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Lab 6

Este documento describe un procedimiento para extraer colesterol a partir de yema de huevo. El objetivo es obtener colesterol y aplicar la prueba de Lieberman-Burchard para identificarlo. Se utiliza cromatografía en columna sobre sílica gel para separar el colesterol de la mezcla de yema de huevo. Finalmente, se aplica la prueba de Lieberman-Burchard al colesterol aislado para confirmar su presencia.

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Este documento describe un procedimiento para extraer colesterol a partir de yema de huevo. El objetivo es obtener colesterol y aplicar la prueba de Lieberman-Burchard para identificarlo. Se utiliza cromatografía en columna sobre sílica gel para separar el colesterol de la mezcla de yema de huevo. Finalmente, se aplica la prueba de Lieberman-Burchard al colesterol aislado para confirmar su presencia.

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Laboratorio N°6

EXTRACCIÓN DE COLESTEROL A PARTIR DE YEMA DE


HUEVO

Profesores : Dra. Johana Gómez


Dr. Michael Mallea
Objetivos
• Obtener colesterol de la yema de huevo.
• Aplicar test de Lieberman-Burchard para el reconocimiento
del colesterol.
Introducción
 La membrana celular es la estructura
que separa el interior de todas las
células del ambiente exterior.

 Posee la característica de ser


selectivamente permeable a iones y
moléculas orgánicas, y a su vez controla
la entrada y salida de sustancias hacia y
desde la célula.

 Se encuentra involucrada en diversos


procesos tales como la adhesión celular,
conductividad de iones y señalamiento
celular.
Introducción

 Dentro de los esteroles que contienen las


membranas celulares se destaca el
colesterol, presente sólo en las células
animales.

 El colesterol tiene una gran importancia en


los procesos biológicos dado que es el
precursor en la biosíntesis de diverso
compuesto.

Para suplir la demanda del organismo, las células tienen la capacidad de producir el colesterol requerido
(alrededor de 1 g diario en un hombre adulto de 70 kg de peso) No obstante, también puede ser obtenido
de modo exógeno, a través de la ingesta de productos de origen animal
Introducción
Procedimiento.
1. En un balón de 250 ml agregar dos yemas de huevo
cocida y triturada con 2 g de K2CO3, 5 g de arena y 20 ml
de CH3OH. Disgregar bien esta mezcla con la ayuda de
una bagueta y añadir 40 ml de ciclohexano.

2. Llevar la mezcla a reflujo por 10 minutos y eliminar el


solvente en rotavapor.

3. Mientras se elimina el solvente, se prepara una columna


cromatográfica con 15 g de sílica gel y una capa de arena
en la parte superior, junto con una gradilla con 15 tubos
de ensayo y una mezcla de 30 ml de acetato de etilo y
170 ml de éter de petróleo.
Procedimiento.
4. Al balón de 250 ml que contiene la mezcla de huevo
evaporada, se le agrega 1 gramos de NaSO4 anhidro y
se le añaden 15 ml de CH2Cl2, se agita, y la solución se
vierte lentamente a la columna mediante un embudo
analítico provisto de papel filtro rápido.

5. Añada más de la mezcla EtOAc/éter de petróleo y


comience a recolectar las fracciones de 10 ml en los
tubos de ensayo (mitad tubo). Proceda a recolectar
14 fracciones. Usualmente el colesterol aparece en
las fracciones 8-13.

6. Elimine el solvente en rota evaporador utilizando un


balón de 100 ml. Reduzca el volumen
aproximadamente a 10 ml.
Procedimiento.

7. Test de Lieberman-Burchard para el


reconocimiento del colesterol.

Con aproximadamente 2 ml del colesterol, agregue 3


ml de cloroformo y añada 10 gotas de anhídrido
acético y 4 gotas de ácido sulfúrico concentrado.
Deje reposar tapado con papel aluminio unos 5
minutos y agite.

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