HEMATOLOGÍ
A FORENSE
Lic. Axel Peña Bernal
Es la aplicación criminalística de la Morfología, Serología y
Bioquímica de la sangre.
La Hematología Forense abarca todos los aspectos, tanto
reconstructor, como identificador, en el terreno no solo
policial, penal, sino que, además, el civil, por los problemas
relacionados con la filiación.
Hematología Identificadora
Es la rama de la hematología forense que se ocupa de
identificar sangre. Los procedimientos empleados
están destinados a investigar si es sangre, a qué especie
pertenece y en lo posible su individualización. Las
muestras sospechosas de líquido hemático, puede ser
fresca o antigua, sólida o líquida, pura o mezclada o
aparecer en diferentes soportes. Con la muestra
sospechosa se procede en el laboratorio a verificar,
mediante pruebas de orientación y de certidumbre, la
naturaleza de una mancha.
Hematología Reconstructora.
La hematología reconstructora se ocupa de la determinación
e interpretación del mecanismo de producción de las
máculas. Cada mecanismo de producción tiene imágenes
sanguíneas propias que se ven alteradas cualquiera sea el
factor que las produce por las características propias del
soporte.
A través del estudio meticuloso de las imágenes
(morfología de las manchas) se podrá obtener una
información precisa de la forma en que se han
producido los hechos. Se podrá determinar
posición de la víctima y del agresor, los
movimientos realizados en el sitio de suceso,
características del traumatismo y violencia
empleada, intensidad del traumatismo, arma
empleada, movimientos ejecutados con ella,
incluso señalar aproximadamente o descartar al
autor del delito.
Son cuatro los puntos cardinales que encierra la
problemática de la hematología forense:
1.¿Una mancha es o no de sangre?
2.En caso de serlo, ¿cuál es su origen: humano o animal?
3.¿A qué grupo sanguíneo pertenece?
4.¿De qué persona es?
La sangre es un tejido líquido que
circula al través del cuerpo. Es la
encargada de transportar el oxígeno a
todo el organismo y de recoger el
bióxido de carbono producido por los
tejidos, para transportarlo al pulmón y
ahí cambiarlo nuevamente por oxígeno.
Constituye aproximadamente el 8% del
peso corporal.
Conformación de la
sangre.
• Partículas sólidas.
• Fracción líquida o plasma.
• Enzimas y proteínas.
Partículas sólidas
a) Eritrocitos, células sin núcleo que se presentan en cantidad de 4.5 a 5
millones por milímetro cúbico. En su membrana o estroma, se encuentran los
antígenos de los grupos sanguíneos, fosfolípidos, enzimas, etc., y en Su
interior contienen la hemoglobina así como sodio, potasio y otras sustancias.
b) Leucocitos o glóbulos blancas, en proporción de 5 a IO mil por milímetro
cúbico, están considerados como medios de defensa del organismo. Producen
anticuerpos de varios tipos.
c) Plaquetas o trombocitos, en cantidad de 200 a 400 mil por milímetro cúbico,
participan en la coagulación de la sangre.
La fracción líquida o Enzimas y proteínas que
plasma contiene se utilizan también con
proteínas y sales fines forenses para tratar
inorgánicas, entre las de individualizar una
proteínas: precipitinas, muestra de sangre por su
fibrinógeno, albúminas y frecuencia en la
globulinas. población.
Las partículas sólidas
constituyen alrededor del 45%
de la sangre, el restante 55%
está representado por la
fracción líquida.
La sangre representa
aproximadamente el 7% del
peso de un cuerpo humano
promedio. Se considera que un
adulto tiene un volumen de
sangre de aproximadamente de
cinco litros.
Recolección y embalaje de
las muestras de sangre
• Fijación mediante la descripción
escrita, planimetría y fotografía.
• En caso de sangre líquida, deberá
tomarse con ayuda de una pipeta
Pasteur o un gotero y depositarla
en un tubo de ensayo limpio y
seco, al que deberá añadirse 1 ml.
de solución salina estéril por cada
5 ml. de sangre.
• En caso de coágulos, se tomarán estos con el
extremo de un aplicador de madera y se
colocarán en el interior de un tubo de
ensayo.
• En caso de manchas de sangre seca en
objetos sólidos, se levantarán con pequeños
fragmentos de tela blanca y limpia sin
apresto, o hisopos estériles, humedecidos
con solución salina (0.85%), se colocará en
un tubo de ensayo. Con otro fragmento de
tela, preparado de la misma forma, se
tomará una muestra de control de una zona
del soporte no manchada con sangre.
• Las manchas sobre tela, se recortarán
porciones representativas de la
muestra, así como un trozo de la
misma tela que no se encuentre
maculado con sangre, para control.
• Si se trata de manchas sobre
vegetales, estos se recortarán y se
colocarán en el interior de un sobre.
Así como una de control sin
maculación.
• La sangre que se encuentre sobre tierra o arena
deberá recolectarse tomando un trozo completo del
soporte. También se tomará una muestra de tierra sin
sangre y se empacará por separado.
• Si la muestra problema se encontrara impregnada en
cabellos, éstos se tomarán con pinzas.
• Manchas de sangre sobre el cuerpo de la víctima, se
levantarán con pequeños fragmentos de tela blanca y limpia
sin apresto, o hisopos estériles, humedecidos con solución
salina (0.85%), se colocará en un tubo de ensayo. Con otro
fragmento de tela, preparado de la misma forma, se tomará
una muestra de control de una zona del soporte no manchada
con sangre. Además se tomará sangre del cadáver, con el fin
de compararla con la de las manchas.
METODOLOGÍA GENERAL
PARA LA INVESTIGACIÓN
CRIMINALÍSTICA DE LAS
MANCHAS DE SANGRE
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El estudio forense de manchas de
sangre plantea dos problemas:
1. Desde el punto de vista de la
Criminalística de campo, con fines
reconstructivos de un hecho
delictuoso y;
2. Identificativo, que resuelve la
inmunohematología Forense.
A) Para resolver el primero, se atiende a
la morfología de las manchas en el sitio
del ilícito, indicándonos los
movimientos de la víctima y/o del
victimario:
Al llegar al lugar de los hechos, deberá preservarse para
conservar su originalidad, se fijará, siguiendo la
metodología criminalística rutinaria, para poder,
efectuar una interpretación conecta de la dinámica del
hecho; fijación que deberá seguir los siguientes pasos:
1. Tomar las fotografías necesarias, desde diferentes
ángulos.
2. Describir la escena con claridad y sencillez, tomando
medidas que se relacionarán con las paredes o puertas,
nunca con objetos movibles.
3. Dibujar un croquis sencillo.
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Las manchas circulares con bordes nítidos,
son producidas por un cuerpo estático y a
poca altura; a medida que ésta aumenta, la
mancha no pierde su redondez, pero si
empieza a presentar bordes estrellados, con
la formación de líneas radiales, que a mayor
distancia comienzan a alejarse de la periferia,
produciéndose la proyección de las mismas.
Las maculaciones en forma de gota alargada,
corresponden a un cuerpo en movimiento y
el vértice o ángulo de la gota, indica la
dirección en que caminaba la víctima.
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• Las manchas grandes y de forma irregular, generalmente con
un espacio interior en blanco, indican el sitio final en que
estuvo el cuerpo del cual manaba.
• Las maculaciones por arrastramiento, aparecen irregulares.
• Las manchas por proyección, se observan con numerosas
salpicaduras y a veces seguidas de escurrimiento.
• En las manchas por contacto y/o apoyo, generalmente
irregulares, a veces se suelen encontrar fragmentos de
huellas dactilares; o bien de manos o pies.
• Las manchas lavadas muestran generalmente forma
irregular; si el lugar es factible de obscurecerse, se
recomienda utilizar un rociado con luminol para hacerlas
visibles y poderlas fotografiar.
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B) La metodología criminalística utilizada en la identificación de la sangre, es acorde
al método científico, esto es, la comprobación de la hipótesis de trabajo, mediante la
experimentación que en este caso se logra al través de las siguientes técnicas:
1. TÉCNICAS DE ORIENTACIÓN
a) Reacción de la bencidina. 3. DETERMINACIÓN DEL GRUPO
b) Reacción de la fenolftaleina reducida. SANGUÍNEO
c) Reacción de la leuco malaquita verde. a) En sangre fresca.
d) Técnicas espectroscópicas. b) En manchas de sangre seca.
e) Técnica del Luminol, para detectar
manchas lavadas y/o decoloradas. 4. DETERMINACIÓN DE ENZIMAS Y
PROTEÍNAS
2. TÉCNICAS DE CONFIRMACIÓN.
a) Cristales de hemina. 5. TÉCNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR
b) Cristales de hemocromógeno. APLICADAS A LA IDENTIFICACIÓN
FORENSE. (ADN).
3. TÉCNICAS PARA DETERMINAR EL
ORIGEN DE LA SANGRE.
a) Reacción de las precipitinas en capilar.
b) Inrnunoelectroforesis cruzadas. Esta foto de Autor desconocido está bajo licencia CC BY-NC-ND
Técnica de
Bencidina o de
Adler
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FUNDAMENTO QUÍMICO:
El grupo Hem de la hemoglobina, posee una actividad enzimática que permite
una reacción de oxidación que descompone el peróxido de hidrógeno y otros
peróxidos, mientras no estén presents otras sustancias orgánicas oxidantes, o
sea, el peróxido de hidrógeno se descompone en aguas y oxígeno que al
reaccionar con la Bencidina la oxidarán generando un color azul.
Un resultado negative excluye la presencia de sangre, pero uno positive
requeriría realizar pruebas de labortorio para confirmer la presencia de
sangre.
Falsos positivos:
• PLANTAS: Manzana, albaricoque , espárragos, frijol, acelgas,
betabel, zarzamora, alcachofa, papa, nabo (rábano blanco).
• Productos biológico: Medula ósea, leucocitos, Tejidos
cerebral, médula espinal, Intestino, Hígado, Pulmón, Saliva,
Moco, pus.
• Otras sustancias: Herrubre, formol, Estiércol, sulfato de cobre,
dicromatos (sales de ácido crómico), permanganato de
potasio, Blanqueadores.
Preparación del reactivo:
a) Solución de Bencidina:
a) 0.25 gr. de Bencidina disueltos en 175 ml. de etanol, se añade 5 a 10
gotas de ácido acético glacial. Su resguardo es en frasco ámbar y en
refrigeración.
b) Solución de peróxido de hidrógeno al 3% en frasco ámbar.
Se humedece un hisopo con agua destilada y se frota sobre la maculación, se
añade a la muestra 1 o 2 gotas de solución de Bencidina, si da alguna coloración
se descarta la solución de bencidina ya que no debe haber reacción alguna;
posteriormente se aplica la misma cantidad de gotas de peróxido de hidrógeno
al 3%.
Leuco –
Malaquita Verde
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Fundamento químico:
Se basa en una reacción de oxidación – reducción. El prefijo
“Leuco” se refiere a la forma reducida incolora, es
preparada por la reducción de la malaquita verde; la forma
leuco puede ser oxidada por la acción de las peroxidasas
para dar la forma oxidada verde.
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PREPARACIÓN
• Mezcla sólida: 0.32 grs de perborato de sodio y 0.10 gramos
de malaquita verde, mezclado y se resguarda en un frasco
ámbar (duración de un año en óptimas condiciones).
• Solvente: 3.3 ml de agua destilada con 6.6 ml. De ácido
acético glacial.
• Reactivo de trabajo: se disuelve la totalidad de la mezcla
sólida en el solvente, no debe presentar coloración
PROCEDIMIENTO:
La maculación es levantada con un hisopo humedecido con unas gotas de
agua destilada.
Se le agregan unas gotas 2 a 4 del reactivo recientemente preparado.
En caso positivo se observará una coloración verde.
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Pruebas de
orientación
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LUMINOL
El luminol es el 3 amino-ftalhidracina y para su
preparación se necesitan los siguientes materiales:
• Luminol
• (NaOH) Hidróxido de sodio al 5%
• (H2O2) Peróxido de hidrógeno al 3%
• Agua destilada
Preparación:
• Añadir 2 ml. De peróxido de hidrógeno al 3% en 50
ml de agua destilada.
• Mezclar 0.05 g de luminol en 10 ml de hidróxido de
sodio al 5%
• Mezclar ambos y enrasar a 100 ml.
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Opción 2; Materiales:
• 0.50 g de luminol
• 3.5 g. de perborato de sodio
• 25 g de carbonato de sodio
• 500 ml. de agua destilada
PREPARACIÓN:
• Disolver el luminol y el carbonato de sodio en
250 ml de agua destilada.
• Disolver el perborate de sodio en 250 ml de
agua destilada.
• Combinar ambas soluciones y aplicar.
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PRUEBA DE PERÓXIDO
También conocido como Van Der Velde o Scönbein. La cual
consiste en agregar unas gotas de agua oxigenada de 20
volúmenes y observar la producción de burbujeo. Cuando el agua
oxigenada entra en contacto con la mancha de sangre da lugar a la
aparición de un burbujeo blanquecino.
Se puede confundir con sales minerales como sales de cobre,
níquel, cobalto, hierro, pus de heridas infectadas, secreción nasal,
manchas de origen vegetal, etc.
Pruebas de
confirmación
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CRISTALES DE TEICHMANN:
Técnica propuesta por el polaco Teichmann en 1853. Esta
prueba da buenos resultados para manchas secas y antiguas
y con muy pequeña cantidad de sangre.
MATERIALES:
• Cloruro de sodio - 0.1 gr.
• Bromuro de potasio - 0.1 gr.
• Ioduro de potasio - 0.1 gr.
• Ácido acético c.b.p. - 100 mi.
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PROCEDIMIENTO:
1. Colocar la muestra problema en el centro de
una laminilla de vidrio y poner encima de ella
un cubreobjetos.
2. Deslizar entre lámina y laminilla, por
capilaridad, unas gotas del reactivo de
Teichmann.
3. Calentar lentamente y a baja temperatura la
laminilla hasta evaporación.
4. Dejar enfriar y observar al microscopio. En
caso positivo se observarán cristales
romboidales de color café obscuro.
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CRISTALES DE TAKAYAMA
Cristales de Piridinahemocromógeno de color rojo o
rosado intenso, el reactivo consiste en una mezcla de
piridina, solución saturada de glucosa y solución de
hidróxido de sodio.
MATERIALES:
Una parte de solución saturada de glucosa.
Una parte de solución de hidróxido de sodio al 10 %
Una parte de piridina. (PM: 79.1 D= 048).
Dos partes de agua destilada.
Una vez preparada la mezcla se guarda en frasco
ámbar. La solución deberá ser preparada
inmediatamente antes de utilizarse
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PROCEDIMIENTO
a) Colocar una pequeña cantidad de muestra problema entre una
laminilla portaobjetos y un cubreobjetos.
b) Deslizar por capilaridad unas gotas del reactivo entre lámina y
laminilla.
c) Calentar la laminilla a baja temperatura durante 30 segundos.
d) Observar al microscopio. En caso positivo se observarán
cristales romboidales de color rosa alrededor de la muestra.
PRESENCIA DE ESTRUCTURAS SANGUÍNEAS
Prueba de certeza que consiste en la observación de
glóbulos rojos y glóbulos blancos o leucocitos, que
normalmente se observan en sangre fresca.
Determinación de
origen humano
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DIFERENCIAS MORFOLÓGICAS DE LAS CÉLULAS
SANGUÍNEAS
Cuando la sangre es fresca, se observan sus elementos en
preparaciones con TINCIÓN DE GIEMSA o TINCIÓN DE
WRIGHT. Se pondrá en evidencia la presencia de glóbulos
rojos y leucocitos en la muestra, así como el tamaño y la
morfología de los mismos que difieren entre ciertas
especies.
PRECIPITINAS
Se usa anticuerpos poli específicos contra proteína humana del
suero sanguíneo, por medio de la observación de la precipitación
de las proteínas del suero sanguíneo humano. Para esto se utiliza
el suero Antihumano que al unirse a la sangre humana se
visualiza la obtención de un precipitado (halo blanquecino en la
interface). Para saber distinguir sangre de diferentes animales se
utilizan otros sueros específicos (antivacuno, antiequino, etc.).
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REACTIVOS:
1. Antisuero humano precipitante.
2. Solución salina fisiológica.
PROCEDIMIENTO:
3. Cortar un pequeño fragmento de la mancha y extraer en un tubo de ensayo
con unas gotas de solución salina fisiológica; normalmente se requieren de 1
a 2 minutos. Si la solución está turbia es conveniente centrifugar y utilizar el
sobrenadante.
4. Dos gotas del extracto diluido se colocan en un tubo capilar. Una cantidad
igual de antisuero se absorbe el mismo capilar de manera que quede abajo
del extracto de la muestra. La observación se hace con luz indirecta y sobre
fondo obscuro, la aparición de un anillo de precipitación en la interfase de
los dos líquidos indica reacción positiva.
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TEST RSID-BLOOD (RAPID STAIN IDENTIFICATION BLOOD):
Este Test Inmunocromatográfico usa dos anticuerpos contra
una proteína de la membrana de los eritrocitos. Es un eficaz y
útil método para la detección de sangre humana en muestras
forenses, y ofrece una mejor detección de sangre en
comparación con otros métodos.
TEST HEXAGON OBTI: Es un test inmunocromatográfico,
complemento de BLUESTAR FORENSIC. Esta rápida prueba
visual permite de presumir que una mancha de sangre es de
origen humano ya que usa anticuerpos contra la hemoglobina
humana.
MÉTODOS ELECTROFORÉTICOS: Por diferencias
estructurales de la hemoglobina y pruebas de
inmunoelectrodifusión.
TÉCNICA DE INMUNOELECTROFORESIS CRUZADA PARA
IDENTIFICAR SANGRE HUMANA: Esta técnica
inmunoquímica se basa en las reacciones que se efectúan
entre un antígeno y un anticuerpo durante una
electroforesis.
Clasificación e
interpretación de los
patrones de sangre
GOTA SIMPLE (CLASE 1)
Se producen cuando se ejerce la acción de la gravedad sobre
las gotas de sangre que caen de forma vertical. Se
caracteriza por ser casi perfecta ya que sus bordes son
regulares.
Se puede encontrar en agresiones por cualquier tipo de
arma.
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GOTAS CON BORDES (CLASE 2)
Son gotas con bordes irregulares. Las manchas de clase 2 no
caen únicamente por la acción de la gravedad, sino que se
necesita una fuerza exterior.
Se presentan por uso de arma corto punzante a distancias medias
y largas y por aplastamiento con arma contundente e impacto de
arma de fuego a larga distancia.
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MANCHAS DE ALTA VELOCIDAD (CLASE 3)
Son patrones de alta velocidad y sobre ellas actúa la fuerza de gravedad.
Es una gota alargada que cuenta con cabeza y cola, siendo la primera la
parte más gruesa de la gota y la segunda una sección más alargada.
Brindan información más allá del tipo de arma pues debido a su
morfología compuesta por cabeza y cola se podrá identificar el punto de
origen del impacto, siendo necesaria la existencia de más de tres
manchas de tipo 3, pues será el punto de encuentro de estas manchas, el
que va a indicar el lugar de origen del impacto.
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Las manchas clase 3 se producen por emplear arma de fuego a
contacto, corta y larga distancia, arma corto punzante en media
y larga distancias, objeto punzante empleado a corta distancia y
finalmente cuando se produce un aplastamiento por un
elemento contundente.
CHARCOS DE SANGRE (CLASE 4):
Son Visibles en acontecimientos en donde se empleen armas
constante, punzantes, corto punzante, contundentes y de
fuego empleadas a contacto, corta, media y larga distancia
Patrón de proyección
Este tipo de patrón se produce cuando la sangre es proyectada
en forma violenta sobre el soporte. Si la mancha de sangre
proyectada al soporte se presenta en forma de imágenes
aisladas y de disposición irregular, constituyen las salpicaduras.
El patrón de proyección se puede encontrar en paredes,
columna o superficies verticales del lugar de los hechos.
Se da con el uso armas punzantes, cortantes, corto
punzantes utilizadas a corta distancia o en el caso de un ama
de fuego accionada a contacto, media y larga distancia,
además de los aplastamientos con arma contundente Esta foto de Autor desconocido está bajo licencia CC BY-SA
Patrón de escurrimiento
Este patrón se da cuando la sangre se desliza por el soporte
impermeable, desde la fuente productora.
El patrón de escurrimiento se evidencia cuando una
agresión se da por el choque de la víctima contra un
elemento contundente
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Preparación del reactivo:
a) Solución de Bencidina:
a) 0.25 gr. de Bencidina disueltos en 175 ml. de etanol, se añade 5 a 10
gotas de ácido acético glacial. Su resguardo es en frasco ámbar y en
refrigeración.
b) Solución de peróxido de hidrógeno al 3% en frasco ámbar.
Se humedece un hisopo con agua destilada y se frota sobre la maculación, se
añade a la muestra 1 o 2 gotas de solución de Bencidina, si da alguna coloración
se descarta la solución de bencidina ya que no debe haber reacción alguna;
posteriormente se aplica la misma cantidad de gotas de peróxido de hidrógeno
al 3%.
Leuco –
Malaquita Verde
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