Universidad de

Ixtlahuaca CUI
Licenciatura en Químico Farmacéutico Biólogo
Bacteriología Avanzada

Susceptibilidad antibióticos y Antibiograma

Dra. Sara Ariadna Ochoa Perez

Laboratorio de investigación en bacteriología intestinal
 Antibiograma
• Es el método o prueba que mide la sensibilidad de una bacteria frente a
diferentes antimicrobianos in vitro y a partir de estos resultados predice la
eficacia in vivo.
• Guiar al clínico en la elección del mejor tratamiento individual, y monitorizar la
evolución de la resistencia bacteriana con objeto de revisar el espectro del
antimicrobiano y poder actualizar los tratamientos empíricos
• Con un antibiograma se pueden obtener resultados cualitativos que indican si la
bacteria es sensible o resistente a un antibiótico, o cuantitativos que
determinan la concentración mínima (CMI) de antimicrobiano que inhibe el
crecimiento bacteriano (en μg/ ml o en mg/l).

Cercenado and Saavedra-Lozano, 2009

 Antibiograma
• La interpretación de los resultados del antibiograma (sensible, intermedio o
resistente) se realiza en función de los valores establecidos por diferentes comités,
como el Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) en Estados Unidos, el
European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing en Europa y la Mesa
Española de Normalización de la Sensibilidad y Resistencia a los Antimicrobianos.
• Estos comités determinan y establecen puntos de corte basados en propiedades
microbiológicas, farmacocinéticas y de eficacia clínica, para definir la sensibilidad
(éxito terapéutico) o resistencia de las diferentes especies bacterianas a cada
antimicrobiano.

Cercenado and Saavedra-Lozano, 2009

Antibiótico: es una sustancia producida por hongos y/o bacterias que
tiene la capacidad de inhibir el crecimiento de diversos microorganismo
causantes de una infección.

Antimicrobianos: sustancia de origen artificial que presenta la actividad

de inhibir el crecimiento de diversos microorganismo
Mecanismos de Resistencia Bacteriana

Peleg and Hooper, 2010

 Expresión de la
Resistencia
• Constitutiva
Tipos de Resistencia • Inducible
Bacteriana • Constitutiva- Inducible
• Natural – Innata
• Adquirida
• Cromosómica
• Extracromosómica
 ESTUDIO DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA
Método Categorías CMI µg/ml
Difusión en agar (discos) S, I, R No
Dilución en agar S, I, R Sí
Dilución en caldo S, I, R Sí
Métodos automatizados S, I, R Sí
E-test S, I, R Sí
Abreviaciones: S, susceptible; I, Intermedio; R, resistente;
CMI, concentración mínima inhibitoria.
Las técnicas moleculares permiten detectar el mecanismo y/o
el gen de resistencia en horas.
 Sensibilidad antimicrobiana
Método de difusión en disco
• Importancia de los estudios de susceptibilidad en el laboratorio Clínico.
• El resultado sustenta el tratamiento.
• Cada laboratorio debe seleccionar el método adecuado para
determinar la susceptibilidad antimicrobiana.
• La realización de un antibiograma se basa en el patrón de resistencia
de cada bacteria. Así, los antibióticos a los que esa bacteria es
intrínsecamente resistente o cuya sensibilidad puede inferirse por
otros, no suelen informarse en el antibiograma.
• Los patrones de antibiograma poco frecuentes o imposibles requieren
confirmación, ya que no responden a mecanismos de resistencia
conocidos
 Difusión en disco Kirby-Bauer
Rápido
Fácil
Económico
Bacterias de crecimiento no exigente
Consiste en poner sobre placas inoculadas con el microorganismo, una serie
de discos de papel filtro secante impregnados con los diferentes
antibióticos.
El antibiótico difunde radialmente sobre el espesor del agar a partir del
disco formando un gradiente de concentración.
Incuba de 37°C/18-24 h en condiciones aerobias para mostrar zonas de
inhibición.
La lectura de los halos se compara en las tablas de referencia CLSI-2019
para interpretar como S, I y R.
 Etapas del procedimiento
Selección de las colonias:
◦ 3-5 colonias
◦ Crecimiento reciente no mas de 24 h
Inóculo
◦ Suspensión directa (SS, MHC, ajustar NMF 0.5)
◦ Método de fase logarítmica.
Inoculación de las placas
◦ Profundidad de 4 mm
◦ Césped en 3 direcciones
Selección del antibiótico (CLSI-2019)
Colocar discos (max 6- 100mm, max 10-150mm)
Incubación 37°C/16-18 h
 Lectura
MEDIR halos de
inhibición en mm.

Doble zona (medir la

zona mas interna).
Dispensador de disco
 Lectura
Bordes difusos ( medir zona obvia).
Colonias resistentes dentro del halo de
inhibición.
Interpretación de resultados de acuerdo ala
CLSI-2021
 Desventajas
Muchas variables
Control de calidad de los medios
Fallas de la técnica
Falla en la conservación de los discos
 Control de calidad
Cepas de referencia (precisión y exactitud)
E. coli ATCC 35218 prod-BL
E. faecalis ATCC 29212 (S), ATCC 52912 alta R
aminoglucósidos.
H. influenzae ATCC 49247 control de β-lactámicos.
K. pneumoniae ATCC 700603 prod-BLEE.
Controles diariamente, semanalmente y
mensualmente.
No exceso de pases.
Control de calidad de materiales y equipos
 CMI por dilución seriada en placa de agar con replicador de “Steers”. (CLSI-2012 “Cliical and Laboratory
Standards Institute. Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests; Approved Standard- Edition
2012) y Ensayo de tira-E (Ensayo de Epsilómetro; AB Biodisk, Solna, Sweden 2010).
Gelosa Casman-10% SCb
Descongelar Microaerofília 370C/3-5 d
Confirmaron: UR (+), Gram (-)
-70 C
0
Catalasa (+), oxidasa (+)
Ác. Nalidíxico (R ), Cefalotina (S)

Dilución seriada en placa con

Replicador de “Steers” Tira -E (AB Biodisk,Sweder 2001)

Caldo Brucella-10% SC Caldo Brucella-10% SC

VALORES (CLSI-2012)
Escala 2.0 MF Escala 3.0 MF
Cepa Valores Valores Valores
de Am de Tt de CH
Replicar con “Steers”
(g/ml) (g/ml) (g/ml)

[Link] 0.015 -- 0.125 –1.0 0.015 –

0.125 0.125 250 L
250 L ATCC
43504

[Link] 0.125 –0.5 0.125 –1.0 0.125– 0.5

ATCC
29213

Absorber 10-15 min

VALOR
DE  4.0  2.0  1.0
CORTE

Mueller Hinto-10% SCb

Conc. 0.015-512 g/ml
Por duplicado. Determinar MIC´s
 Difusión seriada agar Replicador
“Steers”
Ventajas Desventajas
• Procesamiento de más • Mas elaborado
muestras (32) • Costoso
• CMI µg/mL • No accesible a
• Importancia laboratorios de atención
epidemiológica- básica
Investigación
 Tira E
Ventajas Desventajas
• Rápido Costoso
• CMI µg/mL No accesible a
• Importancia epidemiológica- laboratorios de
Investigación atención básica
• β- Lactamasas
Métodos Automatizados
 Interés Diagnóstico
• MRSA en el 56%
• VRE en 9.7%
• Alta resistencia en MRSA 41-49%
• ESKAPE
• Incremento de R en BGN
• P. aeruginosa R-IMP 21-31%
• K. pneumoniae y E. coli prod-BLEE
• K. pneumoniae KPC
• Acinetobacter baumanni MDR
 Fenotipos de resistencia raros o imposibles
Microorganismo  Fenotipo 
Cocos grampositivos  Sensibilidad a aztreonam 
Streptococcus pyogenes  Resistencia a penicilina. No descrita actualmente 
Enterococcus/Staphylococcus  Resistencia a linezolid, daptomicina, tigeciclina 
Staphylococcus  Resistencia a gentamicina y sensibilidad a otros aminoglucósidos
(salvo estreptomicina) 
Staphylococcus  Resistencia a oxacilina y sensibilidad a cefalosporinas 
Staphylococcus aureus  Resistencia a vancomicina 
Staphylococcus coagulasa negativa  Sensibilidad a β-lactámicos (aproximadamente 70% de
resistencia a cloxacilina) 
Enterococcus/Streptococcus pneumoniae  Resistencia a ampicilina y sensibilidad a amoxicilina-ácido
clavulánico 
Enterococcus faecalis  Resistencia a ampicilina 
S. pneumoniae  Resistencia a linezolid 
Enterobacterias  Resistencia a carbapenemas 
Klebsiella spp.  Sensibilidad a ampicilina 
Proteus vulgaris  Sensibilidad a ampicilina 
Pseudomonas aeruginosa/Acinetobacter  Resistencia a colistina 
Haemophilus spp.  Resistencia a cefotaxima, carbepenemas y fluoroquinolonas 
Neisseria meningitidis  Resistencia a cefotaxima, fluoroquinolonas 
Anaerobios  Resistencia a metronidazol 
Clostridium difficile  Resistencia a vancomicina 

Cefotaxima es equivalente en cuanto a actividad antibacteriana a ceftriaxona y ampicilina a amoxicilina.

 Microorganismos intrínsecamente resistentes a ciertos antibióticos

Antimicrobiano  Microorganismo resistente 

Vancomicina  Leuconostoc, Lactobacillus, Pediococcus,
Erysipelothrix 
Cefalosporinas  Anaerobios*, Enterococcus spp., Listeria
monocytogenes 
Clindamicina, vancomicina, teicoplanina y Bacterias gramnegativas 
daptomicina 
Clindamicina, cotrimoxazol  Enterococcus spp. 
Aztreonam, colistina  Bacterias grampositivas 
Fluoroquinolonas, cotrimoxazol  Streptococcus pyogenes 
Nitrofurantoína  Proteus spp., Morganella spp., Providencia s
pp., Acinetobacter spp. 
Quinupristina-dalfopristina  Enterococcus faecalis 

* Las cefamicinas (cefoxitina) tienen buena actividad anaerobicida.

Actividad de β- Lactamasas
 β-Lactamasas
Clase A: penicilinasas
Clase B: betalactamasas
Clase C: cefalosporinasas
Clase D: oxacilinasas

Las beta lactamasas se clasifican según Bush en los siguientes grupos (5):
1. CEP-N. Hidrolizan cefalosporinas y no son inhibidas por el ácido
clavulánico.
2a. PEN-Y. Hidrolizan penicilina y son inhibidas por el ácido clavulánico.
2b. BDS-Y. Presentan amplio espectro, son inhibidas por el ácido
clavulánico.
2b. EBS-Y. De amplio espectro, son inhibidas por el ácido clavulánico.
2c. CAR-Y. Hidrolizan carbenicilina, son inhibidas por ácido clavulánico.
2d. CLX-Y. Hidrolizan cloxacilina, son inhibidas por ácido clavulánico.
2e. CEP-Y. Hidrolizan cefalosporinas y son inhibidas por ácido clavulánico.
3. MET-Y. Metalo beta lactamasas, no son inhibidas por ácido clavulánico.
5. PEN-N. Hidrolizan penicilina y no son inhibidas por el ácido clavulánico
Prueba de Cefinase®
Interpretación
Controles
• Staphylococcus aureus
(ATCC 29213): Positivo (1h)
• Neisseria gonorrhoeae:
Positivo (1min)
• Enterococcus faecalis:
Positivo (5min)
• Bacteroides: Positivo
(30min)
• Haemophilus influenzae
(ATCC 10211): Negativo
 Inhibidores de β-Lactamasas

• Estructura similar a los β-Lactámicos

• No tienen actividad antibiótica
• Alta afinidad por las β-Lactamasas
• Inhiben β-Lactamasas plásmidicas pero no cromosómicas
• Se usan asociados a antibióticos β-Lactámicos
• Atraviesan fácilmente canales de porinas BGN
• Ácido clavulánico, sulbactam, tazobactam
 Detección de BLEEs por prueba de
doble disco

Disco de la izquierda con 30 g de CTX y disco central

con 20 mas 10g de amoxicilina con ác clavulánico y a
la derecha disco con 30 g de CAZ, muestran un
fenotipo de resistencia a ambas cefalosporinas
CLINICAL MICROBIOLOGY REVIEWS, Oct. 1995, p. 557–584
 Etest
Antibiograma
Difusión-Dilución
Ensayo de Hodge para BLEEs
Combinación de Antimicrobianos
Combinación de Antimicrobianos
 Studies demonstrating negative clinical outcomes in drug-resistant Pseudomonas
aeruginosa infections
Study design Setting/location Infection type Cases/controls Definition of resistance Outcome
(n)

Retrospective Tertiary; China Nosocomial 44/68 R to ceftazidime, ciprofloxacin, Crude

cohort piperacillin, imipenem mortality

Retrospective Tertiary; Israel Isolation from any 82/82 R to all: ceftazidime, cefepime, In-hospital
matched cohort clinical culture aztreonam, ciprofloxacin, mortality
piperacillin, gentamicin

Retrospective Tertiary; USA FQRPA vs FQSPA; 320/527 Imipenem-R isolates were R to Mortality
cohort any median of 4 (2–6)
clinical culture unique drug classes

Prospective Calgary Health MBL+ vs MBL− 93/80 MBL-positive strains R to Crude

Region; Canada P aeruginosa from ≥3 classes of antibiotics case–fatality
any clinical culture

Retrospective Tertiary; USA All clinical cultures 135/719 Imipenem-R isolates significantly In-hospital
cohort more R to 7 other antimicrobials mortality

Retrospective Tertiary and All clinical cultures 253/2289 Imipenem-R isolates In-hospital Mortality
cohort community; USA

Case–control Tertiary; Japan All clinical cultures 69/247 b/aIMP‡-positive isolates R to mortality
3 classes of antibiotics
Infectionrelated
 Adhesión Microbiana
(Nuevo blanco en el tratamiento)

Nature Reviews Microbiology 2008, 6:17-27