DIAGNOSTICO DE LA TUBERCULOSIS: EL
PAPEL CRUCIAL DE LA TECNOLOGIA
GENEXPERT
Q.C ELIZABETH TETELPA LARA
LABORATORIO HERZ
Durante un siglo, el diagnóstico microbiológico de la tuberculosis, basado en la
baciloscopia y en el aislamiento e identificación de Mycobacterium tuberculosis en los
cultivos, ha sido poco sensible y lento lo que obligaba en ocasiones a iniciar de forma
empírica tratamiento.
El ensayo Xpert MTB/RIF, es una plataforma de PCR en tiempo real automatizada
integrada y semicuantitativa, que utiliza la plataforma GeneXpert.
Esta prueba identifica el Complejo Mycobacterium tuberculosis y detecta mutaciones
más frecuentes en el gen rpob asociadas a resistencia a rifampicina (RIF), directo de
muestras de pacientes con síntomas de tuberculosis en menos de dos horas.
La plataforma consiste en un sistema cerrado de biología molecular que utiliza cartuchos
desechables de un solo uso que son independientes para el procesamiento de la prueba.
Con ello, se reduce al mínimo el riesgo de contaminación cruzada entre las muestras y
permite realizar un examen de biología molecular con bajos requerimientos de
bioseguridad e infraestructura.
Es adecuado para todos los niveles de laboratorios con una infraestructura apropiada y
con una carga de trabajo adecuado para la capacidad del equipo Xpert MTB/RIF
Detecta tanto Mycobacterium tuberculosis como TB con resistencia a rifampicina en la
misma prueba
Puede ser usada como prueba diagnostica independiente
Requiere suministro de electricidad estable e ininterumpida, calibración anual de los
módulos de los cartuchos y un ambiente con temperaturas entre 15 – 30 °C. los cartuchos
y reactivos deben ser almacenados entre 2 – 28 °C.
No deben ser utilizados para el monitoreo de tratamiento.
OMS 2007
AÑO TECNOLOGÍA DURACIÓN SENSIBILIDAD
ANTES DE 2007 Microscopía por ZN 1 – 3 días Línea base
Cultivo sólido 30 – 60 días
2007 Cultivo líquido/PSD 15 – 30 días + 10% comparado con
Rápido crecimiento cultivo sólido
2008 Prueba rápida por sondas
genéticas (LPA) sólo para 1 día Solamente para PSD a
muestras y cultivos positivos RIF & INH
2009 Microscopia de fluorescencia 1 día +10% comparada a la
LED microscopia por ZN
AÑO TECNOLOGÍA DURACIÓN SENSIBILIDAD
Métodos no comerciales para
cultivo y PSD: (MODS, Solamente para drogas de
2009 Condicional Indicadores colorimétricos, 15-30 días primera línea
Griess)
2010 Avalado Xpert MTB/RIF 2 Horas +40% comparada a la
microscopia por ZN
En el año 2017 GeneXpert MTB/RIF ultra 2 Horas 90% a un 95% para
muestras pulmonares.
En el año 2020 GeneXpert MTB/ XDR 2 Horas 93-98% dependiendo del
resistencia a isoniazida, fármaco estudiado.
fluoroquinolonas, aminoglicósidos
y etionamida.
GENE XPERT-OMNI
Este test utiliza la tecnología Xpert en un equipo portable para un
solo cartucho, un dispositivo móvil y baterías recargables. Está
indicado para ser empleado en lugares alejados, sin acceso a
hospitales y laboratorios, o en centros de salud.
XPERT-XDR
Este test detecta genes de resistencia para isoniacida,
fluoroquinolonas y aminoglicósidos. Estaría recomendado para
pacientes que tengan un resultado positivo de TB-RR con el Xpert
MTB/RIF o Xpert MTB/RIF ultra.
CARTUCHOS
En el cartucho GeneXpert MTB/RIF se realizan todos los pasos para la PCR en tiempo
real: la liberación del ADN, la combinación con los reactivos, la amplificación y la
detección a través de fluorescencia liberada por sondas específicas.
MUESTRAS
La prueba esta recomendada para todas las muestras pulmonares: expectoración
espontánea e inducida, contenidos gástricos y lavados broncoalveolares.
Muestras extrapulmonares: líquido cefalorraquídeo, líquido pleural, fluido ascítico, fluido
pericárdico, orina , sangre y deposiciones.
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA DIRECTA
SEDIMENTO DE ESPUTO PROCESADO
TIPO DE MUESTRA VOLUMEN MINIMO
Expectoración 1 mL
Líquidas ( saliva y LCR ) > 500 ml
Tejido ganglionar La cantidad recolectada
SEDIMENTO DE ESPUTO
Añadir 1,5 ml de muestra reactivo a 0,5 ml del sedimento de la muestra de esputo
decontaminado/concentrado (nota: la proporción de reactivo y muestra es de 3: 1)
Cierre la tapa del frasco y agite enérgicamente de 10 a 20 veces o utilice un mezclador
vortex durante 10 segundos como mínimo.
Incube a temperatura ambiente por 10 minutos
Luego agítela nuevamente de 10 a 20 veces o utilice un mezclador vortex durante 10
segundos como mínimo
Incube a temperatura ambiente durante 5 minutos
Transcurrido el tiempo de incubación, la muestra debe estar líquida antes de ser
procesada. Verifique que se encuentra sin grumos visibles de esputo.
MUESTRAS EXTRAPULMONARES
Nódulos Linfáticos y Tejidos:
Cortar la muestra de tejido utilizando tijeras y pinzas estériles; poner en un
homogeneizador o molino de tejidos
Añadir 2 mL de solución salina (PBS)
Coloque el tejido en el homogenizador hasta obtener una suspensión homogénea
Deje en reposo para que las partículas mayores sedimenten en el fondo (5-10 minutos)
Coloque 0,7 mL del sobrenadante en un tubo cónico con tapa de rosca (asegúrese que no
se transfieran grumos de tejido)
Añadir 1,4 mL del reactivo de muestra del Xpert .
Procese como se describe para la realización de la prueba de Xpert para muestras de
esputo
Inocule el cartucho con 2 o + mL
Muestras de LCR:
1. Muestras de LCR con más de 5 mL
Transferir para un tubo cónico y centrifugar (3000g:15 minutos)
Decantar el sobrenadante en un recipiente con solución desinfectante
Resuspender el sedimento hasta un volumen de 2 mL utilizando el reactivo de muestra del
Xpert MTB/RIF
Inocule el cartucho con la muestra procesada y realice la prueba del Xpert
2. Muestras de LCR con 1-5 mL( incluyendo muestras con sangre)
Añadir igual volumen de reactivo de muestra del Xpert MTB/RIF
Añadir 2 mL en el cartucho y realice la prueba de Xpert
3. Muestras de LCR con 0,1-1 mL
Añadir 2 mL de reactivo de muestra de Xpert
Añadir 2 mL en el cartucho y realice la prueba de Xpert
4. Muestras de LCR con menos de 0,1 mL
Es una muestra insuficiente para realizar Xpert MTB/RIF
RESULTADOS E INTERPRETACION
RESULTADO INTERPRETACIÓN
MTB detectado/resistencia a RIF detectada • La muestra contiene la secuencia diana de Mycobacterium
tuberculosis.
• Se ha detectado una mutación del gen rpoB
MTB detectada/ resistencia a RIF no • La muestra contiene la secuencia diana de Mycobacterium
detectada tuberculosis
• No se ha detectado ninguna mutación del gen rpoB
MTB detectada/resistencia a RIF • La muestra contiene la secuencia diana de Mycobacterium
indeterminada tuberculosis.
• No se ha podido determinar resistencia a rifampicina,
debido a una detección insuficiente de la señal.
MTB no detectado • No se ha detectado la secuencia diana de MTB en la
muestra.
BIOSEGURIDAD
Xpert MTB/RIF es un procedimiento de bajo riesgo y requiere del mismo nivel de precaución que se
utiliza para realizar un análisis de microscopia fluorescente LED.
Trabajar en un área ventilada
Utilizar guantes y bata de laboratorio durante todo el tiempo en que manipulen muestras
En establecimientos con alta carga de TB MDR, se deben tomar precauciones adicionales
( mascarillas N95, cabinas de bioseguridad )basado en la evaluación de riesgo.
DESINFECTANTES
FENOL, 2 – 5 % en agua ( desionizada ): Altamente irritante y se debe ser cuidadoso en su
preparación, se utiliza como :
• Descontaminar equipo, superficies y objetos/líquidos previos a su descarte
• Preparar diariamente y dejar en contacto con la superficie al menos durante 15 minutos para
asegurar descontaminación.
CLORO 1- 5 % (Hipoclorito de sodio-blanqueador): es irritante, y muy corrosivo para metales y
plásticos.
• Para desinfectar en general , incluyendo objetos contaminados
• Preparar diariamente y deje al menos 15 minutos en contacto para asegurar la descontaminación.
• Almacene en un área bien ventilada ( gas tóxico ) y nunca autoclave.
ALCOHOL 70 %: no residual, pero es volátil e inflamable.
• Utilice como desinfectante tanto de piel ( seguido de lavado con jabón ) como de
superficies.
ACIDO PERACETICO: No residual, pero con estabilidad de 48 horas posterior a su
preparación.
• Rápida acción contra todos los microorganismos
SOSPECHA TB
Pruebas de sondas
Xpert cultivo genéticas (LPA)
Xpert positivo Xpert positivo
Xpert negativo y RR
sin RR
Tratamiento esquema Nueva muestra
Esperar resultado de
cultivo primario
Xpert LPA de muestra
No RR/MR Tratamiento
RR/MR MDR
Paciente adulto o pediátrico
• Sospecha de TB MFR ( Recaídas a tratamientos previos, Fracasos, Abandonos-pérdidas de seguimiento)
• VIH con sospecha de TB
• Contactos de pacientes con TB-MFR
• Trabajadores de la salud
TB no
Prueba TB detectada detectada
TB detectada
invalida RIF resistente RIF no
RIF sensible
detectada
Caso bacteriológicamente confirmado como
TB resistente a Rifampicina (puede cambiar Seguimiento clínico
Caso bacteriológicamente confirmado como Repetir la prueba en otra Solicitar cultivo ( si la sospecha es alta o
a MFR )
TB sensible muestra si el paciente tiene la sospecha de una
Iniciar tratamiento para TB MFR
Iniciar tratamiento para TB sensible MNTB)
Solicitar PFS de 1era y 2da línea
En caso necesario modificar el esquema de tratamiento
Solicitar baciloscopia (mensual) y cultivo (bimensual)
Solicitar basiloscopia para seguimiento al para seguimiento al tratamiento y clasificación final
tratamiento y clasificación
Paciente adulto o pediátrico
Meningitis tuberculosa presuntiva/LCR
• Si el volumen de la muestra es pequeño hacer solo Xpert MTB/RIF
• Si el volumen de la muestra es suficiente realizar cultivo en simultáneo
TB extra pulmonar presuntiva/ Otras muestras
TB no
Prueba TB detectada detectada
TB detectada
invalida RIF resistente RIF no
RIF sensible
detectada
Caso bacteriológicamente confirmado como TB Seguimiento clínico
Repetir la prueba en otra Iniciar tratamiento para TB Solicitar cultivo ( si la sospecha es alta o
sensible
Iniciar tratamiento para TB sensible muestra MFR si el paciente tiene la sospecha de una
MNTB)
Solicitar PFS de 1era y 2da línea
Seguimiento clínico En caso necesario modificar el
esquema de tratamiento
CONCLUSIONES
El Xpert MTB/RIF puede diagnosticar con rapidez y precisión la TB y la resistencia a
rifampicina, pero no debe ser utilizado como prueba para control de tratamiento de
pacientes.
La muestra de esputo debe tener buena calidad lo cual es importante para un buen
diagnóstico
Recoger una muestra de esputo para la prueba Xpert MTB/RIF (repita la prueba en caso
de error, resultado no válido o sin resultado)
