El Dogma Central

Replicación
Traducción Acción
Transcripción
Revisión de los Pasos en la Expresión
Génica

RNA = secuencia de nucleótido

Molécula Adaptadora

proteína = secuencia de aminoácid

La Naturaleza del Código Genético

resumen de resultados
• Un grupo de tres bases codifica para un
aminoácido
• El código no se traslapa
• La secuencia bases se lee a partir de un
punto de inicio fijo, sin ninguna puntuación
• El código es degenerado (en la mayoría de
casos, cada aminoácido puede ser
designado por cualquiera de varios tripletes)
Características del Código Genético
• Todos los codones tienen significado:
significado 61
especifican aminoácidos, y los otros 3 son
codones “sin sentido” (nonsense) o de “parada"
• El código no es ambiguo - sólo un aminoácido
es indicado por cada uno de los 61 codones
• El código es degenerado - excepto para el Trp y
la Met,
Met cada aminoácido es codificado por dos o
más codones
• Codones que representan el mismo o similar
aminoácido son similares en secuencia
• 2da base pirimidina: usualmente aminoácido no
polar
• 2da base purina: usualmente aminoácido polar o
cargado
El Código Genético: 61 codones representan 20
aminoácidos; 3 codones significan parada

El código es degenerado;
Más de un codón/
Aminoácido
 Transcripción
• Básicamente:
• La RNA polimerasa cataliza la transcripción
• Los Promotores señalizan a la RNA
polimerasa donde iniciar la transcripción
• La RNA polimerasa adiciona nucleótidos en
la dirección 5’ a 3’
• Las secuencias Terminadoras indican al
RNA donde detener la transcripción
Tipos Diferentes de RNA Polimerasa
En Bacterias (sistema simple)
- Todas las tres clases de RNA son
transcritas por la misma RNA polimerasa
(RNAP)
En Eucariotas (sistema complejo)
- cada clase es transcrita por una RNA
Polimerasa diferente
•RNAP I - rRNAs
•RNAP II - mRNAs
•RNAP III - tRNAs & RNAs ribosomales
pequeños
 La RNA Polimerasa tiene muchas
funciones
• Escanea el DNA e identifica promotores
• Se une a promotores
• Inicia la transcripción
• Alarga la cadena de RNA
• Termina la transcripción
• Responde a proteínas reguladoras
(activadores y represores)

Luego, la RNAP es una enzima de varias

subunidades
 Transcripción en Procariotas
• En [Link], la RNA polimerasa es un complejo de
465 kD, con 2 , 1 , 1 ', 1  (holoenzima).
• El núcleo de la enzima es 2 , 1 , 1 ’ (puede
transcribir pero no puede encontrar promotores).
  reconoce secuencias del promotor en el DNA;
' se une al DNA;  se une a los NTPs e
interactúa con .
 Lassubunidades parecen ser esenciales para el
ensamblaje y para la activación de la enzima por
las proteínas reguladoras.
Ruta de ensamblaje del núcleo de la enzima

’ = núcleo de la enzima

  NUCLEO DE LA ENZIMA

Iindependiente de Secuencias,
iniciación no especifica de la
 ’ transcripción


+  SUBUNIDAD SIGMA

intercambiable,
vegetativa heat shock Reconoce al promotor
nitrogen starvation
(principal )(para emergencias)(para emergencias)
 
RNAP HOLOENZIMA-70
Promotor-específica
 ’
Iniciación de la
 transcripción
El ciclo transcripción

- La transcripción se
puede ver como un
ciclo:

1. Iniciación

2. Elongación

3. Terminación

Mooney and Landik, 1999. Cell 98: 687

 Mecanismo de iniciación transcripcional

NTPs
k1 k2 k3 k4
R+P RPC RPO RPI RPE
k-1 k-2 k-3
transcriptos
Descrito por una abortivos
constante de
Esta
equilibrio llamada KI
transición es
llamada
KI = RPC/(R + P) “vaciado del
promotor”-
R – RNAP La velocidad de descrita por
P – Promotor formación del kIV
RPC – complejo cerrado
RPO – complejo abierto complejo abierto
RPI – complejo de iniciación es llamada también
RPE- complejo de elongación kII
 Promotores de 10 diferentes genes
bacterianos

Los Promotores de diferentes genes varía en tamaño y secuencia.

Todos promotores contienen dos secuencias cortas características de 6-10
pares de nucleótidos que ayudan a ligarse a la RNA polimerasa
 Arquitectura de un promotor vegetativo (70)

-núcleo promotor reconocido por el factor sigma

T T G A C A T A T A A T
69 79 61 56 54 54 77 76 60 61 56 82
% ocurrencia espaciador 17 bp (43)
A
47
-60
UP Element -35 -10 +1 DSR

Núcleo Promotor
 Iniciación de la transcripción

downstream

upstream
 Elongación

Núcleo de la polimerasa - sin sigma

• La Polimerasa es bastante precisa -  1 error en 10,000 bases
• La tasa de Elongación es 20-50 bases por segundo – más lento en las
regiones ricas en G/C- y más rápida en otros sectores
• Las Topoisomerasas preceden y siguen a la polimerasa para liberar el
supercoiling
Terminación
 Terminación
Dos mecanismos

1) Rho - factor proteico de terminación

– rho es una helicasa ATP-dependiente

– Se mueve a lo largo del transcripto RNA,
encuentra la "burbuja", la desenrolla y libera la
cadena de RNA.
 Terminación Rho-Dependiente
(depende de una proteína Y de una secuencia
de DNA)

sitio rico en
G/C

La RNAP
reduce su
velocidad

helicasa Rho la
alcanza

El complejo de Elongación es
 Terminación
Dos mecanismos
2) Rho-Independiente

- sitios de terminación en el DNA

– repeticiones invertidas, ricas en G:C, las cuales
forman una estructura tallo-lazo (“stem-loop”)
en el transcripto de RNA
– 6-8 A’s en DNA codificando para U’s en el
transcripto
 Terminación de la Transcripción
Rho-Independiente
(depende de una secuencia de DNA - NOT de una
proteína)

estructura “Stem-
loop”
 Terminación
Rho-
independiente
de la
• la RNAP se detiene
transcripción
cuando llega al sitio
de terminación.
• La pausa puede dar el
tiempo para que la
estructura de horquilla
se forme
• Esto interrumpe
interacciones
importantes entre la
RNAP y su producto
RNA
• El RNA rico en U
puede disociarse del
templado
Flujo de Información
En eucariotas, el RNA es procesado
después de la transcripción

• Una capucha metilada 5’ y

una cola Poli-A 3’ son
adicionadas
• Estructura de la capucha
metilada
¿Cómo se adiciona la cola Poli-A al
extremo 3’ del mRNA?
 El empalme (splicing) de RNA
remueve intrones
• Exones – secuencias encontradas en un
DNA génico y en el mRNA maduro
(regiones expresadas)
• Intrones – secuencias encontradas en
DNA pero no en mRNA (regiones
intervenidas)
• Algunos genes eucarióticos tienen
muchos intrones
 ¿Cómo el procesamiento de RNA
separa los intrones y junta los exones?
• El splicing es
catalizado por
spliceosomes
– Ribozimas –
moléculas de
RNA que actúan
como enzimas
– Aseguran que
todas las
reacciones de
splicing ocurran
al unísono
• Splicing
alternativo
– Diferentes
mRNAs pueden
ser producidos
por el mismo
transcripto
– Eventos raros de
transplicing
combinan exones
de diferentes
genes
 Traducción
• Los RNAs de transferencia (tRNAs) median la
traducción de los codones del mRNA a aminoácidos
– Los tRNAs llevan un anticodón en un extremo
• Tres nucleótidos complementarios a un codón del mRNA
– Estructura del tRNA
• Primaria – secuencia de nucleótidos
• Secundaria – secuencias cortas complementarias se aparean y
forman una estructura de hoja de trébol
• Terciaria – dobleces en el espacio 3D le dan la forma de una L
– Apareamiento de base entre un codón mRNA y un
anticodón tRNA dirige la incorporación de un aminoácido a
un polipéptido en crecimiento
– Un tRNA cargado está covalentemente acoplado a su
aminoácido
La Aminoacil-tRNA sintetasa cataliza la unión de los
tRNAs a sus correspondientes aminoácidos
El apareamiento de bases entre el codón mRNA y el
anticodón tRNA determina donde ocurre la
incorporación de aminoácidos
 Wobble:
Algunos tRNAs
reconocen más
de un codón
para los
aminoácidos
que conducen.
Existen aprox. 40
RNAt diferentes
para 61 codones
Los Ribosomas son sitios de síntesis del
polipéptido

• Los
Ribosomas
son
estructuras
complejas
de RNA y
proteína
 Mecanismo de traducción
• Iniciación, marca el inicio de la síntesis del polipéptido
– AUG, codón de inicio en el extremo 5’ del mRNA
– Formilmetionina (fMet) en el tRNA de iniciación
• Primer aminoácido incorporado en bacterias
• Elongación, durante la cual los aminoácidos son
agregados al polipéptido en crecimiento
– Los Ribosomas se mueven en la dirección 5’-3’ revelando codones
– Adición de aminoácidos el término C
– 2-15 aminoácidos por segundo
• Terminación, la cual detiene la síntesis del polipéptido
– Codón sin sentido reconocido en extremo3’ del marco de lectura
– Proteínas de liberación y detención de la síntesis del polipéptido
Iniciación de la traducción
Elongación
Terminación de la traducción
• El Procesamiento
Post-traduccional
pude modificar la
estructura del
polipéptido
 Diferencias Significativas en la expresión
génica entre procariotas y eucariotas
• Eucariotas, la membrana nuclear evita acoplar la
transcripción y la traducción
• Los mensajes Procarióticos son policistrónicos
– Contienen información para múltiples genes
• Eucariotas, la subunidad ribosomal pequeña se une a la
capucha 5’ metilada y migra hacia el codón de inicio AUG
– Secuencia líder 5’ no traducida – entre la capucha 5’ y el codón de
inicio AUG
– Sólo se produce un polipéptido de cada gen
• El tRNA iniciador en procariotas es fMet
• El tRNA iniciador en eucariotas es la Met no modificada
 Mecanismos microbianos de
adaptación al medio ambiente
Fuentes de carbono •Morfolog

Síntesis, activación o inactivación

choque térmico ía

de factores transcripcionales
Daño del DNA
Stress oxidativo •Metabolismo
intermediarios de celular
reducción
aceptores finales (O2, etc) Señales
fuentes de nitrógeno •Transcripción de
fosfatos genes
osmolaridad
Temperatura
Superficies sólidas •Comportamiento
• Modulación de la actividad celular
otros organismos de proteínas mediante
modificación covalente, o
reguladores alostéricos •Diferenciación
(ligandos o moduladores) celular

• Modulación de la • Iniciación de transcripción

síntesis y degradación • Elongación
de enzimas • Estabilidad de RNA
• Control traduccional
• Estructura de templado de
DNA (supercoiling)
 Regulación Génica en Procariotas
• Hay muchos pasos en la expresión génica y la
regulación puede ocurrir en cualquiera de ellos
• Estudios genéticos y moleculares muestran que la
mayor parte de la regulación afecta la iniciación de los
transcriptos de RNA
– Estudios de los genes para la utilización de lactosa
• Regulación Negativa – bloquea la transcripción
• Regulación Positiva – incrementa la transcripción
• Proteínas que se unen al DNA actuando sobre la RNA polimerasa en
el promotor son los mayores agentes de regulación
• Atenuación de la expresión – Vía del triptofano
– La expresión génica es controlada por una terminación
prematura de la transcripción
La RNA polimerasa
es la enzima clave
para la transcripción
• La regulación de la expresión génica puede
ocurrir en muchos pasos:
– Unión de la RNA polimerasa al promotor
– Cambio de la iniciación a la elongación
– Liberación del RNAm en la terminación
– Estabilidad Post-transcripcional del RNAm
– Eficiencia de los ribosomas para reconocer los
sitios de iniciación de la traducción
– Estabilidad del polipéptido
 Utilización de la lactosa por E. coli: Un
sistema modelo de regulación génica
• La presencia de lactosa induce la expresión de los
genes requeridos para su utilización
–Inducción – estimulación de la síntesis de proteína
–Inductor – molécula que estimula la síntesis
–Lactosa – inductor de los genes para la utilización de lactosa
• 1950s y 1960s – Era de Oro de la genética bacteriana
–Ventajas de E. coli y del sistema de utilización de lactosa
•El cultivo de grandes números de bacterias permitió el aislamiento de
mutantes raros
•Los genes de Lactosa no son esenciales para la sobrevivencia (puede
usar glucosa como fuente de carbono)
•La Inducción incrementa la expresión 1000 veces haciendo fácil la
identificación de mutantes
– Cambios de color usando la enzima -galactosidasa (ej., OPNG, X-gal)
hacen eficiente la medición de los niveles de expresión
Represión e inducción coordinadas de tres genes
reveladas por estudios de mutantes en la
utilización de lactosa

• Jacques Monod y Francois Jacob – Instituto

Pasteur en Paris
– Propusieron la Teoría del Operón de la
regulación génica
• Una única señal puede regular simultáneamente la
expresión de varios genes que están agrupados en
un cromosoma e involucrados en el mismo proceso
• Debido a que los genes están agrupados, pueden
ser transcritos juntos como un solo RNAm
• Grupos de genes son llamados Operones
El Análisis de Complementación de mutantes
identifica los genes de utilización de lactosa

• Monod et al. aislaron muchos mutantes Lac-

incapaces de utilizar lactosa
• El análisis de complementación identificó tres
genes (lacZ, lacY, y lacA) en un cluster
fuertemente ligado
 Evidencia experimental de una proteína
represora

• Aislaron un mutante en el gene lacI

– Mutante Constitutivo – sintetiza -
galactosidasa y permeasa lac aún en
ausencia de lactosa (inductor)
– lacI debe ser un represor – las células
deben necesitar la proteína producto del
lacI para prevenir la expresión de lacY y de
lacZ en ausencia del inductor
Experimento de Jacob & Monod
• lacI+, lacZ+ x lacI- lacZ- F-
• La síntesis inicial de -
galactosidasa detenida
• La adición del inductor
reanuda la síntesis
• Conclusión – carencia
inicial del represor permite
la síntesis. Como lacI es
transferida, la síntesis se
detiene
• El Represor detiene la
trascripción mediante unión
al sitio operador cerca del
promotor
 El Inductor libera al represor para
desencadenar la síntesis de enzimas

• La adición del inductor lactosa causa

que la síntesis  – galactosidasa
continúe
• Conclusión: El Inductor se une al
represor por lo que éste no se puede
unir al DNA
• Efecto Alostérico
El Represor tiene dominios de ligamiento
para el operador y para el inductor
Cambios en el operador también pueden
afectar la actividad del represor
 Las Proteínas actúan en trans
Los sitios DNA actúan sólo en cis
• Elementos de acción Trans pueden difundirse
por el citoplasma y actuar sobre sitios diana
del DNA sobre cualquier molécula de DNA en
la célula (ej., proteína represora)
• Elementos de acción Cis pueden solo
influenciar la expresión de genes adyacentes
en la misma molécula DNA (ej., sitio
promotor)
Tres experimentos elucidan los Elementos de
acción cis y trans usando el plasmidio F’
• Síntesis inducible
• El gen lacI+ codifica
para un elemento
difusible que actúa
en trans uniéndose
a cualquier operador
que encuentra sin
interesar la posición
cromosómica
No inducible
• Todos los sitios
operadores (O+)
eventualmente ocupados
por un superrepresor
• El superrepresor lacI no
puede unirse al inductor
• El mutante lacIs codifica
un elemento difusible que
se une al operador sin
importar la posición
cromosómica (elemento
de acción trans)
Constitutivo
• La presencia de
plasmidio O+ no
compensa la
mutación Oc en el
cromosoma
bacteriano
• El operador es un
elemento de acción
cis
 La Teoría del Operón

• Los participantes:
– Genes lacZ, lacY, lacA que hidrolizan la lactosa en glucosa y
galactosa
– Sitio Promotor al cual se liga la RNA polimerasa
– Sitio operador de acción cis
– Represor de acción trans que puede unirse al operador
(codificado por el gen lacI)
– Inductor que evita que el represor se ligue al operador
 La Teoría del Operón

• Represión
– En ausencia de lactosa, el represor se liga al operador
evitando la trascripción
– Elemento regulador Negativo
Los estudios Moleculares ayudan a entender
los detalles de los mecanismos de control
• Marca radioactiva
ligada al represor lac
– Represor procedente de
células lacI+ purificado y
mezclado con un DNA
operador: ocurre co-
sedimentación
– Represor procedente de
lacI+ mezclado con un
DNA operador mutante:
no ocurre co-
sedimentación
La Teoría del Operón
• Inducción
– Lactosa presente
• La Allolactosa se liga al
represor.
• El Represor cambia de
forma y no puede
unirse al operador
• La RNA polimerasa se
une al promotor e inicia
la transcripción de un
mRNA policistrónico
 El control Positivo incrementa la
transcripción de lacZ, lacY, y lacA
• El cAMP se une a la
CRP (cAMP
receptor protein)
cuando la glucosa
es poca
• La CRP se une a la
región reguladora
• Incrementa la
actividad de la RNA
polimerasa en
promotor lac
La activación transcripcional puede ocurrir vía
varios mecanismos diferentes

Casi siempre involucra contactos con la RNAP

Un ejemplo
excelente es la
represión por
catabolitos –
catabolite activator
protein (CAP)

Un regulador
“global”– controla >
100 promotores
 Class I
La CAP es activada por
unión al cAMP (niveles
intracelulares elevados
cuando hay poca glucosa)

La proteína se dimeriza y
une a promotores en un
numero de formas diferentes
Class II
– induce una curvatura de
gran ángulo en el DNA

Clase I – upstream del -35

Class II – solapa con el –35

Contactos con la RNAP

estimulan la transcripción Busby and Ebright, 2000, J. Mol. Biol. 293:199-213
 Modelos para la activación Clase I y Clase
II de promotores

Los sitios de unión CAP

Clase I pueden ser desde –
62 al –103.
–103 La CAP
interactúa con el termino
carboxy de la subunidad-
(CTD) de la RNAP

Los sitios de unión

CAP Clase II
usualmente se solapan
en el –35.
–35 La CAP
interactúa con el CTD,
TD, y el factor 
Busby and Ebright, 2000, J. Mol. Biol. 293:199-213
Algunos reguladores positivos incrementan
la transcripción de genes sólo en una vía

• AraC es un
regulador positivo
para todos los
genes del
metabolismo de la
arabinosa
• La pérdida de
función por
mutación resulta en
poca o nada
expresión de genes
 Muchas proteínas que se unen al DNA
contienen un motivo hélice-vuelta-hélice
• Dos regiones alfa-hélice
separadas por una vuelta
en la estructura de la
proteína
• El motivo Hélice-vuelta-
hélice encaja en el surco
mayor del DNA
• La mayoría de las
proteínas represoras
contienen este motivo
La mayoría de las proteínas reguladoras son
oligoméricas y tienen más de un dominio de
ligamiento a DNA

 Esto ha sido
determinado
mediante DNA
footprinting
El looping del DNA es una característica
común de las proteínas reguladoras
• AraC actúa como
represor y activador
– Sin arabinosa
• Liagamiento al
araO y araI1 causa
looping y evita la
transcripción de
RNA
– Arabinosa presente
• La Arabinosa se
une al araI1 y araI2
pero no al araO.
La RNA polimerasa
interactúa con AraC
en los sitios araI y
transcribe los
genes
 ¿Cómo interactúan las proteínas
reguladoras con la RNA polimerasa
• Reguladores Negativos (represor lac)
– Bloquean físicamente los sitios de unión
del DNA de la RNA polimerasa
• Reguladores Positivos
– Establecen contacto físico con la RNA
polimerasa aumentando la habilidad de la
enzima para iniciar la transcripción
 La atenuación de la expresión génica:
sintonización fina del operón trp mediante
terminación de la transcripción
• La presencia de triptofano activa un
represor del operón trp
– El gen trpR produce el represor
• Co-represor – el triptofano se une al represor
trp permitiéndole que se una al DNA operador
e inhiba la transcripción
 La terminación de la transcripción
afina la regulación del operón trp
• Los mutantes trpR- no son constitutivos
• Cambios independientes del Represor en la expresión trp
• Dos transcriptos alternativos dan lugar a
diferentes resultados transcripcionales
– La secuencia Líder puede plegarse en dos diferentes
conformaciones estables
• Triptofano presente – el ribosoma se mueve rápidamente
pasando los codones en el líder permitiendo la formación de
una estructura stem-loop terminando la transcripción
• Tryptophan ausente – el ribosoma se detiene permitiendo la
formación de una estructura stem loop normal y la
transcripción procede normalmente
Regulación Global o Sistemas
Multigénicos
El sistema de redes
Estímulo
permite regular (stress)
conjuntamente un
número indefinido de Senso
r
operones. El
fenómeno de pasaje Seña
de información se l
llama trasducción de Transductor
señales. (es)

Regulado
r

Operón Operón b Operón

a c

Proteínas (“cross
talk”)

Respuest
 Mecanismos regulatorios globales
coordinan la expresión de muchos genes
• El factor Normal sigma (70) se une a la RNA
polimerasa y reconoce las secuencias en el promotor
para iniciar la transcripción

• Los choques térmicos inactivan 70

• El producto del gen rpoH, 32 se une a una secuencia en
el promotor de los genes “heat shock” cuando el calor
causa estrés y la transcripción se inicia
 Factores que influencian el incremento en la
actividad del 32 después del choque térmico
• Incremento en la transcripción del gen rpoH
• Incremento en la traducción del mRNA 32 respaldado
por la mayor estabilidad del mRNA rpoH
• Incremento en la estabilidad y actividad de la proteína
32. Las Chaperonas DnaJ/K se unen e inhiben al 32
en condiciones normales. A temperaturas altas, no
ocurre la unión a 32 y más 32 está libre para
asociarse con la RNA polimerasa.
• La inactividad de 70 disminuye la competencia con 32
para formar la holoenzima de la RNA polimerasa
 ¿Qué permite la transcripción del
32 durante el choque térmico?
• Temperaturas Normales, el gen rpoH (codifica
para 32) tiene una secuencia promotora reconocida
por 70 la cual inicia la transcripción
• Temperaturas Altas (no 70), un secuencia
promotora diferente del gen rpoH es reconocida por
un factor sigma diferente, 24
 Factores Sigma Alternos
reconocen promotores de arquitectura
diferente – diferentes regulones de genes

Ishihama, 2000, Ann. Rev. Microbiol. 54:499-518

Los Promotores regulados por factores sigma
alternos pueden tener secuencias de consenso
completamente diferentes

70 TTGACA – 17 bp – TATAATN3-6-A

-35 -10

32 CTTGAAA – 16 bp – CCCCATNTN3-10-T/A

-35 -10

54 GG – N12 – GC/T – 12bp – A

-24 -12
En cualquier momento dado la mayoría de la RNAP
es 70, pero cierto porcentaje son ’s alternos

Ishihama, 2000, Ann. Rev. Microbiol. 54:499-518

La mayoría de los factores  son de la familia del 70
y por tanto funcionan como el 70

El54 es diferente – debe ser activado por proteínas

activadoras después de ligamiento – el kII es afectado – el
RPO es formado

Gralla, 2000, J. Bacteriol. 182:4129-4136

 Desarrollo
Microbiano
Definiciones

1. Dos células son diferentes entre ellas si, mientras

poseen el mismo genoma, el patrón de las proteínas
que sintetizan es diferente (Jacob y Monod, 1963)

2. El desarrollo es una serie de cambios estables o

metaestables en la forma y función de una célula,
donde tales cambios son parte del ciclo normal de
vida de la célula

3. El desarrollo Procariótico involucra cambios en forma

y función que juegan un papel prominente en el
ciclo de vida del organismo
Complejidad
del desarrollo
en las
Mixobacterias
Myxococcus Sorangium
fulvus cellulosum

Myxococcus

Stigmatella sp.

Chondromyces
crocatus
Los cuerpos fructíferos de las Myxobacterias están
compuestos por agregados de miles de células
bacterianas

Agregado maduro

Agregado jóven

Dworkin, 1996, Microbiol. Rev. 60:70-102

 Caulobacter crescentus como modelo de
diferenciación celular

Célula pululante: dispersión

- Sin replicación de DNA
- Sin división celular
- Movilidad

Célula sésil: reproducción

- Replicación del DNA
- División celular
- Adhesión a Superficies
Ciclo de vida de Caulobacter
Ciclo de vida pululante

Síntesis de
la prosteca
(Holdfast)

Ciclo de vida sésil

Programa del complejo de desarrollo en la
diferenciación de la célula pululante

Domian et al., 1996, Curr. Opin. Genet Develop. 6:538-544

Formación de Endospora como modelo de desarrollo
1. Bacterias formadoras de esporas (ej. Bacillus, Clostridium,
etc.)
2. Se forman en el interior de la célula, por tanto es una “endo”-
spora
3. Una fase dormante del ciclo de vida bacteriano
4. Usualmente inducida por algunas condiciones medio
ambientales como la estarvación
5. Altamente resistentes al estrés
- calor, frío, desecación, luz UV, radiación ionizante

esporas
 Estructura de la Endospora

Núcleo: constituido por 1 molécula de DNA (cromosoma),

ribosomas, RNAt, nucleótidos monofosfatos, proteínas de
reserva, bajo contenido de agua, ácido dipicolínico y Ca++.

Corteza: varias capas

de peptidoglucano

ácido dipicolínico,
Ca++

Exosporio: Envolturas: constituidas de proteína con

eventual. abundantes enlaces disulfuro y de gran
Cubierta de resistencia a sustancias químicas.
varias capas.
 Proceso de esporulación
•Controlado por Estado 0 Estado I Estado II
crecimiento normal Filamento axial
más de 200 Septación asimétrica

genes.
•Concluido el
Estado I, el Germinación
Estado VII
proceso es
Espora libre
irreversible.
Estado III
•La espora libre Englobamiento
puede sobrevivir Estado VI
por largos Lisis de la célula
madre
periodos.
•La germinación
requiere de la
activación y de
Estado V Estado IV
nutrientes. Síntesis de las Síntesis de la corteza
envolturas
 Esporulación en fotos

Germinación
Genes involucrados en la esporulación:

• > 100 genes involucrados en total

• genes spo, > 50 genes diferentes – expresados

durante la esporulación

• genes ger, genes involucrados

específicamente durante la germinación

• otros genes – un número de otros genes son

requeridos para la esporulación/germinación,
pero también son requeridos en otros momentos
Los diferentes genes spo son nombrados según el
estado de desarrollo en el cual los mutantes
manifiestan sus defectos

Errington, 1993, Microbiol. Rev. 57:1-33

B. subtilis toma una decisión de esporular
basada en muchos factores diferentes
Todo se reduce a la fosforilación del SpoOA
 SpoOA~P activa y reprime una serie de
genes diferentes que inician la esporulación

2 de los
blancos
primarios
son
factores 

Piggot, 1996, Curr. Opin. Genet. Develop.

 SpoOA~P inicia una cascada de factores 
- Muchos otros blancos regulatorios también. Los
’s son máquinas de expresión compartimiento-
específicas

A – vegetativo, H – esporulación temprana, F preespora, E

– célula madre, G, espora englobada, K – célula madre
terminal
Kroos et al. 1999, Mol. MIcrobiol. 31:1285-1294
 F and E están en ambos compartimientos
factores sigma específicos de célula madre
La activación de F
involucra anti factores 
y anti-anti factores 

Kroos et al. 1999, Mol. MIcrobiol.

31:1285-1294

Piggot, 1996, Curr. Opin. Genet. Develop.

La Activación de E involucra un procesamiento
proteolítico de una pre-proteína
El procesamiento de E
requiere de activación
por F en la preespora

Piggot, 1996, Curr. Opin. Genet. Develop. Kroos et al. 1999, Mol. MIcrobiol.
31:1285-1294
 Comunicación entrecruzada entre compartimentos
durante la esporulación
factores  célula factores 
madre - preespora-
específicos son específicos son
sintetizados inhibidos por
como pre-formas sistemas
que luego son anti/anti-anti
procesados factor 

Kroos et al. 1999, Mol. Microbiol. 31:1285-1294

Leer: Streips, U.N. & R.E. Yasbin,
Eds. 2002. Modern Microbial