REPASO
4. Observación de las bacterias. Examen microscópico
Métodos microscópicos de observación de las bacterias:
Examen en fresco: sin tinción
Tinciones:
– Simples: 1 colorante
– Diferenciales o compuestas:
Tinción de Gram
Tinción de Ziehl-Neelsen o de ácido-alcohol resistencia
– Tinciones específicas: revelan estructuras bacterianas Ej:
endosporas
– Tinciones fluorescentes: Auramina (micobacterias) y otras
– Otras tinciones: Giemsa y otras
Exámenes especiales (en microscopio electrónico)
4. Observación de las bacterias. Examen microscópico
TINCIÓN DE GRAM
• Tinción diferencial o compuesta
• Diferencias en estructura y/o composición química de la pared
bacteriana
• Gran utilidad: identificación y clasificación bacterias
• Pasos de la tinción de Gram:
1. Primer colorante, colorante principal: CRISTAL VIOLETA
2. Mordiente: incrementa afinidad. LUGOL (solución de yodo)
3. Decolorante: elimina el primer colorante en algunas bacterias.
ALCOHOL-ACETONA
4. Colorante de contraste: SAFRANINA, tiñe sólo las bacterias que
se han decolorado.
4. Observación de las bacterias. Examen microscópico
TINCIÓN DE GRAM
• Gran utilidad: identificación y clasificación bacterias
Bacterias grampositivas, G(+): color azul-violeta
Bacterias gramnegativas, G(-): color rosa-rojizo
Tinción de Gram:
1. Cristal violeta
2. Mordiente
3. Decolorante
4. Safranina
grampositiva gramnegativa
Observación de las bacterias. Examen microscópico
Cocos grampositivos en racimos (izq.) y cadenas (dcha.)
Observación de las bacterias. Examen microscópico
Cocos gramnegativos
Estructuras obligatorias, constantes
Pared celular de MICOBACTERIAS
Micobacterias
Tinción de Ziehl-Neelsen
1. Fucsina fenicada (calentar 3 veces)
2. HCl + alcohol (1 minuto)
3. Azul de metileno (1 minuto)
BAAR: no se decoloran y quedan teñidas de fucsia, rosa-rojo. El
resto de componentes de la preparación queda teñido de azul.
Micobacterias. Características generales
Género Mycobacterium
Aerobias estrictas
Patógenos intracelulares facultativos
Bacterias ácido-alcohol resistentes (BAAR), tinción de Ziehl-Neelsen
Crecimiento muy lento (hasta 8 semanas), existen excepciones
(micobacterias de crecimiento rápido)
Necesitan medios de cultivo con hierro y lípidos
Se utilizan medios con huevo (Lowenstein-Jensen)
En medios líquidos se detectan más rápidamente
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Mycobacterium tuberculosis
Epidemiología
1/4 de la población mundial está infectada
Importante causa de mortalidad en países en vías de desarrollo
Asociada a mala situación socioeconómica y hacinamiento
El SIDA favorece su reactivación y evolución rápida: en los últimos
años ha aumentado su frecuencia también en países desarrollados
Transmisión: gotas de Pflügge (enfermedad pulmonar activa,
pacientes bacilíferos)
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Estructuras facultativas
• Cápsula
Protege del sistema inmune (dificulta la fagocitosis, Tinción con tinta china
confiere virulencia, antigenicidad…)
Dificulta la acción de algunos antimicrobianos
Participa en la adherencia
Evita deshidratación
Impide entrada de detergentes
Los hongos son eucariotas (uni o pluricelulares)
Diferencias con bacterias:
Núcleo con cromosomas
Pared celular de los hongos
Membrana nuclear
Nucleolo rico en ARN
Mitocondrias
Aparato de Golgi
Essentials of
Retículo endoplásmico Glycobiology
Second Edition
Ribosomas 80S
Hifas ramificadas
Blanco calcofluor
Aspergillus fumigatus. Colonia
Micelio: conjunto de hifas
Aspergillus fumigatus.
Micelio. Conidioforo
Cultivo de
Candida albicans
Candida albicans, Gram
de cultivo
Candida (Candida albicans y otras especies)
Candida en al menos un cuarto de bocas sanas
Candida en equilibrio dentro de microbiota oral
Patología por alteración de mecanismos defensivos
• Cantidad y tipo de saliva
• pH
• Presencia de prótesis dental
• Tratamiento antibiótico
• Tratamiento con corticoides
• Inmunodepresión
También influyen factores de patogenicidad de la
levadura
Diagnóstico
• Observación microscópica
En fresco
Tinciones
• Cultivo
• Identificación
Test de filamentación
El test de filamentación sirve para poder detectar
el tubo germinal de C.albicans. El tubo germinal es una
extensión filamentosa de la levadura, sin
estrechamiento en su origen, cuyo ancho suele ser la
mitad de la célula progenitora y su longitud tres o
cuatro veces mayor que la célula madre.
Esta prueba es útil para diferenciar C. albicans del resto
de las especies de Candida
3. Observación microscópica de hongos filamentosos
con azul de lactofenol
CRECIMIENTO BACTERIANO EN EL LABORATORIO
• En el laboratorio tenemos que:
1. Reproducir las condiciones óptimas de crecimiento: T, O 2, H2O, pH y
presión osmótica.
2. Suministrar nutrientes
• Para ello disponemos de:
Medios de cultivo: sólidos, semisólidos, líquidos. Pueden ser de
origen natural o sintético, también semisintético.
Estufas de incubación:
• Temperatura
• Atmósfera: aerobiosis, anaerobiosis, enriquecimiento con CO 2,
microaerofilia.
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CRECIMIENTO BACTERIANO EN EL LABORATORIO
Medios de cultivo:
Sólidos,
Semisólidos,
Líquidos.
Medios de cultivo:
No selectivos: contienen suficientes nutrientes como para soportar el
crecimiento de gran variedad de microorganismos.
Selectivos: permiten el crecimiento de sólo un tipo de microorganismo.
Enriquecido: son medios no selectivos que se le agrega sustancias como
sangre, suero, albúmina, etc
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CRECIMIENTO BACTERIANO EN EL LABORATORIO
Medios de cultivo. Ejemplos:
Generales, no selectivos: agar sangre.
Selectivos: agar Sabouraud (crecimiento de hongos).
Selectivos y diferenciales: agar MacConkey (crecimiento de enterobacterias,
diferenciación según fermentación de la lactosa).
Enriquecidos: caldo tioglicolato (aerobios y anaerobios).
Agar:
Consistencia al medio de cultivo
Imagen: Stefan Walkowski. Aeromonas
No consumido por las bacterias
Imagen: Dr David Midgley . Aspergillus fumigatus.
hydrophila colonies 01. 2015. Disponible en: No altera crecimiento bacterias 2006. Disponible en:
https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Aerom https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Aspergillus
onas_hydrophila_colonies_01.jpg?uselang=es _fumigatus.jpg?uselang=es 20
CRECIMIENTO BACTERIANO EN EL LABORATORIO
Medios de cultivo:
Agar Müeller Hinton es un medio nutritivo sólido, no selectivo, que está
compuesto por infusión de carne, peptona ácida de caseína, almidón, agar.
Este medio permite un excelente desarrollo microbiano de la mayoría de
las bacterias de crecimiento rápido.
El agar Müeller Hinton es el medio de cultivo aceptado para la ejecución de
la prueba de susceptibilidad antimicrobiana por el método de difusión en
disco.
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¿Qué es la microbiota?
¿Dónde se encuentra la microbiota?
Funciones
La microbiota promueve el aprovechamiento de nutrientes no digeribles,
genera nutrientes esenciales y modifica la actividad de alimentos y
fármacos.
La microbiota es esencial para el correcto desarrollo del sistema
gastrointestinal y del sistema nervioso.
Las bacteriocinas, ácidos y otros compuestos antimicrobianos producidos
por la
microbiota nos protegen contra los microorganismos patógenos.
La microbiota contribuye de forma decisiva al correcto funcionamiento de
nuestro sistema inmunitario.
Intervenciones sobre la microbiota
Existe base racional para considerar el intento de reparación
experimental de la microbiota intestinal como herramienta con
aplicabilidad clínica para el tratamiento de distintas entidades
relacionadas con la microbiota intestinal (disbiosis)
Probióticos
Prebióticos
Simbióticos
Trasplante fecal
Probióticos
Los probióticos más usados son especies de Lactobacillus y Bifidobacterium
¿Desde cuando se conocen?
Elie Metchnikoff
1910
IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA DE BACTERIAS
• El conocimiento del metabolismo bacteriano es una de las bases del diagnóstico
microbiológico.
• Mediante la realización de pruebas bioquímicas en el laboratorio podemos
determinar las características metabólicas de una bacteria. Detectamos las
enzimas que produce.
• Las diferentes especies bacterianas producen distintas enzimas. Conociendo las
enzimas que produce una bacteria podemos identificarla.
• El perfil enzimático de una bacteria está codificado genéticamente.
• IDENTIFICAR una bacteria = establecer el género y la especie.
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IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA DE BACTERIAS
• Algunas pruebas bioquímicas utilizadas en diagnóstico microbiológico:
1. Pruebas basadas en presencia de enzimas:
Prueba de la catalasa
Prueba de la ureasa
…
2. Pruebas para evidenciar vías metabólicas:
Pruebas de oxidación y fermentación
Degradación de aminoácidos
Utilización de un sustrato
…
3. Capacidad de sobrevivir en presencia de inhibidores: toxinas, antibióticos…
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METABOLISMO BACTERIANO
–La vía AEROBIA produce 2 moléculas tóxicas
(oxidantes):
H2O2
O-2 (anión superóxido)
–Algunas bacterias tienen mecanismos antioxidantes para
eliminar estos productos:
Catalasa: trasforma H2O2 en H2O y O2
Superóxido dismutasa: transforma O- en H O
Reacción de la Catalasa
Agua oxigenada: H2O2
Catalasa
H2O + O-
Burbujas
GÉNERO ESPECIE COAGULASA
Staphylococcus aureus Positivo
Staphylococcus epidermidis Negativo
saprophyticus (SCN)
Coagulasa
Staphylococus coagulasa
negativos
No posee enzima coagulasa (coagulasa -) diferencia
con Staphylococcus aureus.
Posee enzima catalasa (catalasa +) diferencia con los
Streptococcus.
