LABORATRIO
ANÁLISIS
ANTIDOPING
LABORATORIO DE
ANÁLISIS ANTIDOPING Y DROGAS
DE ABUSO
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y
FARMACÉUTICAS
UNIVERSIDAD DE CHILE
DROGA DE ABUSO
Laboral, clínico , legal , forense
Listado drogas prohibidas
Reglamento - Ley 20.000
Metodología analítica instrumental acreditada
Drogas de abuso
Estimulantes
Depresores
Marihuana
Narcóticos
Alucinógenos
Esteroides Anabólicos
DROGAS DE ABUSO LABORAL
ANFETAMINA Y CONGENERES
OPIACEOS
COCAINA
MARIHUANA THC
BENZODIAZEPINAS
Alucinógenos
Peyote y mescalina
Psilocibina y Psilocina
Dimetiltriptamina(DMT)
LSD
DOM, DOB, DMA, MDMA, MDA, MDEA y 2C-
B(bromodimetoxifenetilamina))
DROGAS DEPREDADORAS O DROGAS DE
CLUB
- Flunitrazepam
- GHB, ácido gama hidroxi butírico
-Ketamina
MODULO 1
INTRODUCCION
A LAS
METODOLOGÍA
S ANALITICAS
METODOLOGIAS ANALITICAS
CAMBIOS EN LOS ÚLTIMOS AÑOS
• MICROPROCESOS
• ESPECTROMETRIA DE MASA S
(GC/MS – GC/MS/MS – HR/MS – LC/MS)
• NORMAS ISO 17025
DIAGRAMA DE
ANÁLISIS
TOMA DE MUESTRA
TRANSPORTE DE MUESTRA
RECEPCIÓN MUESTRA
DISTRIBUCIÓN
PREPARACIÓN MUESTRA
ANÁLISIS INSTRUMENTAL
EVALUACIÓN DE DATOS POR
CADA “SCREENING”
VALIDACIÓN DE DATOS
INFORME
Procedimiento analítico en una
muestra biológica
plasma, suero, orina
medir volumen, (alicuota)
Inmunoensayos extracción Det. directa de los volátiles
directos líquido/líquido Headspace
fase solida
extracto orgánico
obtención de datos analíticos
GC/MS cromatografía
procesamiento de datos e
interpretación
informe final
Primeras Etápas Analíticas
Una vez recibida la muestra y verificados
los datos de la cadena de custodia empieza
el proceso analítico
Pre-análisis , pH ,densidad , color ,
turbidez ,etc
Técnicas de Inmuno análisis que se usan
directamente
Sistemas de
extracción
a) Volátiles ( head space )
b) líquido/líquido(extracción por solvente)
C) fase sólida(SPE)
Ajuste de pH
Sustancias de caracter acido: ajustar el
pH dos unidades bajo el pKa, 99% de
forma no ionizada. Sobre el pKa estarán
ionizadas en un 99%
Sustancias de caracter básico: ajustar
el pH dos unidades sobre el pKa, 99%
de forma no ionizada. Bajo el pKa
estarán ionizadas un 99%
EXTRACCIÓN SPE
EXTRACCIÓN FASE SOLIDA
INTERCAMBIO IÓNICO
SOLID PHASE EXTRACTION STEPS
Extracción fase sólida
INTERCAMBIO IÓNICO
Cocaina Carboxi thc
COOH
CH3
N
CO OH
3
OCH
O H3C
H C O
H3C C5H11
O
FASE SOLIDA
1 Preparaciòn de muestras
Buffer –ph Molécula ionizada
2 Preparación columna
Buffer – ph columna
cargada
3 Aplicación de muestra
4 Lavado de columna
5 Elución de analito
ANFETAMINA
+
SMBTFA-0
N-Methyl-bis-trifluoroacetamide
N-METHYL-N-(TRIMETHYLSILYL)TRIFLUOROACETAMIDE
1% TMS (TRIMETHYLSILANE)
derivatización
Grado de polaridad
Grado de volatilidad
Propiedades cromatograficas
Peso molecular
GC/MS
Metodología Analítica:
a) análisis inicial o “screening”: ensayos
químicos y/o instrumentales que se usan
para la selección de muestras presuntamente
positivas
b) análisis de confirmación: los resultados
iniciales deben pasar obligatoriamente por la
técnica de espectrometría de masas para la
confirmación e identificación de
sustancias específicas.
Técnicas de screening (inicial)
Inmunoensayos
Cromatografía placa fina (TLC)
Cromatografía líquida (HPLC)
Cromatografía gaseosa (GC)
Inmunoensayo
s
Fundamento de los Inmunoensayos
Todos se basan en la interacción
antígeno – anticuerpo y el proceso
de enlace competitivo.
Enlace competitivo: dos diferentes
sustancias (antígeno y antígeno
marcado), compiten por los mismos
sitios de enlace en los anticuerpos
How
the
ELISA
Test
Works
Inmunologia
Ventajas
Simplicidad
alta sensibilidad
gran rapidez (automatizable)
Desventajas
reacciones cruzadas ex
especificidad (Ej: Benzodiazepinas)
Cortes de concentración
TÉCNICAS
DE
CONFIRMACIÓN
Técnicas Cromatográficas
1 Cromatografía en placa fina( TLC)
2 Cromatografía de Gases (GC)
3 Cromatografía Líquida(HPLC)
4 Electroforesis Capilar(CE)
Regla de oro de la cromatografía
“ Lo similar atrae lo similar “
Fase móvil apolar movilizará rápidamente los solutos
apolares. La fase estacionaria polar atraerá fuertemente
los solutos polares.
Fase móvil polar movilizará rápidamente los solutos polares.
La fase estacionaria no polar atraerá fuertemente los solutos
no polares.ex.
Diagrama de cromatografía de
gasesMOL-SIEVE FIXED
TRAPS RESTRICTORS
FLOW
CONTROLLER
REGULATORS INJETION
DETECTOR COMPUTER
PORT
REPORT
C
H A COLUMN
Y R
D R
A I
R OVEN
I E
O R
R
G
E G
A
N
S
Elución de picos
cromatográficos
Peso molecular y estructura
Grupos funcionales
Polaridad
Volatilidad
Interacción con columna
Compuestos
Compuestos no
Polares
polares
Compuestos que tienen Compuestos que no tienen
cargas localizadas dipolos fuertes.
positivas y negativas
(dipolos). Contienen principalmente
Contienen: O, N, S, P, C e H.
halógenos
Comparación : GC - HPLC
Moleculas de alto PM
Estabilidad térmica
HPL No necesidad extracción/limpieza
C Moleculas de alta polaridad
Proceso más lento
Más exacta
G Mayor grado de resolución
C Menos contaminante
Moleculas no polares (columnas)
Derivatización
Confirmación (final)
El uso de una segunda técnica
confirmatoria es un principio
fundamental en la Analítica
Espectrometría de masas
GC/MS o LC/MS cromatógrafo de
gases o líquido acoplado a
detector de masas
Cromatograma y espectro de masas modo SCAN (50-550
uma)
benzoilecgonina-TMS
Abundance
10.72 Ion 82.00 (81.70 to 82.70): 2424.D
1900000 Ion 240.00 (239.70 to 240.70): 2424.D
1700000 Ion 361.00 (360.70 to 361.70): 2424.D
1500000
2100000
1300000
1100000
900000
700000
500000
300000
100000
0
Time--> 10.50 10.60 10.70 10.80 10.90 11.00 11.10 11.20 11.30 11.40
Abundance 82 CH3
N
2200000 COO-TMS
2000000
1800000 O
1600000 82 C
H O
1400000 105
1200000 240
M+
1000000
800000 240
600000 129 361 425
400000
200000 150 179204 267 317
45147 523 550
395
55 0 1
m/z--> 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
Tipos de muestras
Para la determinación de
drogas se pueden usar una
serie de matrices biológicas:
orina, pelo, sudor, saliva,
sangre, etc.
ORINA
Ventajas:
fácil colección.
no es un método invasivo.
Es el método de más alto uso en el tiempo y la más estudiada
fácil de analizar, presencia de altas concentraciones de la droga y sus
metabolitos.
Detección de uso reciente
Detección entre ug/ml a ng/ml de metabolitos principalmente
ORINA
Desventajas:
La conc. de la droga no puede relacionarse con
efecto.
No se puede distinguir entre uso crónico o
uso ocasional
PELO
Ventajas:
método no invasivo
fácil colección.
puede medir el uso de drogas en
el tiempo.
Entrega información cuantitativa sobre la
severidad y modelo de uso de drogas.
Análisis de Pelo
Vias de incorporación de drogas en pelo
Entrega información de largo plazo ex
Información cuantitativa sobre la
severidad en el uso de drogas.
Permite verificar si se están
produciendo cambios en cantidad y tipo de
drogas.
PELO
Desventajas:
Detección de droga madre y menor
de metabolitos
Alto costo y tiempo de análisis.
Concentración desde pg/mg a ng/mg
de pelo
Aplicaciones
Ciencia forense y justicia
criminal
Monitoreo para cumplimiento
de medicamentación
Tratamiento de adicción y
Rehabilitación
programas laborales
Exposición a tóxicos
SUDOR
Ventajas: proporciona un espécimen
acumulativo, parches impermeables a la contaminación
externa, no pueden ser reemplazados si la persona lo
retira.
Detecta la droga madre
Desventajas: adulterantes pueden inyectarse a través
del parche, se desconoce la dosis mínima para causar
unfalta
positivo.
de información sobre como incorporan las
se drogas y parámetros que
farmacocinéticos dosis con relacionen
concentración en el sudor ex
SALIVA
Ventajas:
No invasiva
Obtención de parámetros para
farmacocinéticos aparición de la
droga.
Mayor relación con efecto-detección
Futuro en programas de drogas de abuso
SALIVA
Desventajas:
tiempo corto de detección.
detección de la droga madre y de
los metabolitos.
Concentraciones en el orden del
bajo ng/ml
SANGRE
Ventajas:
estudios farmacocinéticos
relación detectada con
concentración efecto
farmacológico
SANGRE
Desventajas:
Problemas en colección de
muestras Muy invasivo
Media vida corta
corto período de detección
( horas )
Cocaine window of detection in blood, saliva,
urine, sweat and hair
Blood 1
day
Saliva 1
day
3
Urine days
4 30
Sweat days days
250
Hair days
0.1 1 10 100 1000
Concentraciones de corte
(cutoff):
Son criterios de decisión para clasificar los
resultados como indicativos o no indicativos de
consumo de una droga.
Estos valores deben utilizarse en programas de
drogas de abuso laboral
Corte (Cut-off) ISP
Corte (Cut-off): es la concentración por la
cual bajo esta se determina que el
resultado de un ensayo cuantitativo es
negativo y por encima de este valor se
considera que el resultado es positivo.
Concentraciones de corte (ng/ml)
SAMHSA U. EUROPEA
Sustancia inicial confirm inicial confirm
marihuana 50 15 50 15
cocaína 300 100 150 100
opiáceos 300 300 300 300
morfina codeína
fenciclidina 25 25
anfetaminas 500 200 500 200
metanfetamina 200 500 200
MDMA,MDA,MDEA 200
Concentraciones de corte
(cut-off)
Cut-off,propuestas
Análisis confirmatorio:
NIDA
metabolitos de marihuana
GC/MS en ng/mg
0,05
metabolitos de cocaína 0.05
cocaína droga madre 0.5
opiáceos
morfina codeína 0.2
anfetaminas 0.2
anfetamina
metanfetamina 0.2
MDMA 0.2
MDA 0.2
MDEA 0.2
0.2
