La cromatografía líquida
de alto rendimiento
(HPLC)
Lopez Lopez Pedro
Mora Padilla Kenia
Morelo Tirado Jhonatan
Pacheco Barón Miguel
Soto Ruiz Pedro
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Definición
• La HPLC es una técnica ampliamente utilizada para separar
analitos de diferente naturaleza en una mezcla. Este método
involucra fases móviles y estacionarias que son inmiscibles
entre sí, junto con la muestra de interés.
Las fuerzas que actúan en las moléculas son:
• Las fuerzas de dispersión de London
• Las interacciones dipolo
• Las interacciones por puente de
hidrógeno
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Técnica
Se basa en los principios de separación de
componentes en una muestra mediante una
columna cromatográfica y una fase estacionaria,
utilizando una fase móvil líquida a alta presión. los
fundamentos clave son:
• Fase estacionaria
• Fase móvil
• Presión
• Interacciones químicas
• Separación
• Cromatograma
• Calibración y cuantificación
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Instrumentos
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M=p
Modos de operación del HPLC
• Fase reversa: Se analizan muestras que
contienen sustancias neutrales o no ionizadas,
solubles, en mezclas de compuestos orgánicos
y agua.
• Fase normal: Separa analitos con base en su
polaridad, primera opción para muestras
lipofílicas.
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Ventajas
• Matriz de separación • Aplicaciones
• Fase móvil • Tiempo de análisis
• Presión • Automatización
• Resolución
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Desventajas
• Costo de operación y mantenimiento
• Compatibilidad de la muestra y preparación previa
• Limitaciones en el tamaño y volumen de muestra
• Sensibilidad a las condiciones experimentales
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Conclusión
Análisis de proteínas y péptidos: La HPLC se utiliza para separar y
cuantificar proteínas y péptidos en muestras biológicas, como
suero sanguíneo o extractos de tejidos.
Análisis de ácidos nucleicos: Permite la separación y detección
de ácidos nucleicos, como el ADN y el ARN, facilitando la
investigación genética y genómica.
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