reacciones de aglutinación en
placa / reacciones febriles
Laboratorio de inmunología
práctica #4
integrantes:
● Armenta Moreno Eduardo
● Lopez Jimenez Cesar Dario
● Padilla Gurrola Julio Alejandro
Docente: Izamar Arredondo Beltrán
OBJETIVO
Conocer e identificar objetivamente las reacciones de aglutinación en placa
INTRODUCCIÓN
Los anticuerpos séricos producidos durante el caso de una enfermedad infecciosa,
pueden aglutinar a los microorganismos causantes de dichas enfermedades,
cuando están suspendidos en solución salina y bajo condiciones de temperatura
adecuada.
• Las pruebas de aglutinación directas son muy sensibles
• Estas reacciones febriles son un conjunto de reacciones de aglutinación directa
útiles en el diagnóstico de fiebres entéricas.
• En general se acepta que existen dos tipos de fiebres entéricas:
• A) Fiebres paratíficas: Formas menos severas y causadas por Salmonella
paratyphi tipos A, B y C
• B) Fiebre tifoidea: La forma más grave causada por Salmonella typhi.
• Los resultados serológicos (Ag-Ac) deben ser interpretados con gran cuidado,
por lo que existen muchos factores que deben ser considerados.
FUNDAMENTO
● Los antígenos bacterianos (Somáticos y/o flagelares) suspendidos en solución fisiológica,
interactúan con los anticuerpos específicamente inducidos durante el contacto de la
bacteria con el sistema inmunológico
● Esta reacción puede ocurrir in vivo o in vitro. En este caso se demostrara la presencia o
ausencia de aglutininas in vitro, lo cual será fácilmente detectado al observarse una
formación granular, para el caso de aglutinación somática, y grumos tenues, grandes,
para el caso de aglutinación flagelar
NOTA
● La aglutinación somática se caracteriza por ser fina y granular, de formación lenta y
difícilmente disgregable.
● La aglutinación flagelar es algodonosa, de formación rápida y fácilmente
disgregable
REACCION DE WIDAL
● Antigeno Tíifico “O”: Es un test basado en el principio de algutinacion antígeno–anticuerpo, donde se
determina la presencia de anticuerpos contra el antíigeno O y H de la Salmonella typhi para el
serodiagnostico de fiebre tifoidea, sin embargo debido a su falta de especificidad, debe ser
interpretado en el contexto clínico del paciente
La fiebre tifoidea se divide en cuatro fases:
● 1er semana: Durante esta fase sube lentamente la temperatura con una
bradicardia relativa, malestar general, dolor de cabeza y tos
● 2da semana: Se produce la postración llegando a la fiebre de los 40 C. Hay
bradicardia con un pulso dicroico.
● 3er semana: Aquí la fiebre tifoidea no se trata, las complicaciones son frecuentes;
hemorragias intestinales debidas a la congestión de las placas de peyer
● 4ta semana: La temperatura corporal se va estableciendo pero el debilitamiento
aún persiste
Cuadro clínico
● Requiere diagnóstico médico:
○ Los síntomas incluyen fiebre elevada, dolor de cabeza dolor de vientre, constipación o
diarrea
● Las personas pueden sufrir:
○ Áreas de dolor
○ Problemas gastrointestinales
○ Malestar general
○ Debilidad
El género Salmonella tiene una estructura con tres tipos
de antígeno
[Link]ígeno somático (O)
[Link]ígeno flagelar (H) o (d)
[Link]ígeno capsular o de envoltura (Vi) o (K)
Brucelosis
● La enfermedad se adquiere por
ingerir alimentos contaminados o
mantener un estrecho contacto
con el ganado
● Se transmite de animales a
personas, en su mayoria lacteos no
pasteurisados
Cuadro clínico
● Requiere diagnóstico médico
○ Los síntomas incluyen dolor de las articulaciones y músculos, fiebre, pérdida de peso y
fatiga. Algunas personas también presentan dolor en vientre y tos
● Las personas también pueden sufrir:
○ Dolor en abdomen o articulaciones
○ Fatiga, escalofríos, sudores nocturnos
○ Dolor de cabeza
○ Ganglios inflamados
Antígeno paratífico “A”
● La reacción de Widal (Paratifico A, Antígeno paratífico B, Antígeno
Tifico H, Antígeno tifico O), es método serológico que se utiliza
frecuentemente en diagnósticos de fiebre tifoidea y de otras
fiebres intestinales asociadas al género Salmonella
La rickettisiosis se puede dividir en 3 grandes grupos
● Grupo tifus: tifus epidémico, por
Rickettisa prowakezakii, transmitido por
piojos (Poulex ivitans) y tifo clásico
endémico, por Rickettsia typha por la
pulga
● Grupo de fiebre manchada: implica
más de 30 especies, transmitido
principalmente por ácaros y pulgas
(Fiebre manchada de las montañas
rocallosas)
● Tifus scrub: Tambien llamado tifo de
los matorrales, transmitido por ácaros
Cuadro clínico
● El periodo de incubación es de aproximadamente 7 dias
(varia de 2 a 14 dias)
● los síntomas en general, se caracterizan por:
○ fiebre
○ cefalea
○ rash (Erupciones cutáneas)
○ Dolor abdominal
○ Esplenomegalia
○ Hepatomegalia
○ Sintomas respiratorios como tos
Preparación para someterse a las pruebas
• Ayuno de 4 horas para evitar el aumento de
síntesis metabólica
• Evitar cualquier tipo de tensión
• No realizar actividad física (antes de la
muestra)
• Evitar la deshidratación o hidratación
excesiva
• No fumar antes de la prueba
Materiales
● Placa de vidrio con
excavaciones de 20 cm x 30
cm
● Antígenos Febriles
● Pipetas de Kahn de .2ml
● Aplicadores
● 1.0ml de suero
● Tubos de ensayo
1-
Se colocan 5 ml. De sangre
obtenida por punción venosa
en un tubo de ensayo limpio y
seco sin anticoagulantes.
2- Se deja coagular la sangre, se
desprende el coagulo, se
centrifuga la muestra a 2000
rmp. Durante 10 minutos a fin de
obtener suero, el cual se extrae y
se coloca en otro tubo seco.
3-
No debe calentarse de suero, ya que los
anticuerpos por detectar son termolábiles y
se destruyen.
Técnica
-A cada gota de suero añadirle una gota de
antígeno.
-Mezclar con un aplicador diferente para cada
PRUEBA
CUALITATIVA
PROCEDIMIENTO:
•
Se utiliza una placa de vidrio con excavaciones que se marcan adecuadamente con un lápiz graso según el
antígeno que se vaya a estudiar
• 1.- Con una pipeta serológica o.2 ml. se colocan en cada una de las excavaciones de la placa o.04 ml. del suero
problema (una gota).
2.- A cada excavación con suero se le agrega una gota de cada uno
de los antígenos febriles (un Ag. distinto para cada gota de suero).
Los antígenos deben estar a temperatura ambiente y
homogeneizados antes de utilizarlos (mezclarlos por
agitación)
• 3.- Mezclar en cada excavación el suero y el antígeno con un
aplicador de madera.
4.-Oscilar la placa durante 4 minutos y observar la
aglutinación macroscópica.
RESULTADOS INTERPRETACIÓN
' a).- Reacciones positivas
dan aparición de grumos.
Significa paciente con
infección actual, reciente o
pasada.
• b).- Aglutinación
negativa. Paciente en
estado muy temprano de la
infección o paciente no
infectado.
PRUEBA CUAntitativa
• PROCEDIMIENTO:
• Cuando el suero problema presenta reacciones positivas con algún antígeno, se repite la
técnica descrita empleando el antígeno correspondiente, frente a una serie de diluciones del
suero.
•1.- Con una pipeta graduada de o-1 ml. medir, respectivamente
en las excavaciones de la placa: 0.02, 0.01, 0.005 ml. de suero.
2.- Agregar una gota de Ag frente al cual se presentó la
aglutinación y proseguir del mismo modo, que para la prueba
cualitativa.
•3.- Anotar la cantidad mínima de suero (dilución) que
manifiesta aglutinación franca.
RESULTADOS
CONCLUSIÓN
Los análisis de pruebas febriles determinan la presencia de
anticuerpos contra varios antígenos de las bacterias anteriormente
descritas, una titulación de pruebas febriles es útil para
diagnosticar si hay una infección aguda o solo hay memoria
inmunológica. Sin embargo, estas pruebas no son totalmente
seguras ya que hay otros factores que pueden interferir en los
resultados y ocasionar falsos positivos o negativos.
FI
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