DETERMINACIN DE COLIFORMES TOTALES, TERMOTOLERANTES Y ESCHERICHIA COLI
Sheila Cabello Elizabeth Salcedo Melissa Zaragoza Janet Uscamaita Saulo Caro
RELACIN ENTRE COLIFORMES TOTALES, TERMOTOLERANTES Y E. coli
COLIFORMES
La denominacin genrica coliformes designa a un grupo de especies bacterianas que tienen ciertas caractersticas bioqumicas en comn e importancia relevante como indicadores de contaminacin del agua y los alimentos.
GNEROS
Escherichia Klebsiella Enterobacter Citrobacter Serratia
FUENTE
HECES (humanos y animales) HECES, AMBIENTE HECES, AMBIENTE AMBIENTE AMBIENTE
Caractersticas Bioqumicas
Aerobias o anaerobias facultativas Bacilos Gram negativos Oxidasa negativos No ser esporgenas Fermentar la lactosa a 35 C en 48 horas, produciendo cido lctico y gas.
COLIFORMES TOTALES
Los coliformes son una familia de bacterias que se encuentran comnmente en las plantas, el suelo y los animales, incluyendo a los humanos. Clasificacin: * Coliformes Totales * Coliformes Fecales
COLIFORMES FECALES
Se denominan termotolerantes Los coliformes fecales son un subgrupo de los coliformes totales, capaz de fermentar la lactosa a 44.5C.
Como los coliformes fecales se encuentran casi exclusivamente en las heces de animales de sangre caliente, se considera que reflejan mejor la presencia de contaminacin fecal.
ESCHERICHIA COLI
Existe como comensal en el intestino delgado de humanos y animales
Constituido por las siguientes cepas:
E. E. E. E. E. E. coli enterotoxignica (ETEC) coli enteropatgena (EPEC) Coli enterohemorrgica (EHEC) coli enteroinvasiva (EIEC) coli enteroagregativa (EAEC) coli enteroadherente difusa (DAEC).
Indicadores de la calidad bacteriolgica del agua de bebida. Gua de la OMS, 1995
Escherichia coli Coliformes termotolerantes
Coliformes totales
PRUEBA DE COLIFORMES
El procedimiento del nmero ms probable (MPN) Filtracin a travs de una membrana (MF)
Mtodo de Diluciones en Tubos Mltiples
Se basa en la inoculacin de alcuotas de la muestra en una serie de tubos . Se fundamenta en la capacidad de este grupo microbiano de fermentar la lactosa con produccin de cido y gas al incubarlos.
Fase Presuntiva:
Medio de cultivo: Caldo lauril sulfato de sodio
Fase Presuntiva:
Estos tubos se incuban a la temperatura correspondiente durante 24 horas.
Los Coliformes son lactosa positiva, son capaces de fermentar a la con produccin de cido y gas
La reaccin ser positiva cuando: Se produce desprendimiento de gas El medio vira a color
Fase Confirmativa en: Coliformes Totales
Se transfiere de 2 a 3 asadas de cada tubo positivo obtenido durante la prueba presuntiva, a otro tubo que contiene caldo de bilis verde brillante. Incubar a 35 2C durante 24 a 48 h. Son positivos: tubos en donde se observe turbidez y produccin de gas.
Fase Confirmativa en: Coliformes Termotolerantes
Se transfiere de 2 a 3 asadas de cada tubo positivo obtenido durante la prueba presuntiva a un tubo con caldo lactobiliado (EC) Incubar a 44.5 0.1C durante 24 a 48 h. Son positivos: tubos en donde se observe crecimiento y produccin de gas
Tabla NMP
Tabla NMP
Nmero ms probable (NMP) de organismos coliformes y organismos coliformes termotolerantes que pueda estar presente en 100 cm3 de muestra
Filtracin a travs de membrana
Se basa en la filtracin de una muestra directa o una alcuota para concentrar clulas viables sobre la superficie de una membrana celulosa y transferirlas a un medio de cultivo selectivo, para posteriormente contar el nmero de unidades formadoras de colonias (UFC) desarrolladas despus de la incubacin.
Seleccin del tamao de muestra:
Es determinado bacteriana.
por
la
densidad
Volumen de muestra sugerida para prueba de coliformes totales y coliformes fecales por filtro de membrana es 100 ml.
Filtracin de la muestra:
Colocar una membrana estril sobre el porta filtro poroso. Colocar el embudo sobre el receptculo y asegurarlo. Filtrar la muestra bajo vaco parcial, con el filtro an en su lugar, enjuague el embudo con buffer estril. Quitar el embudo e inmediatamente despus retirar la membrana con pinzas estriles y colquela sobre el medio selectivo con un movimiento circular a fin de evitar la entrada de aire.
Siembra del filtro para coliformes totales:
Se utiliza medio agar ENDO en cajas Petri al tamao de los filtros. Con pinzas estriles colocar el filtro directamente sobre el agar. Invertir las placas e incubar por 20-22 horas a 35 0,5C.
Siembra del filtro para coliformes fecales:
Colocar una pad absorvente en la tapa de una caja de petri estril y pipetear 1,8 a 2,0 ml de medio FC para saturar la pad. Asepticamente colocar sobre la pad un filtro, incubar sin invertir la caja durante 15 a 20 horas a 44 0,5C en una atmsfera de 90% de humedad relativa.
Conteo:
Las colonias tpicas de coliformes tienen color rojo obscuro con brillo metlico. El rea brillante puede variar de tamao desde que solo brille la parte superior de la colonia hasta que abarque la superficie total de la colonia, las colonias atpicas de coliformes pueden ser rojo oscuro o nucleadas sin brillo.
Las colonias que no tengan brillo pueden ser rosas, rojas, blancas o incoloras y se consideran no coliformes Las muestras de agua tratada efluente o residual puede incluir bacterias estresadas que crecen relativamente lento y producen un mximo brillo en 2224 horas. Los organismos de fuentes no tratadas pueden producir brillo a las 1618 horas y el brillo puede, subsecuentemente disminuir despus de 24-30 horas.
Verificacin de los coliformes:
Ocasionalmente las colonias de no coliformes aparecen como colonias tpicas con brillo. Las colonias atpicas (rojo oscuro, nucleadas sin brillo metlico) ocasionalmente pueden ser coliformes
Fermentacin de la lactosa
Verificar colonias tpicas y atpicas incluidas en la cuenta directa o un mnimo de 5 de tales colonias de muestras de agua potable por transferencia del crecimiento de cada colonia en caldo lauril triptosa, incubar a 35 0,5C durante 48 horas.
Seleccionar 5 colonias con brillo metlico, o Trasladar las colonias con un hisopo del filtro a..
Crecimiento+, Gas+
Crecimiento+, Gas+
SELECCIONAR 5 COLONIAS VERDE DORADO Y CON BRILLO METLICO
Clculo de la densidad de coliformes
Colonias de coliformes = 100 ml
Colonias de coliformes contados x 100 ml de muestra filtrada
* Se expresa en UFC / 100 ml
