en metabolómica y proteómica

2. Descubrimiento de biomarcadores

3. Screening en ciencias biológicas

4. Aplicaciones en genetica y epigenetica

5. Análisis forense

6. Screening de enfermedades en recién nacidos

7. Aplicaciones en ciencias geológicas y espaciales

8. Propiedades organolépticas en alimentos

Imagination and creativity are the limit

https://www.technologynetworks.com/analysis/lists/eight-emerging-applications-of-mass-
spectrometry-288234
INTRODUCCION
SEP
N TACIÓN AR A
CIÓ
ME ND
FRAG EM
ASA
S1

S2
ASA
Abandonad toda

EM

EN
esperanza aquellos

FO
ND
que entren aquí

QU
CIÓ

E
AR A

COLECCIÓN
S EP
DETE
CCIÓN

N
CIÓ
IN

ZA
T ER

NI
PR

IO
ET
AC

A
A FÍ
IÓ

GR
N

TO
OMA
CR

Las 9 círculos etapas del

infierno análisis MS
EL MANTRA DE LA ESPECTROMETRÍA DE MASAS

Un espectrómetro de masas SOLO puede analizar

iones en fase GASEOSA.

Un espectrómetro de masas mide la relación

masa-carga (m/z). Si la carga es 1, entonces m
corresponde a m/z.

No existe un espectro de masas correcto, ya que

cada parte del proceso puede afectar el resultado
final.

El espectro de masas NO MIENTE, si no entiende el

resultado debe repasar química orgánica.
(La interpretación sistemática de espectros de
masas no forma parte del curso).
CONCEPTOS CLAVES EN ESPECTROMETRÍA DE MASAS

Espectrometría de masas: Técnica analítica que separa y mide moléculas y átomos (iones)
de acuerdo a su relación masa-carga (m/z)

Espectro de masas: Representación bidimensional de numerosos datos obtenidos a

diferentes m/z. Existe una presentación analógica (que grafica todos los datos obtenidos) y
una digital (que grafica el “centroide”)

Intensidad o Línea que pasa por centroide

proporcional a la intensidad del peak
int. relativa
Peak base

100% Iones isotopos

Iones fragmento
Centro de gravedad Ion molecular o
del peak psuedo-molecular
Áreas balanceadas para
obtener el centro

10-20% inferior que se m/z

ignora en el análisis

NO CONFUNDIR PEAK CROMATOGRÁFICO CON PEAK DE MASAS

CONCEPTOS CLAVES EN ESPECTROMETRÍA DE MASAS

Peak de isótopo: Se observa presencia de isotopo del carbono ( 13C) principalmente. Tiene
una abundancia natural del 1.1%. Existen otros elementos que presentan isotopos naturales

Masa (Da) Abundancia (%)

Hidrogeno H 1 99.99
D o 2H 2 0.01
Carbono 12
C 12 98.91
13
C 13 1.1
Nitrógeno 14
N 14 99.6
15
N 15 0.4
Oxigeno 16
O 16 99.76
17
O 17 0.04
18
O 18 0.2
Cloruro 35
Cl 35 75.77
37
Cl 37 24.23

Dalton (Da) = Atomic mass unit (amu)

CONCEPTOS CLAVES EN ESPECTROMETRÍA DE MASAS

Masa nominal y exacta: valor calculado de una molécula usando escala amu sin uso de
decimales o incorporando al menos 4 decimales.

Masa precisa: valor medido experimentalmente. Depende del diseño, resolución y

calibración del espectrómetro de masas.

Masa monoisotópica: valor calculado de una molécula usando la masa exacta de los
isotopos atómicos mas estables.

Masa molecular: valor calculado de una molécula usando la masa promedio de todos los
isotopos atómicos presentes
CONCEPTOS CLAVES EN ESPECTROMETRÍA DE MASAS

Formula molecular: C7H12O6

Nominal = 12*7+1*12+6*16 = 192

Monoisotopica= 192,063385

Molecular= 192,167

Ventajas del uso de masa exacta: Isobaros pueden ser diferenciados, pej. CO and N2

Masa nominal = 28 Da Masa nominal = 28 Da

Masa exacta = 27.9949 Da Masa exacta = 28.0061 Da

CONCEPTOS CLAVES EN ESPECTROMETRÍA DE MASAS

Espectrómetro de masas: Instrumento que permite la separación y medición de iones de

acuerdo a su m/z. Pueden ser de alta resolución o baja resolución.

Ancho a mitad de altura

m/z

𝒎/ 𝒛
𝑹𝒆𝒔𝒐𝒍𝒖𝒄𝒊𝒐𝒏=
𝒂𝒏𝒄𝒉𝒐 𝒂 𝒎𝒊𝒕𝒂𝒅 𝒅𝒆 𝒂𝒍𝒕𝒖𝒓𝒂

NO CONFUNDIR RESOLUCION CROMATOGRÁFICA CON RESOLUCION DE MASAS

CONCEPTOS CLAVES EN ESPECTROMETRÍA DE MASAS

Espectrómetro de masas: Instrumento que permite la separación y medición de iones de

acuerdo a su m/z. Pueden ser de alta resolución o baja resolución.

Resolución = 1
Masa menos exacta

Resolución = 20000

Resolución = 200000
Masa exacta!

NO CONFUNDIR RESOLUCION CROMATOGRÁFICA CON RESOLUCION DE MASAS

CONCEPTOS CLAVES EN ESPECTROMETRÍA DE MASAS

Espectrómetro de masas: Instrumento que permite la separación y medición de iones de

acuerdo a su m/z. Pueden ser de alta resolución o baja resolución.
350
C16H14O9 C15H10O8S
350.06378 350.00964

NO CONFUNDIR RESOLUCION CROMATOGRÁFICA CON RESOLUCION DE MASAS

COMO OBTENER UN ESPECTRO DE MASAS

Aducto
Ion reactivo
con capacidad
de ceder H+
[M+H]+

[M-H]-
CH2OH+ Ion reactivo
con capacidad
CHO+ de aceptar H+
CH3+
CH3OH•+
INTRODUCCION DE MUESTRA

Tipos de sistema de introducción de muestras: normalmente acoplados a la ionización

Sondas sólidas Introducción de líquidos

INTRODUCCION DE MUESTRA

Tipos de sistema de introducción de muestras: normalmente acoplados a la ionización

Sistemas cromatográficos (LC y GC)

Analizador Fuente de
Detector
de masas ionización
Columna
cromatográfica
de gases
Bomba de
vacío
FUENTE DE IONIZACIÓN: IONIZACIÓN ELECTRÓNICA (EI)

Características:

 Muestras es estado gaseoso

 Alta energía (70 eV)
 Analito reacciona con haz de electrones
 Muy reproducible
FUENTE DE IONIZACIÓN: IONIZACIÓN ELECTRÓNICA (EI)
FUENTE DE IONIZACIÓN: IONIZACIÓN QUÍMICA (CI)

Características:

 Presión más alta (que EI) por la entrada

de un gas reactivo
 Muestras es estado gaseoso
 Muy alta energía (más alta que en EI)
 Gas reactivo > Analito = Ionización de
gas reactivo > Ionización de analito
FUENTE DE IONIZACIÓN: IONIZACIÓN POR ELECTROSPRAY (ESI)

Características:
 Acopla introducción de muestra
líquida (nebulización) y ionización
 Ionización a presión atmosférica
 Ionización a alta energía (5000 V) y
el potencial aplicado puede ser
positivo o negativo
 El solvente se ioniza junto a la
muestra

Gas de secado

Gas de envoltura
Flujo de iones
Amonio o amina Ácido orgánico
Flujo de líquido Presión
(FM - ≤ 0,5 mL/min atm.
Gas de secado
Potencial + ó – Vacío Potencial - ó +
(2 – 5 kV)

Al analizador de masas
FUENTE DE IONIZACIÓN: IONIZACIÓN POR ELECTROSPRAY (ESI)
OTRAS FUENTES DE IONIZACIÓN: IONIZACIÓN QUÍMICA Y
FOTOIONIZACIÓN A PRESIÓN ATMOSFÉRICA (APCI Y APPI)
Potencial + ó –
(500 eV)

Calefactor
Gas de envoltura
Flujo de iones

Flujo de líquido
(FM - ≤ 0,5 mL/min Presión
atm.
Vacío Potencial - ó +

Potencial + ó – Al analizador de masas

(10 eV)

Calefactor
Gas de envoltura
Flujo de iones

Flujo de líquido
(FM - ≤ 0,5 mL/min Presión
atm.
Vacío Potencial - ó +

Al analizador de masas
 Ionización
electrónica (EI)

Ionización
química (CI)

Ionización
química a presión
atmosférica
(APCI)

Ionización por
electrospray (ESI)
OTRAS FUENTES DE IONIZACIÓN: IONIZACIÓN POR DESORCIÓN
LASER ASISTIDO POR MATRIZ (MALDI)
Recipiente Muestra sólida Capa de matriz
Laser Laser
Pulsado
Pulsado
Ion del
analito

Al
analizador
de masas
Desorción de moléculas ionizadas
con una sola carga [M+H]+ o [M-H]-
Ion de
matriz

Matrices
• α-cyano-4-hydroxycinnamic acid (α-cyano)
• Sinapinic acid
• 2,5-Dihydroxybenzoic acid (DHB)
EJEMPLO: DIFERENCIAS EN ESPECTROS DE MASAS ESI Y MALDI

Apo-mioglobina
Masa Nominal: 16.949
MALDI: APLICACIONES BIOMÉDICAS
OTRAS FUENTES DE IONIZACIÓN : DESORCIÓN POR ELECTROSPRAY
(DESI)
Recipiente Muestra sólida

Gotas de solvente
cargado

Moléculas de interés
se ionizan como en ESI
FUENTE DE IONIZACIÓN: DESORCIÓN POR ELECTROSPRAY (DESI)

(a) imagen DESI para ver

distribución de
cocaína (m/z 304) en
huella;
(b) huella generada por
imagen DESI, junto a
sus puntos de interés
relevantes;
(c) Molécula no ID (m/z
235) Presente en dos
huellas superpuestas;
(d) Δ9-THC (m/z 313)
presente en una sola
huella
SELECCIÓN DE UNA FUENTE DE IONIZACIÓN APROPIADA
ANALIZADOR DE MASAS

Función:
 Separar iones de acuerdo a su relación masa-carga (m/z)
 Enfocar y transferir iones hacia el detector

Dependiendo del objetivo del análisis, se debe seleccionar el analizador de masas más
adecuado.

Se debe considerar:
 Resolución
 Precisión
 Rango dinámico
Tiempo de vuelo
Cuadrupolo Orbitrap
Trampa de iones Ciclotrón de resonancia de iones

Separación de iones en el tiempo Separación de iones en el espacio

Analizadores cambian alguna condición
Analizadores obtienen un espectro
de operación en el tiempo para obtener
de masas (casi)simultáneamente.
un espectro de masas (iones colectados
(no existe un escaneo sucesivo)
de manera sucesiva en el tiempo- Scan)
PASO LIBRE Y ALTO VACÍO

Separación de iones por relación masa/carga

Colisión con moléculas gaseosas

Fragmentación Desviación de trayectoria

Reacciones no deseadas

A partir de la teoría cinética de los gases

L = Paso libre (m) T = Temperatura (K)

K = Constante de Boltzmann p = Presión (Pa)
σ = Sección transversal de colisión (m2)
PASO LIBRE Y ALTO VACÍO

Separación de iones por relación masa/carga

Colisión con moléculas gaseosas

Fragmentación Desviación de trayectoria

Reacciones no deseadas

A partir de la teoría cinética de los gases

En condiciones normales:
T = 300 ºK
K =1.38 x 10-21 JK-1
Si: L = 1 m, p = Presión (Pa)
p = 66 nbar σ = 45 x 10-20 m2

ALTO VACÍO
ANALIZADOR DE MASAS: CUADRUPOLO

Característica: Selección de m/z en el tiempo,

usa un cambio del potencial electromagnético
(oscilante)

Generación de trayectoria estable para m/z seleccionado.

Las otras m/z generan trayectoria irregular

Son comúnmente usados como prefiltros,

sistema de guía de iones o celdas de colisión

https://www.youtube.com/watch?v=TrLMNRyQiaA
ANALIZADOR DE MASAS: CUADRUPOLO

Característica: Selección de m/z en el tiempo,

usa un cambio del potencial electromagnético
(oscilante)

Generación de trayectoria estable para m/z seleccionado.

Las otras m/z generan trayectoria irregular

Son comúnmente usados como prefiltros,

sistema de guía de iones o celdas de colisión
ANALIZADOR DE MASAS: CUADRUPOLO DE TRAMPA DE IONES

Característica: Funciona como un

cuadrupolo, pero la disposición es
ortogonal. Usado normalmente para Fuente de
experimentos MS/MS iones Detector
Sigue 2 Etapas:

2) Aumento del movimiento lineal de iones

Fuente de 1) Disminución del movimiento lineal de iones

iones Detector
ANALIZADOR DE MASAS: ORBITRAP

Característica: Analizador de alta resolución.

Funciona como una trampa de iones
electrostática. El impulso de entrada
contrarresta la atracción del electrodo central.
Electrodo derecho

Electrodo Izquierdo

Iones oscilan sobre eje del electrodo.

Electrodo central
Electrodo externo

Interferograma Espectro de masas

Transformada
Int. relativa

de fourier Lectura transientre de la frecuencia de

cada ion a un m/z determinado. Más n°
iones generará un interferograma
Tiempo (ms)

https://www.youtube.com/watch?v=fqfyyravJkA
2:20
ANALIZADOR DE MASAS: ORBITRAP

Característica: Analizador de alta resolución.

Funciona como una trampa de iones
electrostática. El impulso de entrada
contrarresta la atracción del electrodo central.
Electrodo derecho

Electrodo Izquierdo

Iones oscilan sobre eje del electrodo.

Electrodo central
Electrodo externo
ANALIZADOR DE MASAS: TIEMPO DE VUELO (TOF)

Característica: Analizador de alta resolución. Iones con la misma carga tienen en principio
la misma energía cinética, pero distintas velocidades, dependiendo de su masa.
Señal de inicio bien definida

Pulsador

Se aplica un potencial de 5 a 30 kV

Iones mas livianos, mayor velocidad En espectrómetros de masas, la aceleración esta

Iones mas pesados, menor velocidad dispuesta ortogonal a la fuente de ionización

Iones de igual m/z pueden tener ≠ velocidad debido comienzo

irregular provocado en fuente o por una aceleración irregular
ANALIZADOR DE MASAS: TIEMPO DE VUELO (TOF)

Uso de reflector: lentes que aumentan voltaje a Mejora de exactitud en la medida de masa
medida que se alejan del acelerador o pulsador

Mayor resolución
Reflector
Detector en
modo reflector Detector en
modo lineal

Región de Enfoque fuera de tiempo

vuelo
Baja resolución
ANALIZADOR DE MASAS: TIEMPO DE VUELO (TOF)

Uso de reflector: lentes que aumentan voltaje a Mejora de exactitud en la medida de masa
medida que se alejan del acelerador o pulsador

https://www.chromacademy.com/Mass_Analyzers_Traps_and_TOFs_The_Essential_Guide.html?tpm=1_2
Detectores

Energía de Partículas Señal amplificada

partículas Conversión secundarias y registrada

Electrones Fotones

Detector de Faraday

 Iones son neutralizados por

aceptación o donación de
electrones de la pared del detector.

 Intensidad relativa se relaciona

con intensidad de corriente.

 Se deben eliminar señales

producidas por electrones
producidos por colisión del ion
Detectores

Amplifica pequeñas corrientes

Multiplicador de electrones
provenientes de partículas

Multiplicador de electrones de dínodo discreto

 Cadena de dínodos

 Potencial acelera electrones

secundarios hacia el ánodo

 Cascada de electrones

Multiplicador de electrones de dínodo continuo

 Un solo dínodo con curvatura

 Potencial acelera de electrones hacia el

ánodo y produce cascada de electrones

 Placa multicanal (MCP)

ESPECTRÓMETRO DE MASAS

Comparación de espectrómetros de masas

Cuadrupolo Trampa de Tiempo de vuelo Orbitrap FT-ICR

(Q) iones (TOF)
Precisión de medida de masa 1 Da 1 Da 2 mDa 0.5 mDa 0.1 mDa
Resolución 1 1 10,000 100,000 1,000,000
Medio- Medio-
Rango lineal Muy alto Bajo Alto bajo bajo
Costo (MM Pesos $) 30 130 130 160 660
MODOS DE USO DEL ANALIZADOR DE MASAS

ANÁLISIS MS DIRECTO.
Sin separación de una muestra compleja!: co-elución de compuestos
Ventaja:
- Análisis rápido
- Fácilmente adaptable como método de clasificación

Desventaja:
- Ionización de múltiples moléculas, dificultando interpretación espectral
- Fenómenos de supresión iónica

AUMENTAR LA COMPLEJIDAD DE LA
ADQUISICIÓN DE LOS DATOS

Ionización de m/z Fija m/z Variable

todos los
compuestos
ESPECTRÓMETRO DE MASAS
ESPECTRÓMETRO DE MASAS

Reflector

TOF
Spectrometer
ESPECTRÓMETRO DE MASAS
ESPECTRÓMETRO DE MASAS
MODOS DE USO DEL ANALIZADOR DE MASAS

ANÁLISIS DE MASA PRECISA

Intens. 091018_M1M2M12inicial_SPLneg1_10_01_222.d: -MS, 6.5min #1804
x104
129.0539

2.0

1.5

1.0 258.9934

0.5 96.9606 197.0436

225.1573 306.0163
458.0955
0.0
091018_M1M2M12inicial_SPLneg1_10_01_222.d: -MS2(258.9934), 20.0-50.0eV, 6.5min #1805
179.0340
2000

1500

1000 135.0449

500 258.9977
96.9593 216.0856
0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 m/z
𝒎 𝒎
−
𝒛 𝒎𝒐𝒏𝒐𝒊𝒔𝒐𝒕 ó 𝒑𝒊𝒄𝒂 𝒛 𝒎𝒆𝒅𝒊𝒅𝒂 𝟔
𝑬𝒓𝒓𝒐𝒓 ( 𝒑𝒑𝒎)= ∗ 𝟏𝟎
𝒎
𝒛 𝒎𝒐𝒏𝒐𝒊𝒔𝒐𝒕 ó 𝒑𝒊𝒄𝒂

𝟐𝟓𝟖 ,𝟗𝟗𝟏𝟖 −𝟐𝟓𝟖 , 𝟗𝟗𝟑𝟒 𝟔

𝑬𝒓𝒓𝒐𝒓 ( 𝒑𝒑𝒎 )= ∗ 𝟏𝟎 =− 𝟔 ,𝟏 𝒑𝒑𝒎
𝟐𝟓𝟖 ,𝟗𝟗𝟏𝟖

La medida está 0,0016 Da por sobre la masa exacta = -6,1 partes por millón
MODOS DE USO DEL ANALIZADOR DE MASAS

ANÁLISIS DE MASA PRECISA

 7 golden rules to ID assignation
Kind and Fiehn, 2007

#1. Restricción de elementos de acuerdo a MW (pej C: cpd 1000 Da. 1000/12 = 83 átomos C)

#2. Cumplir con reglas de LEWIS y SENIOR:

C,O,N completen última capa de valencia (s y p), Regla del Nitrógeno (número impar y RDBE
decimal), SENIOR - Suma de e valencias: >= (2x n átomos)-1 y >= 2x át. max valencia; - suma
de valencias o atomos con e impares debe ser par (sino aplica regla del nitrógeno)

#3. Filtrar según relación isotópica (filtramos elementos que consituyen formula)

#4. Cumplir con relación H/C (3 =< H/C >= 0.125)

#5. Cumplir con relación heteroátomo/C

#6. Cumplir con regla probabilidad heteroátomo (suma de heteroátomos N, O, P, S)

#7. Buscar presencia de TMS (C3H8Si)

MODOS DE USO DEL ANALIZADOR DE MASAS

ANÁLISIS DE MASA PRECISA

[M-H]- 258,9934
MODOS DE USO DEL ANALIZADOR DE MASAS

ANÁLISIS DE MASA PRECISA

Intens. 091018_M1M2M12inicial_SPLneg1_10_01_222.d: -MS, 6.5min #1804

x104
129.0539

2.0

1.5

1.0 258.9934

0.5 96.9606 197.0436

225.1573 306.0163
458.0955
0.0
091018_M1M2M12inicial_SPLneg1_10_01_222.d: -MS2(258.9934), 20.0-50.0eV, 6.5min #1805
179.0340
2000 [M-H-SO3]-
[M-H-SO 3-CO2]
-
1500
ESPECTRO “PURIFICADO”
1000 [M-H-CO2]- DE UN ION PADRE
135.0449
[HSO4]- (PRECURSOR)
500 258.9977
96.9593 216.0856 [M-H]-
0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 m/z
MODOS DE USO DEL ANALIZADOR DE MASAS

AJUSTE Y CALIBRACION DEL SISTEMA MS

Ajuste de parámetros asociados al detector de masas

Ajustes para formar, enfocar y transmitir iones con mínima perdida

Mejora en la sensibilidad
Mejora precisión de la medida (masa precisa)
2 Tripterpenos glucosidos (M1 = 1212,6 y M2 = 1228,6 m/z)
[M2+Na]+ [M2+Na]+

[M1+Na]+
[M1+Na]+

Mejora forma de pico,

resolución y sensibilidad
MODOS DE USO DEL ANALIZADOR DE MASAS

AJUSTE Y CALIBRACION DEL SISTEMA MS

Calibración de la escala m/z

Ajustes de voltajes en cuadrupolo/medida de tiempo de vuelo/medida de frecuencia

Serie de comparaciones con un estándar de fragmentación conocida

Ajuste de la escala de lectura

Mejora precisión de la medida

MODOS DE USO DEL ANALIZADOR DE MASAS

AJUSTE Y CALIBRACION DEL SISTEMA MS

Tipos de calibración
Calibración externa: Ajuste de escala en condiciones ideales. Ajuste al desarrollar el método
Calibración interna: Ajuste de escala en condiciones de medida. Ajusta variaciones entre
inyecciones
Lock-mass: Ajuste de escala en condiciones de medida. Ajusta variaciones entre e incluso
durante la inyección
Polidimetilciclosiloxano

𝒎 𝒎
−
𝒛 𝒎𝒐𝒏𝒐𝒊𝒔𝒐𝒕 ó 𝒑𝒊𝒄𝒂 𝒛 𝒎𝒆𝒅𝒊𝒅𝒂 𝟔
𝑬𝒓𝒓𝒐𝒓 ( 𝒑𝒑𝒎)= ∗ 𝟏𝟎
𝒎
𝒛 𝒎𝒐𝒏𝒐𝒊𝒔𝒐𝒕 ó 𝒑𝒊𝒄𝒂
MODOS DE USO DEL ANALIZADOR DE MASAS

AJUSTE Y CALIBRACION DEL SISTEMA MS

Uso de calibración interna o lock-mass

MODOS DE USO DEL ANALIZADOR DE MASAS

AJUSTE Y CALIBRACION DEL SISTEMA MS

Corrección de línea base (espectro base)

Sustracción de espectro obtenido en línea base a un espectro de masas medido

MODOS DE USO DEL ANALIZADOR DE MASAS

AJUSTE Y CALIBRACION DEL SISTEMA MS

Instrument performance troubleshooting

MODOS DE USO DEL ANALIZADOR DE MASAS
 EL CROMATOGRAMA Detector

Fase Móvil

Fase Estacionaria

Señal
analítica

Tiempo de
retención
 Columna
Analizador Fuente de cromatográfica
Detector
de masas ionización
m/z
216
200

Señal en el espacio 3D
100

100
OH 116
100
200

200 OH

Tiempo de retención
 m/z
m/z

Tiempo de retención
Tiempo de retención
MODOS DE USO DEL ANALIZADOR DE MASAS

Sistemas hifenados: Cromatografía-Espectrometría de masas.

Comúnmente uso de Q Identificación y Correcta determinación de m/z
cuantificación
de analitos
Ruido MS: moléculas no ionizadas
capaces de llegar al detector

Generación de iones (moleculares

y fragmentos): control de ruido,
calibrar enfoque de iones y
correcta determinación de m/z

GC
N° de Velocidad de
fragmentos generación
resueltos de datos

Interpretación Resolución
de espectros cromatográfica
MODOS DE USO DEL ANALIZADOR DE MASAS

Scan: selección de un rango de masas

Dimensión YX Dimensión YZ
Información espectral Información cromatográfica
Int.
Int.

m/z
Periodo que demora scan
t (min)
tlectura (ms)

Ventaja: - información cualitativa

Scan time (ms) Ciclos/s >= 10 - Información cuantitativa*
Desventaja: - menor relación S/R
Scan time α rango m/z α suavizado
 +EI EIC(58.1) Scan cond3.D

MODOS DE USO DEL ANALIZADOR DE MASAS

SIM: Monitoreo de un solo ion

Información cuantitativa

+ tlectura, - n° puntos, - n° en suavizado, < S/R

- tlectura, + n° puntos, + n° en suavizado, > S/R

+EI EIC(58.1) Scan cond3.D

Counts vs. Acquisition Time (min)

Pocos iones leídos, mejor relación S/N

Single Ion Monitoring Counts vs. Acquisition Time (min)

Dwell time (ms) Ventaja: - Mejora relación S/R

n° puntos xsmooth Ciclos/s Desventaja: - Información cualitativa perdida
MODOS DE USO DEL ANALIZADOR DE MASAS
m/z Variable
Abundancia relativa

Metil fenil cetona

m/z

TIC (suma de todos los iones)

XIC m/z 77
TIC: Total ion chromatogram
Abundancia relativa

XIC m/z 105

(Cromatograma de iones totales)

XIC ó EIC: EXtracted ion chromatogram

(Cromatograma de iones extraídos)

Tiempo de retención (min)

MODOS DE USO DEL ANALIZADOR DE MASAS
m/z Fija
Abundancia relativa

Metil fenil cetona

m/z

XIC m/z 77
Abundancia relativa

TIC: Total ion chromatogram

(Cromatograma de iones totales)

XIC ó EIC: EXtracted ion chromatogram

(Cromatograma de iones extraídos)

Tiempo de retención (min)

MODOS DE USO DEL ANALIZADOR DE MASAS

AUMENTANDO LA COMPLEJIDAD y
CON LA ADQUISICIÓN DE LOS DATOS
¿Qué ocurre con matrices complejas y compuestos co-eluídos en cromatografía?

En HPLC la ionización es suave: En GC la ionización es fuerte:

ESI, MALDI, APCI = ión pseudomolec y la EI, CI = ión molecular o pseudo, pero
fragmentación es baja o nula incluye fragmentación

2 problemas a resolver:
- ¿cómo resuelvo la mezcla de compuestos (iones moleculares o pseudo) coeluídos?
- ¿cómo obtengo más información estructural si no genero fragmentos?
Int.

Ionización de m/z Fija m/z Variable

todos los
Tiempo (min) compuestos
ESPECTRÓMETRO DE MASAS
ANALIZADOR DE MASAS: COMBINACION MS/MS QQQ

- Detectores de baja resolución

- Excelente rango lineal
- Alta precisión
- Bajo límite m/z
Cuantificar

Identificar

MODOS DE USO

Rango de m/z a analizar: <2000 m/z

ESPECTRÓMETRO DE MASAS

Reflector

TOF
Spectrometer
ANALIZADOR DE MASAS: COMBINACION MS/MS QTOF

- Detectores de alta resolución

- Ligero menor rango lineal
- Mejor para identificar (medida de masa exacta)

Cuantificar

Identificar

- Tiene los mismos modos

de análisis que QqQ
- Tiene un mayor límite de
m/z
ESPECTRÓMETRO DE MASAS
ESPECTRÓMETRO DE MASAS

- Detectores de más alta resolución

- Menor rango lineal
- Mejor para identificar (medida de masa más exacta)

Cuantificar

Identificar

- Tiene los mismos modos

de análisis que QqQ y
QTOF

- Tiene un aún mayor

límite superior de m/z
MODOS DE USO DEL ANALIZADOR DE MASAS

Análisis MS/MS
dependiente de datos
(DDA)
Int.

Ionización de m/z Fija m/z Variable

todos los
Tiempo (min) compuestos

Análisis MS/MS
independiente de datos Selección automática del ion más intenso
(IDA)
Int.

Ionización de m/z Variable m/z Variable

todos los
Tiempo (min) compuestos
CÓMO SE EVALÚA EL METABOLOMA MEDIANTE CROM-MS
Monitero de reacciones Análisis de datos,
múltiples
Muestras:
comparación de
Metabolómica dirigida
•Tejidos, células
Estándares grupos (Targeted metabolomics)
•Plasma y
biofluídos
VALIDACION •Extractos varios CUANTIFICACIÓN
ANALITICA de metabolitos
pre-establecidos
Curvas de Calibracion CUANT.
Sep./ion. de MUESTRAS
estándares Análisis LC/MS Estudios para
de extractos de confirmar
hipótesis
metabolitos

Muestras: EIC de muestras ID. Espectros MS, Metabolómica no-dirigida

•Tejidos, células superpuestos MS/MS y estándar
(Untargeted metabolomics)
•Plasma Extractos
varios
SEMICUANT. Perfil
•Muestras control (QC)
metabólico “global”
de m. analizadas
Análisis LC/MS Alineamiento de muestras
de extractos de y análisis de datos Estudios para
metabolitos
generar
hipótesis

doi: 10.1038/nrm3314