Replicación
Licda. Nerkys Lorena Doñe
DNA RNAm PROTEÍNAS
“Es la síntesis del DNA formándose 2
moléculas hijas idénticas a la molécula
madre”
¿CUÁNDO OCURRE?
JUSTO ANTES DE LA DIVISIÓN CELULAR.
¿DÓNDE SE LOCALIZA?
EN EL NÚCLEO.
REGLAS FUNDAMENTALES
Es semi conservativa.
Empieza en un punto de origen.
Ocurre bidireccionalmente.
La dirección de lectura es 3’ 5’
La dirección de síntesis es 5’ 3’ y es
semi discontinua.
La polimerización es termodinámicamente
favorable
REPLICACIÓN EN
PROCARIOTAS
MODELOS O
TEORÍAS
DISPERSIVA
CONSERVATIVA
SEMICONSERVATIVA
Las cadenas de DNA
progenitoras se
rompen a intervalos,
y las dos moléculas
de DNA de doble
cadena resultantes
(moléculas hijas)
presentan
fragmentos del DNA
progenitor
combinados con
fragmentos nuevos.
Cada una de las
hebras del DNA
progenitor se duplica
produciendo dos
moléculas hijas una de
las cuáles es la
molécula de DNA
progenitora intacta y
la otra una molécula
de DNA cuyas dos
hebras son nuevas.
• Se originan dos
moléculas de DNA,
cada una de ellas
compuesta de una
hebra del DNA
original y de una
hebra complementaria
nueva. Propuesta por
el modelo de Watson y
Crick.
REQUERIMIENTOS DE LA
REPLICACIÓN
MOLDE Cadena de
DNA dúplex.
SUSTRATOS:
4 Ribonucleósidos
Trifosfatados Mg2++
(ATP, GTP, UTP, CTP) ATP
4 Desoxiribonucleósidos
Proteínas
Trifosfatados
(dATP, dGTP, dTTP, dCTP) Estabilizadoras de la
Hebra Simple del
DNA (SSB).
ENZIMAS
PROTEÍNA DNA a
HELICASAS
TOPOISOMERASAS I Y II (DNA GIRASA)
PRIMASA O RNA POLIMERASA
DNA POLIMERASAS:
• DNA POLIMERASA III
• DNA POLIMERASA I
PIROFOSFATASAS
DNA LIGASA
ENZIMAS DE LA REPLICACIÓN
Proteína DNA a Separa las cadenas del DNA
dúplex.
DNA Helicasas Desenrollan la doble hélice.
Proteínas Estabilizadoras del
DNA Monocatenario (SSB) Mantienen abierta
la hélice.
Topoisomerasas I y II Estabilizan el
desenrrollamiento.
ENZIMAS DE LA REPLICACIÓN
RNA Primasa Genera el RNA cebador.
RNA Cebador Permite que empiece a actuar
la DNA Pol III.
DNA Polimerasas III Sintetiza las cadenas de
DNA.
DNA Polimerasa III y I Corrección de errores.
Pirofosfatasas Aportan la energía necesaria.
DNA Ligasa Une los fragmentos de Okazaki.
ETAPAS
1. INICIACION
2. ELONGACION
3. TERMINACION
PRE-INICIACIÓN
“Desenrrollamiento y apertura de la doble
hélice en el punto ori-c”
LOCALIZAR ORIGEN DE REPLICACIÓN Ori C.
SEPARARLAS CADENAS.
FORMACIÓN DEL TOPOISÓMERO (-).
FORMACIÓN DE LA HORQUILLA DE REPLICACIÓN.
Enzimas Que Participan:
Proteína dnaA
DNA Helicasas
Proteínas Estabilizadoras del DNA
Monocatenario (SSB)
DNA Topoisomerasas I y II
Primosoma
PRE-INICIACIÓN
“Desenrrollamiento y apertura de la
doble hélice en el punto ori-c”
1- Proteína dnaA separa la molécula doble del
DNA formando regiones de cadena simple.
2- DNA Helicasas facilitan el desenrrollamiento
de la cadena dúplex.
3- Proteínas SSB se unen a las hebras molde
para que no vuelvan a enrollarse.
4- DNA girasa y Topoisomerasas I y II eliminan
la tensión generada por la torsión en el
desenrrollamiento.
PROTEÍNA dnaA 20 – 50 monómeros.
Se unen a secuencias especificas de
nucleótidos en el origen de la replicación (rico
en pares de bases de AT) Ori C (245 pb).
Requiere ATP.
Separa la molécula doble del DNA formando
regiones de cadena simple.
La proteína dnaA se une al ori C y a ellos se
unen las proteínas dnaB y dnaC, formando un
complejo proteico.
PUNTO DE ORIGEN
PROCARIOTAS UNO
EUCARIOTAS MÚLTIPLES
PROTEÍNAS ESTABILIZADORAS DE LA HEBRA
SIMPLE DEL DNA (SSB) Se unen a la cadena
simple cooperativamente, una favorece la
unión de las demás.
Mantienen el equilibrio entre la cadena simple
y la doble del DNA.
Mantienen separadas las cadenas y las
protegen de las Nucleasas de DNA de cadena
simple.
DNA HELICASAS
Se unen al DNA de
cadena simple cerca de
la horquilla y se mueve a
la región de cadena doble
forzando la separación y
el desenrrollamiento del
DNA.
Requieren ATP.
Cuando las cadenas se
separan las SSB se unen
evitando que se forme de
nuevo la hélice.
TOPOISOMERASAS Al separarse las
cadenas del DNA doble se forman
superenrollamientos positivos/ negativos en
la región de la horquilla de replicación.
Las Topoisomerasas se encargan de remover
esos superenrollamientos.
I Corta
reversiblemente una
sola cadena de la doble
hélice, pasa la cadena
intacta a través de la
rotura y resella.
Así, relaja los
superenrollamientos
acumulados.
No requieren ATP.
Tienen actividades de
Nucleasa y de Ligasa.
Negativos E. coli
Negativos y Positivos
Eucariotas
II DNA GIRASA
Corta ambas cadenas
de la doble hélice, pasa
la cadena intacta a
través de las roturas y
resella. Así, introduce
superenrollamientos
negativos en el DNA.
Requiere ATP.
Tiene actividades de
Nucleasa y de Ligasa.
27/08/2008 23
AgentesAnti cáncer: Etopósido Diana
Topoisomerasa II humana.
Agentes Antimicrobianos:
Quinolonas Ciprofloxacina
Diana DNA girasa bacteriana
INICIACIÓN
“Síntesis del RNA iniciador”
FORMACIÓN DEL COMPLEJO INICIADOR.
FORMACIÓN DEL RNA INICIADOR.
UNIÓN DEL PRIMER DESOXIRRIBONUCLEÓTIDO.
ENZIMAS QUE PARTICIPAN:
Primosoma Primasa (RNA Pol) + Complejo
Proteínas dnaA, dnaB y dnaC.
DNA Pol III
INICIACIÓN
“Síntesis del RNA iniciador”
Primasa sintetiza la molécula de RNA cebador
o Primer.
DNA Pol III une el 1er. desoxirribonucleótido
al extremo 3’ -OH del cebador.
PRIMASA O RNA POLIMERASA
•Sintetiza de novo secuencias cortas de RNA (5
a 10 nucleótidos) de manera complementaria y
antiparalela al molde de DNA.
•Secuencia de RNA cebador, necesaria para que
actúe la DNA Pol III.
•No tiene actividad correctora.
PRIMOSOMA Es la unión de la Primasa
con el complejo de proteínas (dnaA, dnaB y
dnaC) que se unen al DNA simple.
ELONGACIÓN
“Síntesis del DNA”
ALARGAMIENTO DE LAS CADENAS DE DNA.
HEBRA CONDUCTORA Y HEBRA RETRASADA.
PARTICIPAN DNA POL III , DNA POL I, PIROFOSFATASAS Y
DNA LIGASA.
DNA Polimerasa III
sintetiza las
nuevas
hebras en sentido
5’3’.
DNA POLIMERASA III (Mg2++)
• Actividad de Polimerasa 5’ 3’ Polimeriza
nucleótidos en sentido 5’ 3’ (1,000
n/seg.).
•La cadena matriz 5’ 3’ del DNA para que
sea copiada debe dar una vuelta “De
trombón” para que la DNA Polimerasa pueda
desplazarse por ella.
Actividad de Exonucleasa 3’ 5’ Hidroliza
los nucleótidos, que no estén correctamente
colocados, en sentido 3’ 5’ y rellena.
Esto asegura la fidelidad de la replicación.
ELONGACIÓN
UNIÓN DE LOS NUCLEÓTIDOS
Losnucleótidos se unen entre sí mediante por
enlaces fosfodiester acción de las enzimas
Primasa (RNA Pol), DNA Pol I y III.
Se
unen enlazando el grupo P5’ de un
nucleótido con la posición 3’ del siguiente.
Cadanucleótido debe tener tres grupos P para
poder ser incorporado a la cadena
polinucleotídica.
El nucleótido
pierde dos P como
pirofosfato (PPi) y
se une al azúcar
del nucleótido
siguiente a través
del P restante.
Las Pirofosfatasas
rompen el enlace
del pirofosfato
para proporcionar
energía a la
reacción.
ELONGACIÓN
La cadena 3’5’es leída por la DNA polimerasa
III de manera continua precedida por RNA
cebador (cadena conductora, va en dirección a
la apertura de la horquilla).
La cadena 5’3’ no puede ser leída
directamente, esto se soluciona invirtiendo la
cadena y leyéndola en pequeños fragmentos de
DNA (Okazaki -1,000 n), precedidos por RNA
cebador, que crecen en sentido 5’3’ y que más
tarde se unen (cadena retrasada, va en
dirección contraria a la apertura de la
horquilla).
DNA POLIMERASA I
1- Actividad de Exonucleasa 5’ 3’
PARA ELIMINAR AL RNA INICIADOR.
Separación de los ribonucleótidos del
RNA Cebador y sustitución por los
desoxirribonucleótidos correspondientes.
2- Actividad de Polimerasa 5’ 3’
PARA SINTETIZAR DNA EN DIRECCIÓN 5’ 3’
Rellena los huecos con DNA (10 n/seg.).
3- Actividad de Exonucleasa 3’ 5’
PARA EFECTUAR LAS CORRECCIONES.
Separación de desoxirribonucleótidos
incorrectos y sustitución por los correctos.
DNA LIGASA Sella en forma
covalente las brechas del DNA
sintetizado por la DNA Pol III y el
sintetizado por la DNA Pol I, o sea, une
los fragmentos de OKAZAKI.
Estos nucleótidos deben estar situados
en una estructura de doble cadena y
apareados de manera correcta.
Requiere ATP AMP + PPI o
NAD+ AMP + NMP
AMBAS CADENAS
TERMINACIÓN
“Corrección de Errores”
SE REALIZA LA LECTURA DE PRUEBA PARA CORREGIR
POSIBLES ERRORES.
SE CULMINA LA REPLICACIÓN Y LAS MOLÉCULAS HIJAS
DEL DNA SE SEPARAN.
REPLICACIÓN SEMICONSERVATIVA.
• Las enzimas correctoras son la DNA Pol III y
la DNA Pol I que corrigen todos los errores
cometidos en la replicación o duplicación.
DNA POL III Y DNA POL I
PARA EFECTUAR LAS CORRECCIONES.
Actividad de Exonucleasa 3’ 5’ Hidroliza
los nucleótidos, que no estén correctamente
colocados, en sentido 3’ 5’ y rellena.
Esto asegura la fidelidad de la replicación.
INHIBIDORES DE
LA REPLICACIÓN
INHIBIDORES DE LA
REPLICACIÓN
1- Bloquean la replicación del DNA al detener
la elongación de la cadena, enlenteciendo
así la división de células de rápido
crecimiento y de los virus.
ACRIDÍNA,
ACTINOMICINA D Y
ETIDIO
BLEOMICINA,
◦ Se intercalan entre las NEOCARZINOSTATINA
bases y dificultan la
separación de las cadenas.
Producen rotura de los
NETROPSINA Y enlaces entre los carbonos
DISTAMICINA A 3 y 4 de la ribosa.
• Se unen a zonas ricas en
A-T.
EJEMPLOS
NUCLEÓSIDOS ANÁLOGOS DESOXIADENOSINA
DIDANOSINA (ddI) + OH
◦ Se producen al modificar
la porción de azúcar del TIMIDINA + N3
nucleósido. ZIDOVUDINA (AZT)
◦AZIDO-3’-DESOXITIMIDINA
(AZT) VIH
◦ARABINÓSIDO CITOSINA
(ara C – Cytarabina) QUIMIOTERAPIA
◦ARABINÓSIDO ADENINA
(ara A - Viradabina) ANTIVIRAL
EJEMPLOS
INHIBIDORES DE LA
REPLICACIÓN
2- Actúan sobre las enzimas de replicación
(inhibidores específicos) Forman
complejos con el DNA impidiendo
su desenrrollamiento y la separación
de sus cadenas.
•NOVOBIOCINA Y
•ACIDO NALIDÍXICO DNA GIRASA
•AFIDICOLINA DNA POLIMERASA
EJEMPLOS
