Técnicas utilizadas en
laboratorio
Técnicas en Biología Molecular y Celular
Aislamiento, purificación y fraccionamiento de proteínas.
Fraccionamiento del contenido de una célula mediante centrifugación diferencia.
Hibridación de ácido nucleico.
Amplificación enzimática de DNA por PCR.
Transferencia de DNA a células eucariotas y embriones de mamífero.
Determinación de la función de los genes eucariotas por eliminación o desactivación
(silenciamiento) génica.
Cultivo celular
Clonaje y DNA recombinate
Fabricacion de nanoparticulas, liposomas, inmunoliposomas, nanogeles.
Microscopia óptica electrónica de transmisión, de barrido y microscopia de fuerza
atómica
Uso de radioisótopos
Microscopia
Es la observación de objetos muy pequeños bajo grandes aumentos. Los aparato
que se usan para ello se denominan microscopios.
En la medicina se usan la microscopía especialmente para analizar tejidos, células,
componentes sanguíneos y microorganismos. Normalmente hay varios trabajos que
preceden la observación de un material bajo el microscopio que permiten una mejor
observación, como puede ser la estructura de una célula
Su nombre deriva de mikrós, que significa pequeño y skopéoo, que significa
observar.
Microscopios según el número de oculares
1) Microscopio monocular: más sencillo. Su desventaja principal es que puede resultar un poco
incómodo si tiene que utilizarse durante largos periodos de tiempo.
2) Microscopio binocular: tipo de microscopio más utilizado en los laboratorios de investigación. La
distancia entre los dos oculares puede regularse para adaptarse a las necesidades del usuario.
3) Microscopio trinocular: permite conectar una cámara digital esta puede conectarse a un ordenador
para ver la imágenes de la muestra en tiempo real. es posible observar la muestra y al mismo tiempo
tomar fotografías o videos con la cámara.
Microscopios según el número de lentes
1) Microscopio simple: dispone de una única lente y es más habitualmente conocido como lupa.
Aún así, con un microscopio simple pueden conseguirse grandes aumentos.
2) Microscopio compuesto: dispone de por lo menos dos lentes. Este es el caso más habitual en
todos los microscopios modernos. Apareció en los Países Bajos a finales del siglo XVI.
Microscopios según la transmisión de la luz
1) Microscopio de luz transmitida: proyectan la luz desde la parte inferior del microscopio hacia la
muestra, iluminándola por debajo de la platina. La muestra debe ser cortada muy fina para hacerla
semitransparente y que parte de la luz pueda atravesarla.
2) Microscopio de luz reflejada: la luz no atraviesa la muestra, sino que es reflejada al incidir sobre
esta y conducida hacia el objetivo. Utilizado cuando se trabaja con materiales opacos que no dejan
pasar la luz.
Microscopios según el sistema de iluminación
1) El microscopio óptico: fue el primer microscopio. La luz visible es el elemento que permite
visualizar la muestra. Un haz de luz ilumina el objeto a observar, lo atraviesa y es conducido hasta el
ojo del observador, que percibe una imagen ampliada gracias a un sistema de lentes.
2) Microscopio de fluorescencia: la preparación es iluminada mediante una lámpara xenón o de
vapor de mercurio, es decir, no se usa un haz de luz tradicional, sino que se trabaja con gases. Estos
gases iluminan la muestra con una longitud de onda muy concreta que permite que las sustancias de
la muestra empiecen a emitir luz propia.
3.1) Microscopio electrónico de transmisión: se inventó durante los años 30. Llega a un número
de aumentos mucho mayor ya que no utilizaba la luz visible como elemento de visualización, sino
que usaba electrones que impactan contra la muestra dentro de una cámara de vacío.
3.2) Microscopio electrónico de barrido: también usa electrones sobre la muestra para lograr la
visualización, pero no impactan sobre toda la muestra simultáneamente, sino que lo hacen
recorriendo distintos puntos. Una parte de su energía inicial se transforma en rayos X o en emisión
de calor.
4) Microscopio de luz ultravioleta: no iluminan la muestra con luz visible, sino que con luz
ultravioleta. Longitud de onda más corta igual a resolución mayor. Detecta mayor número de
contrastes, por lo que es útil cuando las muestras son demasiado transparentes.
5) Microscopio de luz polarizada o petrográfico: para observar minerales y objetos
cristalinos. Si se iluminaran de forma tradicional, la imagen obtenida sería borrosa y difícil de
apreciar. También es útil cuando se analizan tejidos que pueden provocar la refracción de la luz.
Microscopios según la configuración de los elementos
1) Microscopio digital: capaz de capturar una imagen de la muestra y proyectarla. Consiste
únicamente en una lente de gran aumento y una cámara digital, útiles para observar objetos
cotidianos.
2) Microscopio estereoscópico: permite una visualización tridimensional de la muestra. Son
muy utilizados en aplicaciones donde debe manipularse la muestra mientras se observa.
3) Microscopio invertido: utilizado para analizar muestras que deben estar hidratadas, por
lo que están sumergidas en el fondo de un recipiente y poder así observar muestras vivas y
procesos biológicos que duran días.
Digital
Otros tipos de microscopios
1) Microscopio confocal: ilumina la muestra de forma global se ilumina punto a punto de
forma sucesiva y se reconstruye la imagen al final del proceso.
2) Microscopio de campo oscuro: la muestra es iluminada de forma oblicua, los rayos de luz
que llegan al objetivo no vienen directamente del foco lumínico, sino que han sido dispersados
por la muestra, se utilizan para observar muestras semitransparentes. No requiere tinción.
3) Microscopio de contraste de fases: recoge las velocidades a las que ha circulado la luz
mientras atravesaba la muestra para hacer una reconstrucción y obtener una imagen.
Campo oscuro Confocal
Contraste de fase
4) microscopio de fuerza atómica (AFM): se basa en
hacer un escaneado de la superficie de la muestra para
detectar las fuerzas que se establecen entre los átomos de
la sonda del microscopio y los átomos de la superficie.
Detecta fuerzas de atracción y de repulsión muy leve. Tiene
infinidad de aplicaciones en nanotecnología.
Muestras para microscopio
Un fijador debe detener la vida de la célula sin alterar demasiado la estructura de esta. Los
fijadores son sustancias químicas que desnaturalizan y precipitan las macromoléculas
celulares.
Para ver las células que no se han fijado, el tejido se congela rápidamente y se utilizan técnicas
especiales para revelar su estructura.
Criofijación
Las células y los tejidos se pueden congelar rápidamente. Así como un fijador químico
detiene los procesos metabólicos y preserva la estructura biológica, también lo hace la
congelación rápida, lo que se denomina criofijación.
La principal dificultad con la criofijación es la formación de cristales de hielo, que crecen
hacia afuera desde los sitios donde se produce la nucleación.
Las muestras más pequeñas se sumergen normalmente en un líquido de muy baja
temperatura (–42°C). Las muestras más grandes se tratan mejor con congelación a alta
presión. En esta técnica, la muestra se somete a una alta presión hidrostática y se
pulveriza con chorros de nitrógeno líquido.
Tinción negativa
Se acumulan depósitos de metales pesados en
todas partes en una rejilla de muestra, excepto
donde las partículas están presentes. Como
resultado, la muestra se destaca por su brillo
relativo en la pantalla de visualización
Proyección de sombras
Las rejillas que contienen las muestras se colocan en una
cámara sellada, que luego se evacua mediante una bomba de
vacío. La cámara contiene un filamento compuesto de un metal
pesado junto con carbono.
El filamento se calienta a alta temperatura, lo que hace que se
evapore y deposite una capa metálica sobre las superficies
accesibles dentro de la cámara. Como resultado, el metal se
deposita en las áreas que enfrentan al filamento, mientras que
las superficies opuestas de las partículas y del espacio de la
rejilla a su sombra permanecen sin recubrir.
Replicación por congelación y fractura
y grabado por congelación
Se colocan pequeños trozos de tejido en un pequeño disco
metálico y se congelan rápidamente. El disco se monta en un
escenario frío dentro de una cámara de vacío, y el bloque de
tejido congelado es golpeado por el filo de una cuchilla. El
plano de fractura resultante se extiende desde el punto de
contacto, dividiendo el tejido en dos pedazos.
El metal pesado se coloca sobre la superficie recién expuesta
del tejido congelado en la misma cámara donde se fracturó el
tejido. El metal se deposita en un ángulo para proporcionar
sombras que acentúan la topografía local.
Luego se deposita una capa de carbono sobre la capa
metálica para cementar los parches de metal en una
superficie sólida.
