T03.
1 Genes
Naturaleza de las ciencias Habilidades experimentales
➢ Las mejoras tecnológicas conllevan avances en la ➢ Usar una base de datos para determinar las
investigación científica: los secuenciadores de genes se diferencias en la secuencia de bases de un
usan para secuenciar genes. (1.8) gen en dos especies.
Comprensión Mentalidad internacional
➢ En el Proyecto Genoma Humano se secuenció toda ➢ La secuenciación del genoma humano
la secuencia de bases de los genes humanos. muestra que todos los seres humanos
➢ El genoma es la totalidad de la información genética de comparten la inmensa mayoría de sus
un organismo. secuencias de bases, si bien hay muchos
polimorfismos de nucleótidos individuales
➢ Por mutación se forman nuevos alelos.
que contribuyen a la diversidad humana.
➢ Los alelos difieren entre sí en una o unas pocas bases.
Teoría del conocimiento
➢ Las distintas formas específicas de un gen reciben el
➢ Hay una relación entre la anemia falciforme
nombre de alelos.
y la prevalencia de la malaria. ¿Cómo
➢ Un gen ocupa una posición específica en un
podemos saber si hay una relación causal
cromosoma. Un gen es un factor hereditario que en tales casos o si se trata únicamente de
abarca una longitud determinada de ADN y que influye una correlación?
en una característica específica.
Aplicaciones
➢ Comparación del número de genes en humanos con
otras especies.
➢ Causas de la anemia falciforme, incluidos una mutación
por sustitución de bases, un cambio en la secuencia de
bases del ARNm transcrito a partir de dicha mutación y un
cambio en la secuencia de un polipéptido en la
hemoglobina.
Conviértete en Dr. House
Un paciente ha llegado a la clínica con
misteriosos síntomas. Tu grupo necesita
realizar una serie de pruebas y encontrar
las pistas que conduzcan a su
diagnóstico.
Empezad con la historia del paciente y
“Estudio de un caso genético”
luego realizad las pruebas una a una.
Una vez las hayáis completado ir al paso
3, la diagnosis.
Lea la historia y complete el siguiente informe: [Link]
Actividad:
Estudio de caso genético: El caso
de las células deformes.
Realice todas las pruebas hasta llegar a un
diagnóstico
Adaptado de:
Buscador de enfermedades por síntomas:
[Link]
[Link]
1 ¿Qué es un gen?
Un gen es un factor hereditario que abarca una longitud determinada de ADN y que
influye en una característica específica.
Un gen es un factor hereditario que determina una característica específica de un
organismo o que influye sobre ella. Una característica es cualquier propiedad o rasgo de
un ser vivo que puede ser observado o medido. Por ejemplo: la calvicie, el color de los
ojos, el grupo sanguíneo, la forma de una semilla, la altura de una planta, etc.
Fenotipo: Conjunto de características hereditarias
del organismo que están determinadas por los
genes en un ambiente determinado.
Genotipo: Conjuntos de genes, localizados en el
ADN de la célula, que determinan el fenotipo de un
organismo en un ambiente determinado.
Genoma: Conjunto de la información genética de
un organismo.
Genética: rama de la Biología que estudia cómo se
almacena la información genética y cómo ésta se
transmite a la descendencia.
Las coquinas (Donax variabilis) es una especie de molusco cuyos
individuos muestran una extraordinaria diversidad fenotípica, tanto en
el color como en el patrón de sus conchas.
«Coquina variation3» de Debivort - Own work by Author. Disponible bajo la licencia CC BY-SA 3.0 vía Wikimedia Commons -
[Link]
2. Comparando el numero de genes.
Comparación del número de genes en humanos con otras especies.
Las especies varían en el número de genes que tienen en su ADN:
Grupo Nombre Breve descripción Número de genes
que codifican
proteínas
Procariotas Haemophilus influenzae Bacteria patógena 1.700
Escherichia coli Bacteria intestinal 3.200
Protistas Trichomonas vaginalis Parásito unicelular 60.000
Hongos Saccharomyces cerivisiae Hongo unicelular 6.000
(levadura)
Plantas Oryza sativa (arroz) Cultivado para 41.000
alimentación
Arabidopsis thaliana Pequeña hierba anual 26.000
Populus trichocarpa (chopo) Árbol grande 46.000
Animales Drosophila melanogaster Sus larvas se alimentan 14.000
de frutas maduras
Caenorhabditis elegans Pequeños del suelo 19.000
Homo sapiens Gran omnívoro bípedo 23.000
Daphnia pulex (pulga de Pequeño crustáceo 31.000
agua) lacustre
Se podría esperar que a mayor complejidad, mayor número de genes, pero no es
posible deducirlo de los datos y pruebas de que se disponen. Pero una misma
especie siempre tiene un mismo número de genes.
3. ¿Dónde se localizan los genes?
Un gen ocupa una posición específica en un cromosoma.
Los genes se localizan en los cromosomas.
Los cromosomas se
identifican al microscopio
según la posición del
centrómero y la longitud
de sus brazos y mediante
técnicas de bandeo
cromosómico, utilizando
diferentes métodos de
Cromosoma 1 humano, en tinción.
metafase, con dos cromátidas.
Micrografía SEM, x16800.
[Link]
«PLoSBiol3.5.Fig7ChromosomesAluFish» de Andreas Bolzer,
Gregor Kreth, Irina Solovei, Daniela Koehler, Kaan Saracoglu,
Christine Fauth, Stefan Müller, Roland Eils, Christoph Cremer,
Michael R. Speicher, Thomas Cremer - Bolzer et al., (2005)
Three-Dimensional Maps of All Chromosomes in Human Male
Fibroblast Nuclei and Prometaphase Rosettes. PLoS Biol 3(5):
e157 DOI: 10.1371/[Link].0030157, Figure 7a. Disponible
bajo la licencia CC BY 2.5 vía Wikimedia Commons -
[Link]
[Link]#mediaviewer/
File:[Link]
metacéntrico submetacéntrico acrocéntrico
Localización de los genes a lo largo del cromosoma:
La posición de un gen en un cromosoma se denomina locus (pl. loci). Los genes se disponen
linealmente a lo largo del cromosoma. Y un determinado gen siempre se encuentra en el
mismo locus de su cromosoma. Para identificar su posición se utiliza el nombre de la banda
de tinción en donde se encuentra.
Localización lineal de distintos genes
del cromosoma 10 humano.
Micrografía con tinción fluorescente Cada banda se identifica por una serie de letras y
números [Link]
¿Cuál
¿Cuáleses
el sistema parapara
el sistema denominar los loci
asignar loci de los genes?
a los genes?
17p11.2
El locus de un gen (lugar que ocupa en un cromosoma) se identifica mediante un
código de números y letras.
Por ejemplo, el gen TP53 (que previene tumores) se encuentra en 17p13.1 (=
cromosoma 17, brazo p, banda 1, sub-banda 3, sub-sub-banda 1)
Marque con una flecha la localización aproximada.
[Link]
¿Cuál
¿Cuáleses
el sistema parapara
el sistema denominar los loci
asignar loci de los genes?
a los genes?
17p13.1 (TP53)
17p11.2
El locus de un gen (lugar que ocupa en un cromosoma) se identifica mediante un
código de números y letras.
Por ejemplo, el gen TP53 (que previene tumores) se encuentra en 17p13.1 (=
cromosoma 17, brazo p, banda 1, sub-banda 3, sub-sub-banda 1)
Marque con una flecha la localización aproximada.
[Link]
¿Cuál es el sistema para denominar los loci de los genes?
17p11.2
Asocie los loci de los genes con la letra correspondiente
16q13.2 17q1.1
11p13.1
¿Cuál es el sistema para denominar los loci de los genes?
11p13.1 17p11.2
17q1.1
16q13.2
Asocie los loci de los genes con la letra correspondiente
16q13.2 17q1.1
11p13.1
Galería de pósters e
imágenes de los
cromosomas humanos
[Link]
Genome/posters/chromosome/[Link]
Navegador de cromosomas y localizador de genes
[Link]
4. ¿Qué son los alelos?
Las distintas formas específicas de un gen reciben el nombre de alelos.
▪ Todos los seres vivos tenemos dos
copias de cada cromosoma (células
diploides y cromosomas
homólogos) y, por tanto, dos copias
de cada gen.
▪ Las dos copias de un gen pueden
ser idénticas o presentar pequeñas
diferencias. Estas diferencias se
pueden reflejar en las
características fenotípicas del
organismo.
▪ Cada una de las formas alternativas
que puede presentar un gen se
denomina alelo.
Mendel, el padre de la Genética, tuvo
la idea de estudiar genes que tuvieran
pocas variantes o alelos: guisantes
verdes o amarillos, guisantes lisos o Diferentes colores del pelaje de ratones[Link]
producida por numerosos alelos de un mismo gen.
rugosos, tallo alto o enano, etc.
Pero los genes pueden tener tres, cuatro o más alelos, que al combinarse de dos en dos, pueden
originar una gran variedad de fenotipos: grupos sanguíneos ABO, coloración del pelo, de los ojos, etc.
5. Diferencias entre alelos.
Los alelos difieren entre sí en una o unas pocas bases.
▪ Un gen es un segmento de ADN, con
una secuencia de cientos o miles de
bases de longitud.
▪ Diferentes alelos de un mismo gen
tienen pequeñas variaciones en la
secuencia de bases, generalmente en
una o dos bases.
▪ Estas variaciones se denominan
polimorfismos de nucleótido simple
(SNPs, pronunciado snips), cambios en
una o en unas pocas de bases de la
secuencia de un gen. La cadena de ADN en 1 difiere de la del ADN
en 2 en un sólo par de bases.
«Dna-SNP» de SNP model by David Eccles (gringer). Disponible bajo la licencia CC
BY 4.0 vía Wikimedia Commons - [Link]
[Link]#mediaviewer/File:[Link]
6. Comparación entre genes.
Usar una base de datos para determinar las diferencias en la secuencia de bases
de un gen en dos especies.
Uno de los resultados del Proyecto Genoma Humano ha sido la secuenciación de muchos
otros genomas de diversas especies. Ello permite comparar las secuencias de genes en
diferentes especies y analizar las semejanzas y diferencias, así como su grado de parentesco
evolutivo.
▪ Ir a GenBank ([Link]
la base de datos de secuencias de genes del Instituto
Nacional de Salud de los Estados Unidos.
▪ Elegir “Gene” en el menú de búsqueda.
▪ Introduzca el nombre de un gen seguido del nombre del
organismo. Por ejemplo: COX1 (citocromo oxidasa 1, un
enzima mitocondrial) para Pan (chimpancé).
▪ Ir a la sección “Genomic regions, transcripts, and
products” hasta encontrar “Go to the nucleotide”.
▪ Elegir “FASTA” y debe aparecer la secuencia del gen.
Copiar la secuencia y pegarla en un fichero del bloc de
notas .txt
▪ Repetir la búsqueda con otra especie más, con la que
quieras comparar, y cópiala a continuación en el mismo
fichero de texto.
▪ Descargar, instalar y ejecutar la última versión del software ClustalX (
[Link] que permite alinear y comparar secuencias de genes.
▪ En el menú elegir “Load Sequences”.
▪ Seleccionar tu fichero y las secuencias deben aparecer alineadas en la ventana de
ClustalX. Los asteriscos en la fila superior indican coincidencias completas entre las
especies comparadas.
7. Mutación
Por mutación se forman nuevos alelos.
▪ Nuevos alelos se forman a partir de otros alelos por mutación del gen. Las mutaciones son
cambios al azar y permanentes en el ADN; no existe ningún mecanismo para que una
determinada mutación se realice.
▪ El tipo de mutación más normal es la sustitución puntual de una base por otra.
▪ Los cambios al azar son improbables que sean beneficiosos, pero a lo largo de millones de años
su acumulación permite que la evolución tenga lugar. La mayoría de las mutaciones o son
neutras o son perjudiciales. Algunas mutaciones son letales y causan la muerte de la célula
donde se ha producido.
▪ Las mutaciones en las células del cuerpo de un organismo desaparecen cuando el individuo
muere; pero las que se producen en los gametos, o en las células productoras de gametos,
pueden transmitirse a la descendencia y causar enfermedades genéticas.
▪ Las mutaciones se producen al azar por errores
en la maquinaria de replicación del ADN (la tasa
en mamíferos es una mutación por cada 1,2 x 108
pares de bases).
▪ También hay agentes mutágenos que aumentan
la probabilidad de las mutaciones: sustancias
químicas que reaccionan con el ADN o se
intercalan entre las bases (como el humo del
tabaco, el ácido nitroso, superóxidos, bromuro de
etidio), radiaciones de onda corta (partículas alfa
radiactivas, rayos gamma,, X, UV), algunos virus al
infectar una célula.
Mutación génica puntual por sustitución de bases
Una base es sustituida por otra.
Puede producir o no un cambio de ¿Cuáles son los efectos de estas
aminoácido en el polipéptido. mutaciones por sustitución de bases?
[Link]
Mutación génica puntual por sustitución de bases
Una base es sustituida por otra.
Puede producir o no un cambio de ¿Cuáles son los efectos de estas
aminoácido en el polipéptido. mutaciones por sustitución de bases?
Es una mutación silenciosa:
El cambio en la secuencia de bases
no tiene efecto en los aminoácidos
codificados. La mutación codifica
para el mismo aminoácido.
[Link]
Mutación génica puntual por sustitución de bases
¿Cuáles es el efecto de esta mutación
¿Cuáles son los efectos de estas
por sustitución de una base?
mutaciones por sustitución de bases?
Mutación génica puntual por sustitución de bases
¿Cuáles es el efecto de esta mutación
por sustitución de una base?
Ácido Ácido Ácido
glutámi glutámi glutámi
co co co
Es una mutación del aminoácido
codificado o mutación de sentido
erróneo o equivocado. El cambio en la
secuencia de bases produce un cambio
en el aminoácido que codifica (por ej.
anemia falciforme).
Mutación génica puntual por sustitución de bases
¿Cuáles es el efecto de esta mutación
por sustitución de una base?
Mutación génica puntual por sustitución de bases
¿Cuáles es el efecto de esta mutación
por sustitución de una base?
Es una mutación sin sentido. El
cambio en la secuencia de bases
produce un codón de parada o STOP,
de forma que el polipéptido se
acorta (por ej. fibrosis quística)
8. Anemia falciforme.
Causas de la anemia falciforme, incluidos una mutación por sustitución de bases, un
cambio en la secuencia de bases del ARNm transcrito a partir de dicha mutación y un
cambio en la secuencia de un polipéptido en la hemoglobina.
La anemia falciforme es la enfermedad genética más común en el
mundo (300.000 niños cada año).
▪ Es una patología que afecta a la hemoglobina y que causa que
el glóbulo rojo de la sangre, cuando no está transportando O 2,
se deforme y adquiera apariencia de una media luna u hoz
(falciforme);
▪ Y esta nueva forma provoca dificultad para la circulación de los
glóbulos rojos, por ello se obstruyen los vasos sanguíneos y
causan síntomas como dolor en las extremidades, hemorragias,
llegando a causar la muerte.
▪ Los glóbulos rojos también padecen de una vida más corta
provocando anemia por no ser reemplazados a tiempo (en vez
de durar 120 días en la sangre, son eliminados a los 10-20 días).
Signos: anemia, agotamiento, dolor e inflamación de
articulaciones, conjuntiva amarilla, etc.
La anemia falciforme se debe a una mutación del gen que codifica la
cadena alfa de la hemoglobina. El símbolo del gen es Hb. La mayoría
de los humanos tienen el alelo HbA. Si una mutación por sustitución
de una base convierte el sexto codón GAG en GTG, se forma el alelo
HbS. La mutación es transmitida a la descendencia si se encuentra en
las células reproductoras (óvulos o espermatozoides).
Secuencia del gen Hb para la hemoglobina normal o hemoglobina A (Hb A):
ADN … …
Aminoácido
s
Secuencia del gen Hb para la hemoglobina mutante o hemoglobina S (Hb S):
ADN … …
Aminoácido
s
▪ La hemoglobina A está formado por cuatro
subunidades: 2 cadenas polipeptídicas alfa y
dos cadenas polipeptídicas beta. La
Hemoglobina A mutación que causa la hemoglobina S se
normal produce en la cadena beta de la
hemoglobina que está codificada por el gen
HBB.
▪ La hemoglobina S tiene una forma alargada
que duplica el tamaño de la hemoglobina
normal A, cuando se le une el O2.
▪ Estos cambios de forma a medida que circula
4 O2 por la sangre debilita la membrana del
glóbulo rojo y acorta su vida
Hemoglobina S
con O2 (forma Hemoglobina S
normal) sin O2 (forma
alargada)
4 O2
▪ La anemia falciforme se hereda de padres a ▪ La anemia falciforme se da sobre todo
hijos, siempre que ambos progenitores sean en el este de África y en algunas
portadores del alelo HbS regiones de Europa y Asia.
▪ En África, hasta el 5% de niños que
nacen tienen los dos alelos de la
hemoglobina mutados (HbSHbS) y
desarrollan una anemia falciforme
severa muy grave.
▪ El 35% nacen con un solo alelo mutado
(HbAHbS) y tienen una anemia leve e
incluso inapreciable, son personas
portadoras con algunos rasgos
falciformes.
[Link]
Gen de la hemoglobina (HBB)
codificante
molde
transcripción
traducción
Gen de la hemoglobina (HBB)
Gen HBB normal
codificante
molde
molde
transcripción
traducción
Pro Glu Glu
Anemia falciforme
Tiene lugar una simple mutación puntual de sustitución de una base
Mutante
codificante
molde
transcripción
traducción
Pro Glu Glu
Anemia falciforme
Tiene lugar una simple mutación puntual de sustitución de una base
Mutante
codificante
codificante
molde
molde
transcripción
traducción
Pro Glu Glu Pro Val Glu
Hb normal
Hb falciforme
Comparación del ácido glutámico con la valina
Pro Glu Glu Pro Val Glu
¿Qué diferencias en sus propiedades podemos deducir de las estructuras?
¿Cómo podría cambiar la estructura tridimensional de la proteína?
Comparación del ácido glutámico con la valina
Pro Glu Glu Pro Val Glu
apolar
¿Qué diferencias en sus propiedades podemos deducir de las estructuras?
¿Cómo podría cambiar la estructura tridimensional de la proteína?
9. Anemia falciforme y malaria
Hay una relación entre la anemia falciforme y la prevalencia de la malaria. ¿Cómo
podemos saber si hay una relación causal en tales casos o si se trata únicamente
de una correlación?
▪ Existe un correlación
entre la incidencia de la
anemia falciforme y la
distribución de la
malaria. Pero ¿hay una
relación causal entre
ambas enfermedades?
▪ ¿La anemia falciforme
causa la infección de la
malaria?
▪ ¿La malaria es la causa
de la alta incidencia de la
anemia falciforme?
Población de 2 a 10 años que ha sido infectada
con malaria en 2010
Empieza viendo este tutorial sobre la malaria o paludismo: La malaria es la principal enfermedad que causa muertes en el
[Link] planeta. [Link]
La malaria en cifras:
• Más de 2 mil millones de personas en el mundo están en riesgo (el 40% de la
población mundial).
• 300 millones de casos al año; más del 90% de los cuales en África tropical con
un coste de más de 12 mil millones de dólares anuales.
• Cerca de 2,7 millones de personas mueren de malaria cada año, la mayoría
niños.
[Link]
Malaria y anemia falciforme
La malaria o paludismo es una enfermedad parasitaria causada
por una célula del protozoo Plasmodium. Es transportada por el
mosquito Anopheles, donde se reproduce sexualmente, e invade
los glóbulos rojos normales de la sangre que los transporta hasta
Mosquito Anopheles el hígado, donde se reproduce asexualmente.
El Plasmodium invade los glóbulos rojos y los rompe. Los síntomas
comunes incluyen fiebre, escalofríos, vómitos y anemia. La muerte
es común, debido a menudo a fallo del hígado o anemia severa.
Plasmodium no puede infectar a los glóbulos rojos falciformes, de
modo que las personas con rasgos falciformes son resistentes a la
enfermedad. Como consecuencia, la anemia falciforme predomina
más en áreas donde la malaria es endémica.
Reproducción de Plasmodium y
rotura de glóbulos rojos
[Link]
Plasmodium (esporozoito)en el intestino del mosquito
[Link] [Link]
Lee este artículo:
[Link]
Tratamiento de la anemia falciforme:
uso terapéutico de células madre.
Gracias a un reciente descubrimiento en la
reprogramación de células madre (IPS), los
genes defectuosos en el ratón fueron
“reparados” y reemplazados.
Se emplearon retrovirus como vectores para
insertar el gen en las células del ratón, que
fueron trasplantadas al ratón y empezaron a
producir glóbulos rojos sanos.
[Link]
ured-by-stem-cells-reprogrammed-from-their-own-tails/
[Link]
e_model.html
[Link]
10. ¿Qué es un genoma?
El genoma es la totalidad de la información genética de un organismo.
▪ El genoma de un organismo es el conjunto de su información genética y, por tanto, la
secuencia completa de bases de cada una de sus moléculas de ADN.
▪ El genoma humano está compuesto por 46 moléculas de ADN (cromosomas) que se
encuentran en el núcleo celular, más el ADN mitocondrial.
▪ En plantas, el genoma está compuesto por el ADN del núcleo más el de las mitocondrias
más el de los cloroplastos.
▪ En procariotas, el genoma está compuesto por el ADN del cromosoma circular más el de
los plásmidos
Cromosoma Genes
Cromosoma Genes 13 924
1 4.222 Tamaño del
14 1.803 Nº de genes
2 2.613 que codifican genoma
Organismo
15 1122 proteínas (millones de pares
3 1.859 de bases, Mb)
16 1098
4 451
17 1576 Arroz 41.000 430
5 617
18 766 Humanos 23.000 3000
6 2.280
19 1859
7 2.758 Mosca de la 14.000 13,7
20 1012 fruta
8 1.288 21 582 Hongo 6000 12
9 1.924 22 1816 (levadura)
10 1.793 X 1850 Bacteria 3.200
11 449 4,6
Y 454 ([Link])
12 1562 Mitocondrias Genes
[Link] ADN mit 13
11. El Proyecto Genoma Humano.
En el Proyecto Genoma Humano se secuenció toda la secuencia de bases de los
genes humanos.
▪ El Proyecto Genoma Humano comenzó en 1990, gracias a un consorcio público de varios países (Estados
Unidos, Reino Unido, Francia, Alemania, Japón y China) con el objetivo de secuenciar el genoma y
localizar (mapear) los genes sobre los cromosomas de una selección de individuos de la especie humana
por completo en el plazo de quince años.
▪ En 1998 una empresa privada, Celera Genomics, se planteó el reto de acabar antes con el objetivo de
poder patentar las secuencias de los genes humanos.
▪ En 2011 se publicaron simultáneamente los resultados de ➢ ambos
La mayor parte unos
trabajos de lasde
secuencias de bases
acceso público y elson
otro con restricciones. las mismas en diferentes personas, tenemos un
uniformismo genético común, pero que también
hay muchos polimorfismos que contribuyen a la
diversidad humana.
➢ En el genoma humano sólo el 3% de los genes
(23.000 genes) codifican proteínas, bastante
menos de lo que se pensaba.
➢ El resto (ADN “basura” o no codificante) no se
sabe bien su función; parecen que intervienen
en la regulación de los genes codificantes. La
mitad son secuencias altamente repetitivas
(ADN satélite).
➢ Se han identificado 5.000 genes asociados a
[Link]
enfermedades.
➢ Simultáneamente se ha descifrado el código de
muchas otras especies.
[Link]
12. Implicaciones éticas del Proyecto Genoma Humano
Del Proyecto Genoma Humano se derivan importantes conflictos éticos.
El Proyecto Genoma Humano plantea importantes cuestiones éticas:
▪ ¿Es ético que se tomaran muestras de ADN de diferentes grupos étnicos y secuenciarlas
sin su conocimiento y sin su permiso?
▪ ¿Es ético que una compañía biotecnológica pueda patentar la secuencia de un gen e
impedir que otras compañías puedan utilizar dicha información para sus investigaciones?
▪ ¿Quién debería acceder a la información genética
de una persona? ¿Deberían los gobiernos, las
compañías aseguradoras o las fuerzas de seguridad
conocer la composición genética de las personas?
¿Podría darse una discriminación genética en
función de los genes y alelos que tenga una
personas?
▪ Si aumentamos la capacidad diagnóstica y
predictiva de las enfermedades genéticas ¿el
sistema de salud tendrá capacidad suficiente para
prevenir y afrontar las terapias necesarias para toda
la población?
[Link]
12. Técnicas utilizadas para la secuenciación del genoma.
La secuenciación del genoma humano muestra que todos los seres humanos comparten la
inmensa mayoría de sus secuencias de bases, si bien hay muchos polimorfismos de
nucleótidos individuales que contribuyen a la diversidad humana.
▪ Se fragmenta la molécula de ADN en segmentos pequeños y cada
segmento se secuencia por separado.
▪ Se somete el fragmento a la ADN polimerasa que empieza a copiar, pero
el proceso de copia se detiene antes de que finalice.
▪ Para detener el proceso se añaden nucleótidos modificados que no
tienen grupo –OH en el C3’ de la desoxirribosa y no pueden formar
enlaces fosfodiéster.
▪ Los nucleótidos modificados se añaden por separado: primero uno, por
ejemplo que lleve adenina; luego otro modificado que tenga timina; y así
hasta completar los cuatro tipos.
▪ Se producirán numerosas cadenas incompletas de ADN, de diversa
longitud cuyo nucleótido final siempre será uno modificado.
▪ Se separan los fragmentos por tamaño (por electroforesis) y podemos
identificar en cada uno de ellos en qué nucleótido terminan.
▪ Ordenando los fragmentos por tamaño podemos deducir la secuencia de
bases del fragmento.
▪ Uniendo las secuencias de unos fragmentos con las de otros se pueden
recomponer la secuencia completa del ADN original.
▪ El proceso se acelera si los nucleótidos modificados incorporan un
marcador fluorescente, diferente para cada uno, que pueda ser «Radioactive Fluorescent Seq» de Abizar at [Link].
detectado y leído automáticamente por una máquina secuenciadora. Disponible bajo la licencia CC BY-SA 3.0 vía Wikimedia Commons -
[Link]
[Link]#mediaviewer/File:Radioactive_Fluorescent_Seq.jpg
Diversos tutoriales sobre técnicas de
secuenciación del ADN:
[Link]
[Link]
[Link] [Link]
