Tecnológico de Estudios Superiores de Ecatepec

Maestría en eficiencia energética y energías renovables

Preparación y caracterización de lacasa, xilanasa y

celulasa de Ganoderma L. y Pleurotus O.
inmovilizadas en Fe3O4 para su uso en la producción
de bioetanol de amaranto
Alumno: Bryan Omar Lecona Zarate
Asesora: Dr. María Belem Arce Vázquez
 Contenido

Introducción
Antecedentes
Justificación
Objetivos
Hipótesis
Diseño experimental
Metodología
Cronograma de actividades
 Primera generación

Introducción
Biogás
Fuentes de energía Segunda generación

Eólica
Biodiesel
Energías Energías Solar
No renovables Renovables Tercera generación

Mareomotriz

Geotérmica
Cuarta generación

Biocombustibles Bioetanol

1
 Bioetanol

Crisis del petróleo en

Características
1973
* Compuesto orgánico conocido como alcohol etílico
𝐶𝐻 3 𝐶𝐻 2 𝑂𝐻

Formas de obtención

Proálcool en Brasil, 1974 -Química

Etileno Etanol

-Biológica

2
 Proceso de producción de bioetanol

Biomasa
Deslignificación

Sacarificación

Fermentación

Destilación

3
Estructura

(Baruah et al., 2018)

4
 Biomasa potencial para producir bioetanol
Nombre científico Celulosa (%) Hemicelulosa (%) Lignina (%) Cenizas (%) EtOH RT(L/ton)
Imperata cylindrica 44.4± 0.1 31.1±0.0 6.7±0.0 6.9±0.0 548.4±1.4
Amaranthus viridis 37.4±0.1 34.2±0.0 5.1±0.1 16.9±0.2 521.0±0.9
Sida acuta 56.0 ± 0.3 16.0 ± 0.4 6.8 ± 0.1 5.1 ± 0.1 520.3 ± 5.4
Rottboellia 41.6 ± 0.7 28.6 ± 0.4 7.5 ± 0.1 10.5 ± 0.3 509.7 ± 8.1
cochinchinensis
Sorghum halepense 44.4 ± 0.1 25.8 ± 0.2 6.6 ± 0.5 8.8 ± 0.3 508.8 ± 2.6
Eragrostis amabilis 39.7 ± 0.4 29.6 ±0.2 7.2 ± 0.2 5.5 ± 0.1 502.9 ± 4.7
Cyperus imbricatus 35.6 ± 0.1 32.3 ± 0.3 4.7 ± 0.3 7.4 ± 0.1 493.6 ± 3.2
Cenchrus echinatus 35.8 ± 0.6 31.8 ± 0.4 6.3 ± 0.3 13.9 ± 0.2 491.4 ± 7.4
Cyathula prostrata 50.0 ± 0.3 17.0 ± 0.3 10.9 ± 0.1 10.3 ± 0.1 484.8 ± 4.4
Eriochloa procera 37.0 ± 0.0 29.5 ± 0.1 5.3 ± 0.3 13.1 ± 0.0 483.2 ± 1.1
Brachiaria mutica 37.7 ± 0.01 28.8 ± 0.8 0.8 5.6 ± 0.8 10.9 ± 0.2 482.8 ± 6.7
Sporobolus indicus 35.6 ± 0.0 29.9 ± 0.1 6.6 ± 0.0 9.1 ± 0.3 476.2 ± 1.0

EtOH RT= Rendimiento teórico (Premjet, 2018)

5
 Amaranto

Estados de producción
Producción anual -Puebla 54%
5025 ton / ha -Tlaxcala 23%
-Estado de México 18%
-Otros 5%

(SAGARPA, 2018) 6
Proceso de producción de
bioetanol
Catálisis
Química
Biomasa química

¿
Deslignificación

Tipos de
Sacarificación
hidrolisis

Fermentación

Destilación
Biológica Catálisis
enzimática
7
Sistema de recuperación

Absorción

Métodos Físicos

Atrapamiento
Métodos de
inmovilización
Enlace covalente

Métodos Químicos

Reticulación

Enzima
8
 Antecedentes

Deeba, F., et al. (2018)

Premjet, S. (2018)

Amaranto

Sistemas de recuperación

Fatma, S., Saleem, A., & Tabassum, R. (2020)

Dutta, N., & Saha, M. K. (2018). Kaur, P., Taggar, M. S., & Kalia, A. (2020)
Coughlin, J., et al. (2016)
Lin, L., et al. (2016)

Wang, H., et al. (2017).

Dutta, S. K., & Chakraborty, S. (2019). 9
Justificación𝑋 𝑖𝑙𝑎𝑛𝑎𝑠𝑎
𝐿 𝑎𝑐𝑎𝑠𝑎
𝐶 𝑒𝑙𝑢𝑙𝑜𝑠𝑎

T Pleurotus ostreatus 10
 Hipótesis

Al inmovilizar las enzimas lacasa, xilanasa y celulosa de Ganoderma L. y

Pleurotus O. en un soporte de se favorecera la interacción con la lignina,
hemicelulosa y celulosa del amaranto, ademas de facilitar su recuperación en
la obtención de azucares fermentables para la producción de bioetanol.

11
 Objetivo general

Obtener catalizadores biológicos inmoviles con soportes de y su caracterización para

su uso en la producción de bioetanol de amaranto en un reactor batch.

12
 Objetivo específicos

• Obtener y purificar parcialmente enzimas lacasa, xilanasa y celulosa de Ganoderma

Lucidum y Pleurotus ostreatus.
• Desarrollar un estudio dinámico de la interacción enzima inmóvil y el rastrojo de
amaranto para la obtención de modelos matemáticos.
• Determinar parámetros cinéticos de enzimas inmovilizadas y ligadas a un soporte
de .
• Caracterizar la fermentación de azúcares fermentables del rastrojo de amaranto para
la obtención de bioetanol.

13
Diseño experimental
 Rastrojo de Amaranto (RA) Metodología Aislamiento
microbiano
Acondicionamiento
-Molienda Pre-inoculó de la cepa de
-Tamizado malla N° 40 Ganoderma versicolor y
Pleurotus Ostreautos
Harina de rastrojo de
amaranto (HRA) Diseño experimental 1
Poner hipervínculo Fermentación
=75%
t= 2 h Deslignificación
Rai, et al., (2019)
Extracto crudo Cinética Enzimática
enzimático ,
HRA deslignificada
Diseño experimental 2
Poner hipervínculo
Inmovilización de Diseño experimental 3
Hidrólisis enzimática Poner hipervínculo
enzimas con
Buffer de acetatos 0.2M
Azucares Método de DNS, Miller, pH 4.8
(1958). T 40 °C
fermentables Tiempo 2 h agitación constante
T: 30 °C
Saccaromycei pH 4.5
cerveesai Fermentación Agitación =110 rpm
t= 2 h Caracterización
Fermentado -Rayos X
-Difractometro con radiación
-Microscopio de barrido
Biomasa Centrifugación

Licores Cuantificación de bioetanol

14
Planeación de proyecto investigación Cronograma de actividades
Preparación y caracterización de lacasa, xilanasa y celulosa de Trametres versicolor y Pleurotus ostreatus inmovilizadas en Fe3O4 para su uso en
la producción de bioetanol de amaranto
Duración: 10 meses
Fecha de inicio: 07 de septiembre 2020 Fecha de término: 07 de julio 2021

Actividades Meses
Sep Oct Nov Dic Ene Feb Mar Abr May Jun Jul
1. Producción de enzimas
2. Purificación de enzimas
3. Desarrollo de modelos de interacción E/S

4. Prepara soporte de Fe3O4

5. Inmovilización de enzimas en un soporte
Fe3O4
6. Caracterización de enzimas inmóviles

7. Acondicionamiento de materia prima

8. Hidrolisis enzimática
9. Cuantificación de azucares obtenidos

10. Obtención de bioetanol

11. Redacción de tesis
*E/S, Enzima/Sustrato
13
 Referencias
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functional glutathione S-transferase fusion protein columns for affinity enrichment. Analytical biochemistry, 505, 51-58.
 Dutta, S. K., & Chakraborty, S. (2019). Multiscale Dynamics of Hemicellulose Hydrolysis for Biofuel Production. Industrial & Engineering Chemistry Research.
 Antunes, F. A. F., Chandel, A. K., Teran-Hilares, R., Ingle, A. P., Rai, M., dos Santos Milessi, T. S., ... & dos Santos, J. C. (2019). Overcoming challenges in
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11(1), 2287-2296.
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 Wallace, J., Brienzo, M., García-Aparicio, M. P., & Görgens, J. F. (2016). Lignin enrichment and enzyme deactivation as the root cause of enzymatic hydrolysis
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 Liu, D. M., Chen, J., & Shi, Y. P. (2018). Advances on methods and easy separated support materials for enzymes immobilization. TrAC Trends in Analytical
Chemistry, 102, 332-342.
 Baruah, J., Nath, B. K., Sharma, R., Kumar, S., Deka, R. C., Baruah, D. C., & Kalita, E. (2018). Recent trends in the pretreatment of lignocellulosic biomass for
value-added products. Frontiers in Energy Research, 6, 141.
 Fatma, S., Saleem, A., & Tabassum, R. (2020). Wheat straw hydrolysis by using co-cultures of Trichoderma reesei and Monascus purpureus toward enhanced
biodegradation of the lignocellulosic biomass in bioethanol biorefinery. Biomass Conversion and Biorefinery, 1-12.
 Kaur, P., Taggar, M. S., & Kalia, A. (2020). Characterization of magnetic nanoparticle–immobilized cellulases for enzymatic saccharification of rice straw. Biomass16