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Diagnóstico Molecular en Microbiología Clínica: PHD (C) - Juan Agapito Panta Universidad Peruana Cayetano Heredia

Este documento resume el desarrollo de la biología molecular y su aplicación en microbiología clínica. Explica brevemente los descubrimientos clave desde las leyes de Mendel hasta el proyecto del genoma humano. Luego describe cómo las técnicas de biología molecular como la PCR y la secuenciación de ADN se usan ahora para diagnosticar infecciones cuando los métodos de cultivo son problemáticos o cuando se necesita un diagnóstico rápido, como en la detección de resistencia a antibióticos.

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Robert Caballero Bardales
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Este documento resume el desarrollo de la biología molecular y su aplicación en microbiología clínica. Explica brevemente los descubrimientos clave desde las leyes de Mendel hasta el proyecto del genoma humano. Luego describe cómo las técnicas de biología molecular como la PCR y la secuenciación de ADN se usan ahora para diagnosticar infecciones cuando los métodos de cultivo son problemáticos o cuando se necesita un diagnóstico rápido, como en la detección de resistencia a antibióticos.

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Diagnóstico molecular en

microbiología clínica

PhD (c). Juan Agapito Panta


Universidad Peruana Cayetano Heredia
Desarrollo de la Biología Molecular

1865 Gregor Mendel, Leyes de la Herencia

1866 Johann Miescher, Purificacion del DNA

1953 Watson and Crick, Estructura del DNA

1970 Tecnología del DNA recombinante

1977 Mutacion de la anemia falciforme

1980 In Vitro Amplificacion del DNA (PCR)

1995 Projecto del Genoma Humano


“A veces encontramos situaciones
especiales …..”
• Mutaciones: Variación en
fenotipos
• Patógenos emergentes y
reemergentes
• Cepas inertes
fenotipicamente
• MO de crecimiento lento
o no cultivables
• MO no viables
PCR EN BACTERIOLOGIA

Dificultad en el diagnóstico, urgencia


en el diagnóstico

Automatización Extracción de ADN

Métodos manuales

PCR PCR en Tiempo Real


El esquema de este “dogma” ha sido encontrado repetidamente
y se considera una regla general (salvo en los retrovirus)

Proteína
En 1983 Kary Mullis da a conocer esta técnica y en 1993 recibió el Premio Nobel de Química por este descubrimiento

Es un proceso cíclico
(cada ciclo consta de 3 pasos)

94ºC desnaturalización (separación


de las dos hebras de ADN)

50ºC Anillamiento de "cebadores"

72ºC copia de cada una de las


hebras de ADN por la ADN
polimerasa

35 ciclos 236= 68 billones de copias


1

Plásmido
Plásmidos
gen de resistencia
a la ampicilina

2 3

Extremos cohesivos

Molécula de ADN recombinante


Plásmido
CULTIVOS
BACTERIANOS
Lo emergente………Diagnóstico molecular

Técnicas
• PCR
PCR-secuenciación
• DNA microarray

Aplicaciones al
diagnóstico

• Etiológico
• Resistencia
ACTTTGTCCACGGCCTAAGCGTTTTTTGCCC
Secuenciación AGTGACTTTGTCCAAC
GTCCAACAGTTACCAAGTGACTTTGTCCAC TTTTGCCC
de genomas AGTGACTTTGTCCA ACGGCCTAAGCGTTTTTTTT

ALINEAMIENTO DE TODAS LAS SECUENCIAS Y RECONSTRUCCIÓN DEL CROMOSOMA


Resistencia Antibiótica
Un problema
Especialmente en hospitales

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