PCR:
Reacción en cadena
de la polimerasa
E. E. Biología Molecular
Dr. Adrian Raya Trigueros
Angie Yamilet Soto Castro
¿QUÉ ES?•
Es una técnica de laboratorio que
implica la amplificación de una
secuencia específica de DNA in vitro.
Fue desarrollada por Kary Mullis en
1983.
¿PARA QUÉ SIRVE?•
Es el proceso inicial en la mayoría de
las metodologías actuales y de uso
sistemático en la identificación de
variantes génicas.
• ¿QUÉ SE UTILIZA?
• Una mezcla equimolar de los desoxinucleósidos
trifosfato de adenina, guanina, citosina y timina
• Una mezcla de reacción que contenga una
solución amortiguadora
• Un cofactor enzimático
• Una DNA polimerasa dependiente de DNA
termoestable (Taq polimerasa)
• Dos cebadores de 16 a 24 nucleótidos de
longitud
• ¿EN QUÉ CONSISTE?
La síntesis enzimática a cargo de la Taq DNA polimerasa, y dirigida por los
cebadores de las nuevas cadenas de DNA en la PCR, se lleva a cabo
mediante una serie de cambios de temperatura programados de forma
automática en termociclador.
El ciclo de temperaturas se repite unas 25 a 35 veces y, dado que en cada
ciclo teóricamente se produce el doble de la cantidad de copias del DNA
que existían, al final de la reacción se obtienen billones de moléculas de
una región específica de DNA ( = 3.4 x copias al final de la PCR) y que es de
interés para el diagnóstico molecular.
Cada ciclo está compuesto por
tres temperaturas: de
desnaturalización, alineación y
extensión.
La temperatura de
desnaturalización (94°C) permite
que el DNA de doble cadena se
separe en dos cadenas sencillas
de DNA.
La temperatura de alineación
favorece la unión de los
cebadores a sus cadenas
complementarias, de tal modo
que se forman así regiones de
DNA de doble cadena con un
extremo 3’ OH libre. La
temperatura de alineación es
variable y está determinada por
la secuencia de los cebadores.
La temperatura de extensión
(72°C) hace posible la síntesis
de las cadenas nuevas de
DNA por una DNA polimerasa
termoestable, como la Taq
DNA polimerasa obtenida del
microorganismo termofílico
Thermus aquaticus, la cual
tolera varios ciclos con
temperaturas >90ºC sin
perder ostensiblemente su
actividad catalítica.
• BIBLIOGRAFÍA
● Del Castillo Ruiz, V., Uranga Hernández, R. D. & Zafra de la Rosa, G. F.
(2019). Genética clínica (2.a ed.). Manual Moderno.
● Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) (artículo). (s. f.). Khan
Academy. Recuperado 24 de octubre de 2022, de
https://es.khanacademy.org/science/ap-biology/gene-expression-and-reg
ulation/biotechnology/a/polymerase-chain-reaction-pcr
● Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) | NHGRI. (s. f.).
Genome.gov. Recuperado 24 de octubre de 2022, de
https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/Reaccion-en-cadena-de-
la-polimerasa
