Microscopía

Departamento de Biología Celular

Práctica 1
 Objetivo:
Familiarizarse sobre los diversos sistemas y
partes que constituyen al microscopio y la
función de los mismos.
¿Qué es el microscopio?

“La palabra microscopio proviene de la combinación de dos

palabras griegas: micrós (pequeño) y scopéo (mirar)”

Instrumento óptico que permite observar en un tamaño

aumentado la imagen de los objetos.
ANTECEDENTES DE MICROSCOPÍA

• Nimrud.- 750 a. C- primera lente

• Antigua roma y en China
• Zacharias Janssen.- 1590- 1595.
MICROSCOPIO DE LEEUWENHOEK

Eritrocitos de humano
MICROSCOPIO DE ROBERT HOOKE

Corcho
 • Capacidad de un sistema óptico para separar detalles. Depende de los objetivos

• Distancia mínima que debe existir entre dos puntos para que aparezcan individualizados .

• Capacidad que tiene una lente para aumentar el tamaño de la imagen del objetivo observado.

• Es aquella que se forma cuando tras pasar por el sistema óptico, los rayos de luz son
convergentes.
• Esta imagen no la podemos percibir por la retina, pero pueden registrarse al ser recogidos sobre
una pantalla o una placa fotográfica.

• Se forma por rayos divergentes.

• Consiste en que no ésta allí donde se percibe, se forma tan solo sobre la retina y no por fuera del
ojo en el sitio donde se ve.
 Factores determinantes de la
imagen

• Relación entre velocidad de la luz con el aire y la velocidad en el medio transparente utilizado
• Aire: 1, Agua: 1.33, Aceite: 1.51, vidrio: 1.52

• Capacidad del objetivo de captar rayos refractados cuando atraviesan un medio

• >Ángulo del lente = >mayor rayos de luz

• Capacidad del objetivo para captar rayos refractados por estructuras finas de la muestra
• >Apertura = > capacidad de detalles finos

• Capacidad para ampliar la imagen

• Relación entre el tamaño de la imagen y el objeto
 Poder de
Poder de resolución
resolución bajo
alto

Límite de Límite de
resolución resolución
<1mm <1mm
PODER DE RESOLUCIÓN Y LÍMITE
DE RESOLUCIÓN

Microscopía Optica Próstata. Hematoxilina-Eosina x100  Glándula tubulo-acinar prostática

revestida por un epitelio columnar de núcleos basales y citoplasma secretor claro.  Estas
glándulas están rodeadas por un estroma fibromuscular característico
 UNIDADES

Metro 1m
Milímetro 1mm
Micra o micrómetro 1µ = 10-6
Nanómetro o milimícra 1nm = 10-9
Amstroms 1 Å = 10-10
El  microscopio de luz, compuesto u óptico está integrado por 4 sistemas, los
cuales son:

01 Sistema mecánico

02 Sistema óptico

Sistema de
03 iluminación

04 Sistema electrico
 Sistema mecánico
El sistema mecánico es el esqueleto o armazón del microscopio, el cual
proporciona soporte y estabilidad al equipo.

• Donde se insertan los oculares, puede contener

Cabeza o cabezal: en su interior un prisma que divide la imagen en
dos, una para cada ocular.

• Forma cilíndrica,  en su parte superior sostiene

a la lente o lentes oculares y en la parte inferior
El tubo de se encuentra el sistema de lentes objetivos.
microscopio: • Mantiene la distancia debida entre el objetivo y
el ocular evitando el paso de luz extraña al
sistema óptico

• Pieza giratoria donde se montan los objetivos

• Permite cambiar los mismos con movimientos de
Revólver: rotación sin necesidad de removerlos totalmente
del microscopio
 Oculares

Tubos del ocular

Cabeza o cabezal

Revolver
Objetivos

Brazo, asa o columnela

Pinzas
Platina
Condensador
Tornillo macrométrico
Diafragma
Portafiltro Tornillo micrométrico

Lámpara

Pie o base
 • Pieza metálica cuadrada o circular, con un orificio central sobre el que se

Platina:
colocan las preparaciones a observar y por el que atraviesa el rayo luminoso.
• Puede ser fija o estar provista de tornillos de desplazamiento que nos
permiten centrar la preparación o buscar diferentes campos de observación.
• Sostiene a la preparación en un plano ortogonal al eje óptico del sistema.

Base o Pie: • Base sobre la que descansa el aparato y le da estabilidad.

Brazo o • Parte que sostiene el tubo y su mecanismo de desplazamiento vertical formado

por los tornillos macrométrico y micrométrico.
• Junto con la base se le conoce con el nombre de estativo y es el soporte

columna: mecánico de todo el aparato

• Está diseñado para darle estabilidad mecánica al microscopio
 Oculares
Tubos del ocular
Cabeza o cabezal

Revólver
Objetivos

Carro
Pinzas
Platina

Tornillo micrométrico
Tornillo macrométrico Control axial

Condensador
Diafragma

Lámpara

Cable
Pie o base

Reostato
Tornillo macrométrico o de enfoque aproximado:
• Mueve rápidamente al conjunto conformado por la platina y el condensador para ajustar rápida y
aproximadamente la distancia entre el objetivo y la preparación
• La carrera total de este tornillo es de alrededor de 3 ó 4 cm.

Tornillo micrométrico o de enfoque de precisión:

• Mueve al conjunto platina y condensador muy lentamente para ajustar de manera precisa la distancia requerida
• La carrera total dada por este tornillo es de tan sólo 1 ó 2 mm.

Diafragma de campo luminoso:

• Determina el diámetro de la región iluminada sobre la preparación.

Diafragma de abertura:
• Bloquea aquellos rayos de luz provenientes de zonas periféricas del filamento de la lámpara que degradan la
calidad de la imagen
• Determina la inclinación máxima de los rayos que llegan a la preparación.

Pinzas:
• Colocadas sobre la platina, pueden tener movimientos en cruz (fijan o mueven la preparación).
Tornillo macrométrico

Condensador

Diafragma

Portafiltros

Tornillo piñón
Tornillo micrométrico
Tornillos
comando
axial

Tornillo macrométrico

Tornillo micrométrico
Porta filtros:
• Permite interponer filtros adicionales entre el objetivo y el
condensador, por debajo de la platina.
• Existen filtros rojos, amarillos, verdes y azules

Hendidura para filtros:

• En ocasiones es necesario agregar algunos componentes ópticos entre
el objetivo y el ocular tales como filtros polarizadores, coloreados,
neutros o aún lentes adicionales como el de Bertrand, esta hendidura
permite hacerlo sin remover todas las demás partes.
 Sistema óptico:
Conjunto de lentes responsables del poder del aumento y resolución
Formado por 2 sistemas de lentes: Oculares y Objetivos.

Los lentes oculares:

• Montados en la parte superior del tubo

del microscopio.
• Su nombre se debe a la cercanía de la
pieza con el ojo del observador y sus
poderes de aumento van desde 4x hasta
20x.
Lentes objetivos:
•Se encuentran en el revólver y quedan cerca del objeto a observar.
•Hay 2 tipos de objetivos: Objetivos secos y de Inmersión
• Objetivos secos se utilizan sin colocar alguna sustancia entre ellos y la preparación,
únicamente el aire.
• Proporcionan poco aumento que va desde 10x, 20x, 40x hasta incluso 60x
• Encontramos 10x o también llamado seco débil y 40x o seco fuerte.
• Los objetivos de inmersión se utilizan colocando una sustancia entre ellos y la
preparación, por lo general, se emplea el aceite de cedro.
• Proporcionan un mayor aumento y definición
• 100x; los podemos identificar ya que son los más largos y traen grabada en el
exterior la palabra oil (aceite)
 Sistema de iluminación

Elementos que producen las radiaciones y transmiten, reflejan y regulan tanto la

intensidad como la cantidad de rayos que van a incidir sobre el espécimen.

Fuente de iluminación:
• Consta generalmente de una lámpara incandescente de tungsteno.
• Emite rayos de luz dirigidos hacia la muestra

Espejo:
• Es necesario si la fuente de iluminación no está dentro del
microscopio tiene una cara plana y una es cóncava.

Condensador de luz:
• Formado por un sistema de lentes cuya función es captar los rayos
luminosos y dirigirlos hacia la preparación que se va a enfocar.

Diafragma:
• Abertura que controla la cantidad de luz que debe pasar por el
condensador.
 Carro Platina

Pinzas
Condensador
Diafragma
Portafiltros
Tornillo macrométrico

Lámpara
Tornillo piñón
Tornillo micrométrico
 Sistema eléctrico:
Constituido por:
-Cable alimentador de energía
-Perilla de control de intensidad🡪 reóstato
 Tipos de
microscopios
MICROSCOPIO SIMPLE
MICROSCOPIO ÓPTICO, FOTÓNICO
O DE LUZ DE CAMPO CLARO
Clasificación del
microscopio óptico
según el número de oculares

 Monocular

 Binocular

 Tetraocular

Multicabezal
 Microscopio Estereoscópico

Es binocular compuesto por un

par de microscopios de baja
potencia colocados de forma
que convergen en el
espécimen, con aumentos de
4 a 40 veces.
 Microscopio de luz polarizada

Posee entre el recorrido de los rayos

luminosos dos filtros o prismas polarizadores.
[Link] polarizador: Localizado después de la fuente luminosa y
antes del objeto, es el filtro encargado de polarizar la luz.
2. Filtro analizador: Localizado posterior al objeto.

Estructuras birrefrigentes y
monorrefrigentes
 Microscopio de campo oscuro

Aprovecha un
conjunto de rayos - Una apertura numérica
luminosos oblicuos Requiere del condensador mayor
que inicialmente no que la apertura numérica
entran a la lente del objetivo.
frontal del objetivo,
observándose el Facilitando
que
campo microscopio
totalmente oscuro.
Los rayos luminosos directos
sean impedidos de entrar y solo
penetren y emerjan de él, los
rayos periféricos que al
refractarse se hacen oblicuos.
MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO
 Microscopio invertido

La fuente de luz está ubicada por encima de la platina y el

principio de funcionamiento y formación de la imagen es el
mismo que el del microscopio tradicional.
 Microscopio de fluorescencia
Se utiliza para visualizar muestras con efecto de fluorescencia, que tiene la capacidad de
absorber luz de longitud de onda corta (ultravioleta) y emitir luz con mayor longitud de onda
(luz visible).

Colorantes fluorescentes:
a)Fluoresceína, que emite fluorescencia
verde.
b)b) Rodamina, que emite fluorescencia roja.
Microscopio de luz ultravioleta
Trabaja con otra longitud de onda y de esto depende su resolución
No son visibles directamente al ojo humano
Lentes diseñados con lentes de cuarzo o fluorita
 Microscopio confocal

Iluminación de la muestra con un delgado rayo laser

concentrado que controla la profundidad de campo y un
pinole para eliminar luz desenfocada

Se pueden obtener modelos en 3D si se toman suficientes

imágenes
 Microscopio Electrónico

Transmisión

Forma una imagen a partir de los electrones que se

transmiten a través de la muestra que está siendo
examinada. Puede dar un aumento de 100 000 veces,

Barrido

Produce imágenes a partir de los electrones reflejados por la

superficie externa de la muestra (en lugar de los electrones
transmitidos a través de la misma) Puede dar un aumento de
10 000 veces.
¿Que tipo de microscopio nos da
esta imagen?
¿Que tipo de microscopio nos da
esta imagen?
 Microscopio efecto túnel

Instrumento que permite visualizar regiones de

alta o baja densidad electrónica superficial, y de
ahí inferir la posición de átomos individuales o
moléculas en la superficie de una red.

Si un voltaje se aplica a la pequeña separación entre la punta y la muestra, los electrones pueden tunelear, o
“brincar”, entre la punta y la superficie, creando una corriente eléctrica que se capta y se envía a un
amplificador.
Para poder completar las practicas se necesita
ver los siguientes videos:

● Sistema óptico:
[Link]
● Sistema mecánico:
[Link]
● Sistema de iluminación:
[Link]
● Iluminacion Kholer:
[Link]
● Observación de células:
[Link]
● Practica sencilla:
[Link]