UNIVERSIDAD JUÁREZ DEL ESTADO DE
DURANGO
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
MICROBIOLOGÍA GENERAL
VII. Unidad Crecimiento de los
microorganismos
Docente: Q.F.B Lidia Beatriz De La Cruz Flores
VII. Unidad Crecimiento de los microorganismos
■VII.1 Crecimiento individual
■ VII.2 Crecimiento de las poblaciones
■VII.3 Métodos de evaluación: cuenta total y viable
■VII.4 Curva de crecimiento bacteriano y sus fases
■VII.5 Tiempo de generación
■VII.6 Crecimiento por lotes, sincrónico y continuo
Crecimiento bacteriano
■ Se define como crecimiento de cualquier sistema biológico al aumento de la
masa celular que implica su multiplicación.
■ El crecimiento bacteriano se puede observar desde dos puntos de vista: a escala
individual y a escala poblacional.
Crecimiento bacteriano
■ A escala individual, incluye una serie de procesos que hacen referencia al ciclo celular,
en los cuales se encuentran: inicio y transcurso de la replicación cromosómica y de
los plásmidos; segregación del cromosoma y los plásmidos a las células hijas;
síntesis de precursores de membranas y pared celular y señales que coordinan la
replicación genomica con la division celular.
■ Por su parte, el crecimiento a nivel poblacional incluye: la cinética de crecimiento;
factores que afectan el tiempo de generación y los factores ambientales que limitan
el crecimiento.
Crecimiento individual
■ Consiste en el aumento del tamaño y peso de las células que precede a la división
celular.
■ Las bacterias se dividen por fisión binaria, a través de la una cual célula madre al
alcanzar un determinado volumen se divide dando dos células hijas. El proceso de fisión
binaria consiste en la autoduplicación del material hereditario seguido de la repartición
en las dos células hijas, las que se separan por estrangulamiento de la membrana celular
y formación de la pared celular.
Crecimiento individual
Curva de crecimiento
El crecimiento de una población microbiana se estudia analizando la curva de crecimiento
de un cultivo microbiano. Cuando los microorganismos se cultivan en un medio líquido,
normalmente se trata de un cultivo discontinuo o en sistema cerrado en consecuencia, las
concentraciones de nutrientes disminuyen y las de residuos aumentan.
Se puede representar el crecimiento de los microorganismos que se multiplican por fisión
binaria como el logaritmo del número de células frente al tiempo de incubación. La curva
resultante tiene cuatro fases diferentes
Fase de latencia
Cuando se introducen microorganismos en un medio de cultivo fresco, normalmente no se
produce un aumento inmediato del número de células o de masa y, por ello, este período se
denomina fase de latencia (lag). Aunque la división celular no se produce inmediatamente y
no hay un incremento neto de masa, es un proceso activo, la célula está sintetizando nuevos
componentes.
Fase de latencia
Razones por las que es necesaria la fase de latencia:
■ Las células pueden ser viejas y poseer cantidades reducidas de ATP, cofactores
esenciales o de ribosomas; estas sustancias deben sintetizarse antes de que se inicie el
crecimiento.
■ El medio puede ser diferente al anterior donde crecían los microorganismos; en este
caso, necesitará nuevas enzimas para usar esos otros nuevos nutrientes.
■ es posible que los microorganismos se hayan alterado y necesiten un tiempo de
recuperación.
Fase de latencia
■ La duración de la fase de latencia varía considerablemente según el estado de los
microorganismos y la naturaleza del medio. Esta fase puede ser bastante larga si el
inoculo procede de un cultivo viejo o de uno que haya sido refrigerado. La inoculación
de un cultivo en otro químicamente diferente resulta también en una fase de latencia
mayor. En este mismo sentido, cuando se transfiere un cultivo en fase de crecimiento
exponencial a un medio nuevo de la misma composición, la fase de latencia se acorta o
no se produce.
Fase exponencial
■ Durante la fase exponencial o logarítmica (log), los microorganismos crecen y se
dividen hasta el nivel máximo posible, en función de su potencial genético, el tipo de
medio y las condiciones en que crecen. La velocidad de crecimiento es constante
durante la fase exponencial; esto es, los microorganismos se duplican en número a
intervalos regulares.
■ El crecimiento exponencial es un crecimiento equilibrado. Es decir, todos los
constituyentes celulares se producen a una velocidad constante, unos respecto de otros.
Si se modifican las concentraciones de nutrientes o las condiciones ambientales, se
origina un crecimiento desequilibrado.
Fase estacionaria
Finalmente, el crecimiento de la población cesa y la curva de crecimiento se hace
horizontal. Las bacterias llegan normalmente a la fase estacionaria cuando la concentración
es de, aproximadamente, 109 células por mL. Otros microorganismos no alcanzan
normalmente esta densidad de población; los cultivos de protozoos y algas no suelen
sobrepasar concentraciones de 106 células por mL.
Las poblaciones microbianas entran en fase estacionaria por varias razones:
Un factor obvio es la limitación de nutrientes; si se reduce drásticamente la
concentración de un nutriente esencial, la población crecerá muy lentamente.
Los organismos aerobios están limitados a menudo por la disponibilidad de O2. El
oxígeno no es muy soluble y puede reducirse tan rápidamente que sólo la superficie del
cultivo tenga una concentración de O2 adecuada para el crecimiento.
Fase estacionaria
Las poblaciones microbianas entran en fase estacionaria por varias razones:
Un factor obvio es la limitación de nutrientes; si se reduce drásticamente la
concentración de un nutriente esencial, la población crecerá muy lentamente.
Los organismos aerobios están limitados a menudo por la disponibilidad de O2. El
oxígeno no es muy soluble y puede reducirse tan rápidamente que sólo la superficie del
cultivo tenga una concentración de O2 adecuada para el crecimiento.
El crecimiento de una población puede también cesar debido a la acumulación de
productos residuales tóxicos.
Fase de muerte
■ La muerte microbiana se define como la pérdida irreversible de la capacidad de
multiplicarse.
■ Cambios ambientales perjudiciales, como privación de nutrientes y acumulación de
residuos tóxicos, originan la disminución del número de células viables, hecho que
caracteriza la fase de muerte. La muerte de una población microbiana, al igual que su
crecimiento durante la fase exponencial, es normalmente logarítmica (esto es, una
cantidad constante de células muere cada hora). Este modelo se mantiene incluso
aunque se observe que el número total de células permanece constante, ya que las
células no se usan inmediatamente después de morir.
Tiempo de generación
■ La velocidad de crecimiento es el incremento en el número de células o en la masa
celular por unidad de tiempo. La velocidad específica de crecimiento es característica
para cada tipo de microorganismo y medio de cultivo (sustrato).
■ El tiempo de generación es el tiempo requerido para que, a partir de una célula, se
formen dos células, es decir, es el tiempo que tarda una población microbiana en
duplicarse. Este tiempo varía considerablemente con los microorganismos y las
condiciones ambientales como la temperatura.
Determinación del crecimiento
microbiano
Se pueden medir tanto la masa como el número de células de la población, ya que el
crecimiento implica un incremento de ambos.
■ Determinación del número de células
■ Determinación de la masa celular
■ Cultivo continuo de microorganismos
Métodos para la cuantificación del
crecimiento bacteriano.
■ Determinación de células viables:
■ Se define como célula viable, aquella célula que es capaz de dividirse y forma una
progenie y la manera usual para realizar un recuento de células viables es determinando
el número de células en la muestra, capaces de formar colonias sobre un medio de
cultivo sólido (agar) y esto se conoce como recuento en placa.
■ Debido a que es difícil saber si una sola bacteria dio origen a una colonia, se expresa
usualmente el número de células viables como unidades formadoras de colonias (UFC).
Para realizar el recuento se seleccionan las placas de la que contengan entre 25 y 250
colonias.
■ Si el promedio de las 3 placas de la dilución 1/1000, es de
32 colonias entonces el recuento es de 32.000 UFC/mL de
muestra.
■ Otra forma de estimar la masa celular de una manera indirecta es determinando la
actividad metabólica de la célula por ejemplo determinando el consumo de oxígeno o
producción de dióxido de carbono. Asumiendo que la cantidad del producto metabólico
está en proporción directa al número de bacterias presentes en la población. Un método
más sencillo y útil para obtener la estimación relativa de la masa bacteriana es utilizar
métodos ópticos (turbidimétricos) que consisten en medir la turbidez, ya que, dentro de
ciertos límites, las suspensiones bacterianas dispersan la luz proporcionalmente a su
concentración.
■ Las suspensiones bacterianas dispersan la luz, al igual que cualquier partícula “relativamente”
pequeña suspendida en agua, por lo tanto, dicha dispersión es proporcional a la masa del
cultivo. Esta medición se puede realizar con dos tipos de equipos.
■ Espectrofotómetro: mide la densidad óptica (D.O.), es decir la absorbancia. En esta técnica hay
que realizar una curva estándar para relacionar los valores de A (absorbancia) con la masa
bacteriana en la muestra problema.
Recuento directo:
■ Consiste en la observación al microscopio de volúmenes muy pequeños de suspensiones de
bacterias. Se usan unos portaobjetos especiales denominados cámaras de Petroff-Hausser; para
que la medida sea correcta, es necesario que la densidad de células sea del orden de 105 por ml.
Recuento de viables:
■ Se realiza sembrando un volumen determinado de cultivo o muestra sobre el medio de cultivo
solido adecuado para estimar el numero de viables contando el numero de colonias que se forman,
ya que cada una de estas deriva de una célula aislada; para que la medida sea correcta desde el
punto de vista estadístico, es necesario contar mas de 300 UFC.
■ En ciertas ocasiones, en las que la densidad de
microorganismos es demasiado baja, estos se pueden recolectar
por filtración a través de una membrana (de 0.2 μm de tamaño
de poro), la cual se coloca en un medio de cultivo adecuado
para que se formen las colonias.
