COPROCULTIVO
MASS. CARLOS MAURICIO YANES
COPROCULTIVO:
• Es un método de diagnóstico microbiológico que permite
identificar diferentes organismos causantes de
enfermedades gastrointestinales… es decir, determinar la
presencia de bacterias enteropatógenas que infectan el
intestino, penetrando o no su mucosa.
• Se enfoca en el aislamiento de bacterias entéricas
patógenas, utilizando medios de cultivo adecuados para
su recuperación e identificación.
¿Cuándo se solicita un coprocultivo?
DIARREA
CUANDO HAY PROLONGADA EN
DEPOSICIONES CON
DIARREA QUE NO INMUNOSUPRIMIDOS
SANGRE Y MUCUS
CEDE A O EN NEONATOS
(PUS) (DESCARTAR
TRATAMIENTO
COCCIDIOS)
HECES ACOLICAS
VIAJES RECIENTES
INTOXICACIONES PROLOGADAS CON
(DENTRO O FUERA
ALIMENTARIAS SINTOMATOLOGIA
DEL PAIS)
PERSISTENTE
TIPOS DE MUESTRA:
HECES FRESCAS (LA MEJOR MUESTRA)
HISOPADO RECTAL O FECAL
MATERIAL OBTENIDO POR PROCTOSCOPIA
BIOPSIA DE MUCOSA INTESTINAL
PRINCIPALES ESPECIES DE
ENTEROPATOGENOS:
• SHIGELLA SPP.
• Shigella dysentereae. (“Bacilo Shiga”) causante de
disentería severa epidémica.
• Shigella flexnerii.
• Shigella sonnei.
• Shigella boydi.
PRINCIPALES ESPECIES DE
ENTEROPATOGENOS:
• SALMONELLA SPP.
• Salmonella typhi. (Causante de fiebre tifoidea)
• Salmonella parathyphy. (A,B,C)
• Salmonella cholerraesius.
• Salmonella enteritidis, S. gallinarum/pollorum
• Salmonella typhimurium.
PRINCIPALES ESPECIES DE
ENTEROPATOGENOS:
• Vibrio spp
• Vibrio cholerae
• Vibrio O1
• OTRO:
• Campylobacter jejuni
• Yersinia enterocolitica.
SINTOMATOLOGIA EN COMUN:
TODAS CAUSAN DIARREA.
Por definición se dice que una persona tiene diarrea si presentan las
siguientes situaciones:
1. Las deposiciones son frecuentes (mas de 3 veces al día)
2. La consistencia de las deposiciones es blanda o liquida (con mas del
75% acuoso)
3. La cantidad de deposiciones aumenta (mas de 250 gramos por día)
4. Cuando las diarreas se presentan derrepente y no duran mas de dos
semanas se clasifica como: aguda.
5. Por lo contrario si dura mas de 2 semanas se clasifica como: crónica.
Shigella spp.
•Caracteristicas:
•Enterobacteral de forma bacilar, inmóvil.
•No productora de gas.
•No productora de H2S.
•No descarboxilan la lisina y son Lactosas negativa.
•Las colonias sospechosas de Shigella son transparentes,
traslucidas y opacas, suelen ser lisas
MEDIOS RECOMENDADOS PARA SU AISLAMIENTO:
Agar SS, HEKTOEN, MCK.
Salmonella spp.
• Son las enterobacterales mas complejas, con mas de 2,400 serotipos.
• El periodo de incubación es por lo general entre 12 y 36 horas a veces
hasta 6 y 48 horas.
• Causa enterocolitis por una invasión en el tejido epitelial y subepitelial
de los intestinos.
• Entre la serovariedad mas patógena esta “Salmonella typhi”. Causante
de Fiebre tifoidea producida principalmente por su antígeno capsular
(Vi)
• Otras que causan el mismo cuadro clínico son las Paratyphi ,B Y C.
Salmonella spp.
• CARACTERISTICAS:
• Enterobacteral gram negativo
• Movilidad (+) (Excepto gallinarum/pollorum)
• Productoras de H2S y gas.
• Catalasas (+)
• Oxidasa (-)
• Indol (-)
• Urea (-)***
• VGPK(-)/RM(+)
• No fermentadores de lactosa ni sacarosa
• Fermentadores de glucosa.
• Medios recomendados (SS, HEKTOEN, MCK)
SALMONELOSIS / FIEBRE TIFOIDEA
SALMONELOSIS FIEBRE TIFOIDEA
SEROVAR S. Typhimurium y S. enteritidis S. typhi, S. paratyphi.
HUESPES DIFERENTES ESPECIES SOLO HUMANO
EPIDEMIOLOGIA DISPERSION MUNDIAL ENDEMICO EN PAISES EN
DESARROLLO
CLINICA GASTROENTERITIS AUTOLIMITADA FIEBRE, ESCALOFRIOS, DOLOR
(DIARREA, VOMITOS, DOLOR ABDOMINAL, RASH, NAUSEAS,
ABDOMINAL) ANOREXIA,
HEPATOESPLENOMEGALIA,
DIARREA O ESTREÑIMIENTO,
CEFALEA, TOS SECA.
CURSO DE LA ENFERMEDAD INCUBACION CORTA (6 – 24 INCUBACION LARGA (7 A 21 DIAS)
HORAS) DURACION BREVE DURACION HASTA 3 SEMANAS.
SINTOMAS CON RESOLUCION
TOTAL EN MENOS DE 10 DIAS
SIEMBRA INICIAL DE LA MUESTRA:
-Constatar que la muestra coincide con los datos de la solicitud médica y que dicha
muestra sea adecuada para un cultivo bacteriológico.
-Identificar el frasco de la muestra y su respectiva boleta (indicación médica), con el
número correlativo del área.
-Hacer boleta de trabajo para el cultivo, con los datos del paciente, localización,
fecha de recepción, tipo de muestra, medios utilizados para esa muestra y número
correlativo.
-Identificar la placa de agar Mac Conkey y el caldo de Selenito con el número
correlativo del área asignado a la muestra (y demás medios en uso si se cuenta con
ellos)
PROCEDIMIENTO PARA MUESTRA DE
HECES DIARREICAS FRESCAS
Con hisopo estéril tomar una segunda parte de la muestra,
• Con asa bacteriológica o con un hisopo estéril tomar donde se observe mucus y/o sangre y deposítelo en un tubo
una porción de la muestra de heces, colectada donde
observe mucus y/o sangre e inocular el agar MK, con caldo de Selenito, incubar en aerobiosis a 36°C ± 1 por un
luego con asa realizar estriado por agotamiento. tiempo máximo de 24 horas.
• Incubar en aerobiosis a 36°C ±1 durante 24 horas.
CALDO DE SELENITO:
• Medio de enriquecimiento selectivo, Composición:
para la recuperación de
microorganismos que se encuentran
• Nutrientes:
en baja concentración en la materia pluripeptona
fecal. • Agente inhibitorio:
selenito de sodio
• Muy bueno para la recuperación de • Carbohidrato
Salmonella. fermentable:
lactosa
• Tiempo máximo de inhibición: 12-18
horas.
MEDIOS PARA AISLAMIENTO
PRIMARIO
AGAR MAC CONKEY CALDO DE SELENITO
Revisar si hay crecimiento de colonias lactosa Subcultivar en agar Mac Conkey dentro de las
negativa. primeras 24 horas.
Re aislar la colonia lactosa negativa en otro Si hay crecimiento de colonias lactosa
Agar Mac Conkey negativa
Realizar pruebas bioquímicas: TSI, Urea, MIO,
Rojo de metilo y citrato.
Si la identificación por medio de bioquímica manual sugiere la
presencia de Salmonella ó Shigella, realizar identificación y
sensibilidad en equipo automatizado o API.
Aislar la cepa de Salmonella ó Shigella para enviarla al LNSP para su
tipificación.
E. coli O157/H7
• También llamada E. coli enterohemorrágica porque causa diarrea
sanguinolenta.
• Las cepas de E. coli 157 H7 producen una toxina que es responsable
de el síndrome urémico hemolítico.
Es incapaz de fermentar el sorbitol, por lo cual produce colonias
incoloras en agar Mac Conkey con sorbitol.
AGAR MAC CONKEY CON SORBITOL
Medio selectivo y diferencial utilizado para el
aislamiento de Escherichia coli O157 H7 a partir de
heces y alimentos.
Es el agente causal del síndrome urémico hemolítico.
Escherichia coli O157 H7 fermenta la Es similar al Agar Mac Conkey, excepto
lactosa como todas las cepas de en que se ha reemplazado la cantidad
Escherichia coli pero a diferencia de de lactosa por igual cantidad de
éstas, no fermenta el sorbitol. sorbitol.
INTERPRETACIÓN
No fermentadores de sorbitol:
fermentadores de sorbitol: colonias incoloras o del color
colonias rosadas del medio
HECES RECOLECTADAS POR MEDIO
DE HISOPADO RECTAL
• -Inocular con el hisopo el
agar MK, luego con asa
estriar por agotamiento
• -Introducir el hisopo en
caldo selenito.
• -Incubar ambos medios en
aerobiosis a 36°C ± 1
durante 24 horas.
PROCEDIMIENTO PARA MUESTRA
DE HECES FORMADAS(PASTOSAS)
• Para el caso de muestras pastosas, con el asa bacteriológica o con
ayuda de un aplicador de madera tomar una porción de la muestra de
heces del tamaño de un guisante, luego suspender en 2 ml de solución
salina hasta obtener una suspensión turbia y homogénea de la muestra.
*Lo mismo puede hacerse con heces recolectadas por hisopado rectal.
• Tomar una asada de la suspensión e inocular en el agar Mac Conkey,
estriar por agotamiento.
• Repetir el procedimiento para inocular el caldo de selenito.
• Incubar ambos medios en aerobiosis a 36°C±1 durante 24 horas.
ANTIMICROBIANOS PARA PRUEBA Y REPORTE DE RUTINA EN
SALMONELLA Y SHIGELLA
Nota de precaución para salmonella spp y
Shigella spp (traducida de CLSI)
• Aminoglucósidos, cefalosporinas de 1ª y 2ª generación y cefamicinas
(cefoxitin), pueden presentar actividad in vitro, pero no son efectivos
clínicamente, por lo que no deben ser reportados como susceptibles.
• Pruebas de susceptibilidad de rutina no están indicadas para salmonellas
no tifoideas aisladas de fuente intestinal.
• Sin embargo, las pruebas de susceptibilidad están indicadas para todos los
aislamientos de Shigella.
• Cuando se tiene un aislamiento fecal de Salmonella o Shigella, sólo
ampicilina, una fluoroquinolona y SXT deben ser reportados de rutina.
• Para aislamientos extraintestinales de Salmonella spp., una C3G debe ser
probada y reportada.
INFORME DE RESULTADOS:
• Negativo a colonias sospechosas se reporta:
No se aísla bacteria enteropatógena.
• Positivo: Nombre de la bacteria y reporte de susceptibilidad.
• Si no hay crecimiento se reportará: No hubo crecimiento bacteriano a
las 48 horas de incubación, se sugiere enviar nueva muestra.
Vibrio cholerae:
• Es una especie bien definida bioquímicamente. Sin
embargo, la especie no es homogénea en lo que
respecta a su potencial patógeno. La presencia de
antígenos somáticos termoestables O, ha permitido
determinar mas de 200 serogrupos de V. cholerae.
Solamente dos de ellos se reconocen como responsables
de las epidemias de Colera, el O1 y el O139.
• Los serogrupos no O1/no O139 son cepas no
epidémicas, suelen aislarse de fuentes ambientales y
pueden producir casos esporádicos de gastroenteritis y
de infecciones extra intestinales.
• V. cholerae O1 es considerado el serogrupo virulento y
epidémico por excelencia.
• Históricamente solo las cepas del serogrupo O1 habían sido asociadas
con epidemias de Cólera, sin embargo a finales de 1992, aparecieron
epidemias de Cólera en India y Bangladesh, causadas por una cepa
que no se aglutinaba con los antisueros O1 y no O1 disponibles.
• Esta nueva cepa se denomino O139, se propago rápidamente a los
países vecinos.
• El cuadro clínico que producía era idéntico al causado por las cepas
O1.
Serogrupos y serotipos:
• La mayoría de los aislamientos de Vibrio cholerae obtenidos durante brotes de colera
son de los serogrupos toxigénicos O1 y O139.
Los aislamientos de V. cholerae O1 están clasificados en 2 biotipos:
• EL Tor
• Clásico
• Además las cepas de V. cholerae O1 se clasifican en 3 serotipos:
-Inaba
-Ogawa
-Hikojima(raro)
TIPO DE MUESTRAS PARA ESTUDIO DE
VIBRIO SPP
• Heces líquidas (agua de arroz, sin moco) ideal entre 2 a 4 horas
después de su evacuación.
• Hisopado rectal (2 tubos inoculados por paciente)
• Hisopado fecal (introduciendo el hisopo directamente en la muestra
tomando una parte de ella)
• Vomito
RECOLECCION DE LA MUESTRA:
• La muestra de materia fecal debe ser recolectada en un recipiente limpio,
seco, libre de preservativos y detergentes, de boca ancha con tapa.
• En algunos casos el hisopado rectal es mas eficaz que las heces,
particularmente en pacientes adultos severamente debilitados.
• La muestra debe ser tomada en el período agudo de la enfermedad, de
preferencia antes del tratamiento con antimicrobianos.
• Heces enteras o hisopado fecal en Cary Blair deben ser conservados
máximo 5 días a temperatura ambiente.
• Lo ideal es que la muestra sea procesada dentro de 2 a 4 horas después
de su recolección.
SIEMBRA INICIAL:
PROCEDIMIENTO PARA AISLAMIENTO
PRIMARIO(Muestras líquidas)
• -Identificar los medios de APA,
TCBS y Mac Conkey con el
número correlativo del área
asignado a esa muestra.
• Si se ha recibido muestra
líquida, inocular con asa o
hisopo en MK y en TCBS.
• -Incubar ambos medios a 37°C
• -Inocular la muestra de
heces líquidas en 1 tubo
de APA.
• *EI inóculo de heces no
debe exceder del 10% del
volumen del APA.
• -Incubar el tubo con la tapa
sin apretar entre 35-37°C
durante 6-8 horas.
ESQUEMA PARA ESTUDIO DE VIBRIO
CHOLERAE
HISOPADO EN CARY BLAIR(2
hisopos)
Sembrar en APA – TCBS – MK
Aislar las colonias en agar sangre ó TSA y
con un solo hisopo (y en el orden de arriba, y el otro TCBS.
hisopo mantenerlo en Cary Blair y guardarlo)
Hacer Todas Las Pruebas Para Identificar Vibrio Cholerae
A las 6 horas resembrar de APA A TCBS
(TSI, Oxidasa. Indol, Prueba Del Collar, Etc)
24 horas observar si hay crecimiento.
Si las pruebas confirman Vibrio cholerae, enviar la cepa a
LNSP en AS, TCBS y el tubo de Cary Blair que se guardo
Si hay crecimiento de colonias amarillo intenso, brillante
con bordes bien definidos.
AGUA PEPTONADA ALCALINA (APA)
CARACTERISTICAS EN MEDIOS DE
CULTIVO
PRUEBAS DE IDENTIFICACION
PRELIMINAR:
• TSI
• OXIDASA
• COLORACIÓN DE GRAM
• PRUEBA DE COLLAR O CORDON
TSI:
A/A, sin gas, ni H2S
• GRAM: bacilos curvos pequeños • OXIDASA: positiva
PRUEBA DEL COLLAR
(DESOXICOLATO DE SODIO)
Esta prueba se realiza para diferenciar
el genero Vibrio de otros géneros como
Plesiomonas y Aeromonas.
La actividad lítica del ácido
desoxicolato sobre la pared de los
Vibrios favorece la liberación del ADN,
que al contacto con desoxicolato
forma una suspensión adherente o
mucoide.
ANTIBIOGRAMA PARA VIBRIO
CHOLERAE
ANTIBIOGRAMA CENTRALIZADO EN
LNVSP
Antimicrobianos a considerar como primarios
Para Vibrio spp:
• Cefotaxima
• Ceftazidima
• Tetraciclina
• fluoroquinolonas
ESPECIFICOS PARA VIBRIO CHOLERAE
• Ampicilina
• Azitromicina*
• Doxiciclina*
• Tetraciclina
• Trimetropim sulfametoxale
• Sulfonamidas
• Cloranfenicol
*Solamente x CIM
INFORME FINAL
• Negativo: No se aísla Vibrio cholerae.
• Positivo: Informar la identificación de Vibrio cholerae.
agregar la siguiente nota:
Pendiente notificación del informe final por el LNSP.
GRACIAS
