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BACTERIOLOGÍA
• Criterios básicos sobre obtención de muestras:
esterilidad, precauciones. Cultivo, aislamiento y
clasificación biológica (Tipificación). Recuento de
colonias y Antibiograma.
• Bacteriología urinaria. Recolección.
Normas de selección y recolección de
muestras 2
• Material representativo del proceso patológico
• Cantidad adecuada
• Envío sin demora del material al laboratorio (y su
posterior conservación)
• Tomar muestras antes de dar antimicrobianos
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Solicitud de cultivo
Paciente: (Nombre)
Tipo de muestra: (esputo, liquido pleural, etc)
Diagnóstico presuntivo (Neumonía, tuberculosis, infección urinaria, etc)
Observaciones: Ambulatorio o internado
Tratamiento previo con ATB
Otras patologías asociadas
Tipificación
Antibiograma
Pasos y herramientas en el diagnóstico
4
bacteriológico
1) Examen directo: tinción de Gram: extendido sobre un portaobjetos
de la porción mas significativa (mas purulento o sanguinolento), fijado
con alcohol o calor. Si es liquido puede concentrarse por centrifugación.
Colorante: cristal violeta, iodo, alcohol, luego safranina.
Gram positivas: resisten la decoloración con alcohol
negativas: se decoloran y luego toman la safranina
Pueden verse otras estructuras como larvas de parasitos, formas fungicas, etc
Informar tambien leucocitos o hematies.
Cocos Gram positivos:
Staphylococccus (en racimo) Streptococccus (o neumococo)5
En general en parejas o cadenas
S aureus, patogeno, distinguir
de micrococcus.
Bacilos gram negativos
[Link]
Flora mixta
2) cultivos:
6
Sembrar muestra en medio adecuado y obtener colonias de bacterias sin contaminacion
Muestra
~24h, 370 C
Directo Siembra en placa o medios liquidos
Distinguir contaminacion o flora mixta
Medios apropiados, tipificacion y recuento:
- agar sangre (permite ver hemolisis) Bueno para Streptococcus 7
α Hemolisis parcial, anillo verdoso
β Hemolisis total, halo claro
-agar chocolate (incluye hemina y NAD), bueno para Haemophylus
-agar McConkey. Posee:
# Sales biliares: inhiben gram +
# indicador Rojo Congo que puede distinguir por el color bacterias fermentadoras
y no fermentadoras de lactosa.
Colonias incoloras Colonias rosadas
(no fermentan) (fermentan)
Salmonella, Shigella, Pseudomonas E. coli (rosa/roja),
Enterobactoer aerogenes (rosa y mucosa)
Otros medios enriquecidos
8
solidos
liquidos Pseudomona: color brillante
olor manzana verde
Medio Sabouraud dextrosa (SAB):
(para cultivo de hongos)
3) Antibiograma
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El antibiograma es la prueba
microbiológica que se realiza para
determinar la sensibilidad de una
colonia bacteriana a un antibiótico
o grupo de antibióticos.
Diferencia de sensibilidad por
parte de la colonia a diferentes
antibióticos.
Segun el radio de inhibicion:
Resistente (R), Intermedio (I) y
Sensible (S).
4) TÉCNICAS RAPIDAS DE DETECCIÓN DE ANTIGENO10
.
- permiten detectar la presencia de microorganismos o de fragmentos
de los mismos en las muestras clínicas
- aceleran el diagnóstico de las enfermedades infecciosas
- especialmente útiles en aquellos casos en que el microorganismo
causal crece lentamente o bien, no crece en los medios de cultivo -
-los resultados de los mismos no se ven alterados por la administración
previa de antimicrobianos.
a) Contrainmunoelectroforesis
b) técnicas de aglutinación,
c) inmunocromatografía,
d) enzimo-inmunoanálisis,
e) inmunofluorescencia
f) métodos luminométricos.
ELISA.
contrainmunoelectroforesis
inmunofluorescencia 11
muestra (ag) Ac especifico
Neumococo y Haemophilus, en esputo, suero Legionella
Orina. Resultado a los 45 min
Aglutinacion con particulas de latex
PCR
Haemophilus, esputo, liquido pleural
Resultado a los 10 min. Sensibilidad ~ Mycobaterium tuberculosis. Requiere equipo
Strep. Pyogenes en hisopado especializado
Prueba de “Quellung” 12
En la prueba de Quellung (del alemán Hinchazón) o reacción de Quellung,
es una reaccion bioquimica que usa anticuerpos polivalentes para que se
unan a la cápsula de algunas bacterias como Streptococcus pneumoniae,
Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae y Klebsiella pneumoniae
Aglutinación de partículas de látex vs. contrainmunoelectroforesis en meningitis
bacteriana aguda
Rafael Otero Patiño, Ramón Alvarez, Gonzálo Bohórquez, Mariluz Hernández, Witer
Elena Vallejo López, Nancy E. Agudelo O., Carmen Tulia Zapata Muñoz
Resumen 13
Se estudiaron 57 pacientes con meningitis aguda, de etiología bacteriana comprobada;
47.4% (27 casos) fueron causados por Haemophilus influenzae tipo b; 21.0% (12 casos)
por Streptococcus pneumoniae; 17.5% (10 casos) por Neisseria meningitidis; 5.3% (3
casos) por Staphylococcus aureus,. 5.3% (3 casos) por enterobacterias y 3.5% (2
casos) por gérmenes no Identificados por cultivos. Se comparó la aglutinación de
partículas de látex (APL) con la contralnmunoelectroforesis (CIE) en los pacientes con
cultivo positivo. La exactitud de ambas fue similar para el H. influenzae tipo b y el S.
pneumoniae. Tres de los 10 casos con cultivo positivo para N. meningítidis fueron
positivos en la APL pero ninguno lo fue en la CIE. Se presentó un falso positivo para H.
ínfluenzae con la APL que correspondió a meningitis por Salmonella typhí, Las pruebas
inmunológicas estuvieron plenamente justificadas en 12 de los 57 pacientes (21.0%),
previamente tratados, en quienes la bacteriología tradicional fue negativa o se quería
identificar el germen porque lo único positivo era el gram y se justificaba utilizar el
antibiótico más especifico. Se sugiere el uso de la APL en el Hospital Infantil de
Medellín, por ser una prueba confiable y más simple y rápida que la CIE.
14
Extraño caso de la niña platense con Enfermedad de
Lyme
29 de Abril de 2016 Edición Impresa El Día
Desde que la picó una garrapata, Mora De C. tiene la bacteria
Borrelia burgdorferi. La búsqueda errática de un diagnóstico
demoró cuatro años el tratamiento. Escepticismo médico ante
una enfermedad endémica de [Link].
Para la doctora Silvia Gonzalez Ayala, profesora de Infectología en la 15
Facultad de Medicina y consultora de la misma especialidad en el
Hospital de Niños Sor María Ludovica, con una serología no es
suficiente para hablar de Lyme. “El método estándar de diagnóstico
son dos determinaciones de anticuerpos totales (IgM/IgG) específicos
por técnica de enzimoinmunoensayo (ELISA, EIA) o
inmunofluorescencia (IF)”, explica. En el caso de Mora se realizó este
último y, según la especialista: “en la paciente el valor del análisis de IF
es solo un título por encima del punto de corte”. En criollo: el valor de
corte es el umbral. Se considera que si alguien tiene Borrelia por
encima de 1/10, es positivo. Pero “Uno sobre 20 es apenas por
encima”, aclara Gonzalez Ayala, quien recomienda hacer además la
prueba de Western blot para descartar que se esté ante un falso
positivo.
IF
TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS AL
LABORATORIO 16
“Una muestra suficiente, reciente y limpia, tiene
alta probabilidad de diagnóstico”
BACTERIOLOGÍA 17
(Conservación de muestras)
Tipo de conservación Muestra
Líquidos de punción
Temperatura ambiente Muestras en medios de transporte:
lesiones de heridas, hisopados faríngeos,
exudados vaginales y uretrales.
Punta de catéter
Coprocultivos
Orinas (chorro medio - de sonda)
Heladera
Esputo – Aspirado bronquial
Materia fecal sin medio de transporte
Biopsias
Estufa a 35º Hemocultivos
Lab Central – Sector Bacteriología
HZGA Dra Cecilia Grierson - Guernica
INFECCIONES RESPIRATORIAS BAJAS DE LA
COMUNIDAD EN EL ADULTO
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• Alcohólicos y vagabundos (Haemophilus influenzae, otros)
• Sin factor predisponente conocido
• HIV positivo-Inmunodeficiencias (hongos, etc)
• Antecedentes de viajes (gripe A?)
• Exposición laboral
• Contacto con animales (clamydia psitaccii)
• Enfermedad subyacente de vías respiratorias
Asociada a Bronquitis (EPOC):
Haemophilus influenzae,
Streptococcus pneumoniae
Moraxella catarrhalis
INFECCIONES RESPIRATORIAS BAJAS
PROCESAMIENTO ESPUTO
19
• 100X: < 10 cels epiteliales y > 25 PMN por
campo
• Tinción de Gram
• Diagnóstico presuntivo:
abundantes PMN
diplococos Gram
positivos
• Cultivo y tipificación
alfa hemolítico
20
21
Tuberculosis 22
Baciloscopía positiva en esputo
Bacilos acido-alcohol resistentes
(Ziehl Neelsen)
Cultivo pos ~ 67% casos Positivas en < 20% muestras
+ examen histologico confirman
Diagnostico en el 95%
Diagnóstico de Tuberculosis 23
1) Baciloscopia directa: bacilos acido-alcohol resistentes. a todos los
pacientes (en lo posible 2 muestras)
Muestras:
Esputo
Otras (Médula osea, LCR, líquido punción, lavado bronquial, etc)
Esputo 1) Directo (100 campos)
Extendido (- )
Secado, Fijado
Coloración Ziehl Nielsen + (1-9 BAAR)
++ (9-10)
(más sensible: Por fluorescencia)
+++ (mas de 10)
2) Cultivo L-J S
L-J S
Lowenstein Jensen Mic Tuberculosis
24
Mic Bovis
Stonebrink
Mic Tuberculosis
M. Tub M. Bovis
cultivo 15-20 días (contaminado una semana)
+ ++ +++
Negativo 60 días
Prueba sensibilidad
Ct sin ATB S I R E
S Estreptomicina
I Isoniazida
R Rifampicina
E Etambutol
Otros medios liquido: Previa Inactivacion de otros organismos (con antibioticos, PANTA
(polymyxin B, amphotericin B, nalidixic acid, trimethoprim, and azlocillin (PANTA; BBL MGIT
PANTA Antibiotic Mixture; BD). Muy util el BAC-TEC radiometrico
Amplificacion de ADN por PCR: 25
1) no es de gran ayuda en la deteccion porque.
- Falsos (+) por otras micobacterias
2) No sirve para terapia porque no discrimina bacterias vivas de muertas
3) de gran ayuda para seguimiento
de cepas en comunidades cerradas, y para estudios en LCR
ELISA: no da alto titulo de anticuerpos, y menos en inmunodeprimidos, por lo que
puede dar falsos (-)
26
Líquido pleural: características exudado
Físico: Aspecto: Turbio, ligeramente turbio
Color: Amarillento, serohematico
Químico: pH en el 20% < 7.30
glucosa 30-60 mg/dl
proteínas l/s en general > 4.0 g/dl
LDH >0.6
ADA +++
Citológico (*)
leucocitos totales predominio
TBC 5-10 X 1.000/mm3 Mononucleares
Neumonía 5-40 x 1.000/mm3 Polimorfonucleares
INFECCIONES RESPIRATORIAS BAJAS
CONCLUSION
27
Si bien los datos clínicos y epidemiológicos
ayudan a intuir la causa más probable de
neumopatía, los estudios microbiológicos son
esenciales para confirmar el diagnóstico y
asegurar el óptimo tratamiento antimicrobiano.
Hemocultivo 28
• Características de la Bacteriemia:
Transitoria: manipulación de abscesos, forúnculos,
procedimientos odontológicos, instrumentación
urológica, cateterización. En el curso temprano de
infecciones sistémicas
Intermitente: abscesos abdominales, pélvicos, hepáticos,
fiebre de origen desconocido
Continua: infección intravascular (endocarditis aguda o
subaguda)
29
HEMOCULTIVO
• Toma de muestras de sangre
• 1) Selección del sitio
• 2) Desinfección de la piel
• 3) Desinfección de las botellas de hemocultivo
• 4) Extracción de sangre
• 5) Volumen del espécimen:
Conservar la proporción de 1ml de sangre por cada 10 ml de medio Volumen
recomendado
a) Niños: 1 a 5 ml de sangre por punción venosa
b) Adultos: 10 a 30 ml de sangre por punción venosa
6) Número de muestras 30
Antes de comenzar la terapia antimicrobiana
• Tomar 2 muestras separadas 30 minutos, (tercera
opcional)
• De sitios diferentes
7) Conservación
• Enviar inmediatamente al laboratorio y de ser
posible colocar en estufa a 37C
• Conservar a temperatura ambiente
• NO REFRIGERAR
24-48hs con Cultivos Negativos:
Tomar 2 nuevos frascos de hemocultivos
Sospecha de bacteriemia con cultivos negativos: considerar Hongos,
Mycobacterias y microorganismos fastidiosos
Bacteriología Urinaria 31
Por guardia:
Ante sintomatologia (puño-percusion positiva, fiebre, dolor miccional etc)
Sedimento urinario (u orina completa dependiendo la hora):
Sospecha de infeccion:
Aspecto turbio, presencia de leucocitos,
bacteriuria
Urocultivo: 32
Recuento de colonias
Tipificacion
Antibiograma
10x5 10x6
10x4
Recolección de orina (toma limpia)
33
• Asegurar higiene de genitales externos:
• Pastilla de jabon nueva, toalla limpia, en mujeres en lo posible con
colocacion de tapon vaginal.
• Se lleva a cabo recogiendo la orina a mitad del chorro.
• Se debe dejar caer en el inodoro una pequeña cantidad de orina
antes de tomar la muestra (esto elimina de la uretra elementos
contaminantes).
• Luego, se recoge de 30 a 60 ml de orina en un recipiente esteril que
posteriormente se aparta del chorro de orina. Éste se le entrega al
personal médico.
UROCULTIVO 34
• Las infecciones del tracto urinario (ITU) son las más
frecuentes solamente superadas por las del tracto
respiratorio. Son más prevalentes y recurrentes en la
mujer, y su incidencia aumenta con la edad.
• El cultivo de orina establece el diagnóstico etiológico de
certeza de una infección urinaria tanto sintomática como
asintomática (bacteriuria asintomática) en pacientes con
riesgo de infección. Permite a su vez la realización de
estudios de sensibilidad.
UROCULTIVO 35
• La piuria, junto con la bacteriuria, es un dato muy
importante para el diagnóstico de ITU, ya que está
presente en la mayoría de los casos.
• Existen varios factores que determinan la epidemiología
de la infección urinaria, entre ellos destacan la edad,
determinadas enfermedades, cateterismos u otros tipos
de instrumentación del tracto genitourinario. Estos han
de tenerse siempre en cuenta a la hora de interpretar los
urocultivos.
DIAGNÓSTICO ITU 36
• Si el urocultivo es positivo con más de 105 UFC/ml, en la orina
obtenida del chorro medio, el diagnóstico de infección urinaria se
confirma en 92% de casos si el germen aislado es gramnegativo y en
70%, si es grampositivo.
• Recuentos entre 105 y 103 UFC/ml, si el paciente es sintomático o si el
germen es Stap. saprophyticus o Enterococcus spp. hacen
diagnóstico de IU.
• En el hombre, donde la contaminación de la orina es menos probable,
104 UFC/ml es muy sugestivo de IU
• Si la muestra de orina se extrajo por punción suprapúbica, cualquier
número de bacterias tiene valor.
37
38
Caso clínico: Rosa Vicona de 6 años, la hija mayor de una modelo
chilena y un actor argentino llega al hospital con fiebre y cuadro de
repercusión generalizada, luego de un viaje a Cancún con sus
padres. El cuadro se inició con síntomas de resfrío y tos.
1) Un análisis de esputo dio cultivo bacilos gram negativos con
escasos cocos Gram positivo. Considera esto contaminación y
continua en observación?
2) El caso no revierte, un próximo estudio da hiperbilirrubinemia,
PO2 disminuida, LDH y TGO en sangre elevadas. Qué indicios
dan estos resultados?
Finalmente, se confirmó que sufrió una extraña patología que, a
menudo, no presenta claros síntomas, tornándose difícil de
detectar por los especialistas. Cuál considera ha sido el
desenlace?
