U N IVE R SID A D N A C IO N A L A G R A R I A D E LA SELVA
F A C U L T A D D E I N G E N I E R I A E N I N D U S T R I A S
A L I M E N T A R I A S
TEMA :
ESTUDIOS SEROLOGICOS Y PATOGENICOS
DOCENTE : MSc. Blga. MARGARITA ALCEDO ROMERO
MACHADO CONCHA, Katerine Liseth
INTEGRANTES :
PEREA VILLACREZ, Mireyle Almendra
TINGO MARIA
OCTUBRE - 2021
INTRODUCCIÓN
Las enfermedades transmitidas por alimentos, ocasionadas por
microorganismos patógenos, constituyen un grave problema de
salud pública a nivel mundial.
40 diferentes patógenos de origen
alimentario causan enfermedades
humanas. Los métodos microbiológicos clásicos implican, el uso de un
apropiado cultivo de preenriquecimiento y enriquecimiento, el
aislamiento en medios selectivos y la posterior confirmación
mediante pruebas bioquímicas morfológicas y/o serológicas.
Clostridium botulinum, Escherichia
coli, Salmonella spp.,Listeria
monocytogenes, Yersinia
enterocolitica, Staphylococcus aureus
y Shigella spp.
SEROLOGÍA
La serología es una disciplina Es la ciencia que estudia las
basada en la detección de respuestas sérica e inmunitaria
anticuerpos específicos contra un que se evidencian en el suero
determinado microorganismo
son estimulan son
Los elementos extraños antigénicos anticuerpo proteínas
La serología permite:
- Identificar el agente responsable de la infección (diagnostico directo)
- Identificar los anticuerpos específicos contra el agente responsables de la infección
(diagnostico indirecto)
- Evaluar la evolución de una infección
PATOGENICIDAD
El término PATOGENICIDAD se refiere a la La patogenicidad es la cualidad de una bacteria para
capacidad de un organismo parásito de causarle producir enfermedad infecciosa en un huésped, siendo
daño al huésped, mientras que VIRULENCIA es el la virulencia la cuantificación de dicha capacidad.
grado de patogenicidad.
PATOGENICIDAD DE LA SALMONELLA:
Alimentos contaminados
Fiebre, nauseas, vomito,
Gastroenteritis
cólicos abdominal y
diarrea.
Clases de pruebas serologicas
Directas e indirectas
(Basadas en la reacción antígeno anticuerpo)
Huellas que deja el
Presencia del antígeno
antígeno en el huésped
Primarias y secundarias
Fijación de complemento Prueba de precipitación
Inmunofluorescencia Prueba de aglutinación
Radioinmunoensayo
Pruebas inmunoenzimáticas
Pruebas primarias
Fijación del complemento El complemento no es
un anticuerpo sino
una serie de enzimas
Tecnica desarollada por Tiene como fundamento la El complemento actua que se encuentran en
Bordet utilización de una cantidad junto anticuerpos el suero normal.
precisa de complemento especificos
Borde desarolla esta La primera fase indica que el En la segunda fase utilizo suspensión de glóbulos rojos
técnica en dos fases anticuerpo reacciona con el con un anticuerpo los cuales con el complemento producen
antigeno una hemolisis
Principales acciones del complemento
Lisis de los glóbulos rojos Lisis bacterianas Muerte microbiana Promoción de la acción fagocitaria
Es una técnica dispendiosa, ha sido valorada y estandarizada como prueba cuantitativa en el diagnostico de la
infección viral, parasitaria, bacteriana y micotica. Es muy útil en el diagnostico serológico de la enfermedad de
Chagas, brucelosis, reacción de micosis sistemáticas.
Inmunofluorescencia
El anticuerpo primario es
El marcaje se el que reconoce y se une
realiza sobre el a la diana, mientras que
anticuerpo el secundario que es el
primario marcado por el
fluorocromo reconoce al
primario y se une al él
Albert Coons (1940),
utilizo el compuesto
fluoresceína,
compuesto que podía Investiga
Investiga la Investigan la
conjugarse anticuerpos
presencia de presencia de
químicamente con los Compuesto antinucleares,
antígenos anticuerpos
grupos NH2 de las excitado a la contra
anticuerpos anti-
virales,
moléculas del luz determinado Toxoplasma,
parasitarios,
anticuerpo. ultravioleta antígeno. anticuerpos anti-
bacterianos o
Treponema
micóticos
pallidum,
anticuerpos anti-
VIH
Inmunofluorescencia en la detección de la bacteria: Legionella
pneumophila.
Estos reactivos contienen
La microscopía directa con anticuerpos
anticuerpos monoclonales
fluorescentes es un método rápido de gran capaces de reconocer todos
Se realiza con reactivos
polivalentes utilidad en la identificación de colonias los serogrupos
obtenidas por cultivo a partir de muestras de de Legionella pneumophila
agua
Los anticuerpos, marcados con fluorocromo se
unen a los antígenos de la pared del
microorganismo. Luego se formará un
complejo antígeno-anticuerpo y al examinar la
extensión con un microscopio de fluorescencia
se puede observar la fluorescencia en la pared
de estas bacterias
Radioinmunoensayo (RIA)
La sustancia que mostro mayor
Desarrollada por Yalow y Sustancia radioactiva que se combina
Consiste facilidad para marcar los
Berson (1958) químicamente con la molécula del
anticuerpos fue un isotopo de
anticuerpo
iodo
La técnica fue introducida como una técnica directa para la cuantificación particularmente de hormonas. Se utiliza
para medir la cantidad de un antígeno sérico que reacciona con un anticuerpo conocido.
Prueba Inmunoenzimática (ELISA)
Desarrollada Utilizada El desarrollo de las
por Engyall y como técnica tecnicas ELISA en la
inmunoenzimáticas industria alimentaria
Perlman directa e cambiaron el panorama
(1975) indirecta de la investigacion
Permitieron el estudio directo de agentes etiologicos
Marcaron los anticuerpos Directas: usadas par la tales como: rotavirus, adenovirus, virus sincicial
respiratorio, componentes antigénicos de virus de Hace uso habitual de esta
con una enzima que detección de antígenos hepatitis B. Han tenido también un gran impacto en el técnica para la detección
pudiera determinar la Indirectas: usadas para diagnóstico de entidades tales como toxoplasmosis, de alergénicos en
presencia del anticuerpo detectar anticuerpos enfermedad de Chagas, leishmaniasis, amebiasis,
alimentos.
giardiasis
Método directo
Placas Elisa Cubrir la placa con la Añadir el Anticuerpo Añadir el sustrato
Espectrofotómetro
solución del antígeno
Método indirecto
Colocar los anticuerpos Añadir un segundo Añadir sustrato
anticuerpo Espectrofotómetro
Método Sándwich
Primer anticuerpo Añadir un segundo Añadir el sustrato
Agregar solución a usar
anticuerpo
Método competitivo
Se utiliza cuando la estructura del antígeno es complicada y tenemos epítopos o zonas
del antígeno que son difíciles de detectar y también cuando tenemos muy pocas
cantidades de antígeno
Ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas
Se utiliza en la detección de (ELISA)
Todas las muestras positivas a la prueba de la rosa
anticuerpos en estanques de acopio
de bengala en el diagnóstico de Brucella abortus,
de leche contra B. abortus.
deben ser confirmadas con un ELISA de competencia
(ELISA-C).
El procedimiento simplificado es el siguiente:
Pruebas secundarias
Precipitación Aglutinación
Tecnica La característica
desarrollada por fundamental de ésta, es
Heildelberger que el antígeno está
hacia 1930 siempre en dilución en una
solución tampón la cual La reacción de precipitación, consiste en la
generalmente es solución formación de un compuesto no soluble,
llamado precipitado, producido al mezclar
salina
dos disoluciones diferentes.
La precipitación se da cuando un antígeno
en solución se agrega de manera progresiva
a un antisuero potente, formando
precipitados del complejo antígeno -
anticuerpo
El antígeno en cuestión se le llama precipitogeno, es multilatente y pueden ser de naturaleza proteica,
toxinas u otros productos de bacterias, hongos, virus, etc. Al anticuerpo se le llama precipitina y por lo
general pertenecen a las IgG
Aglutinación
La aglutinacion es un agregado de celulas o particulas debido a una formacion
Técnica entrelazada.
desarrollada por Su fundamento es inducir una agrupación microscópicamente visible de partículas,
Durham causada por interacciones antígeno anticuerpo que forman puentes entre ellas.
Existen varios tipos de aglutinación en donde se destacan:
Directa Indirecta
Un antígeno celular de Se refiere a la aglutinación de
partículas insolubles es células recubiertas de antígeno o
aglutinado por el anticuerpo a las partículas inertes que son
portadoras pasivas de antígenos
Modalidades de Aglutinación
Dos tipos de partículas han sido ampliamente utilizadas, los glóbulos rojos humanos o de algunas especies
animales y partículas de látex.
Si la partícula cumple un papel de si la partícula usada si la partícula es
portador pasivo de los grupos es un glóbulo rojo la látex la reacción
antigénicos el tipo de aglutinación, reacción recibe el recibe el nombre
se llama nombre de de
Aglutinación Pasiva Hemoaglutinación pasiva Aglutinación Látex
Estas pruebas se usan para la investigación de antígenos de hepatitis B, proteína C reactiva,
polisacáridos bacterianos y micóticos en PCR, pruebas de embarazo, investigación de Streptococcus
pyogenes, tipificación de grupos del género Streptococcus
PRUEBAS DE AGLUTINACIÓN
Las pruebas de aglutinación son comúnmente
utilizadas para el diagnóstico de Brucelosis en
bovinos y cerdos, Salmonelosis en aves, y Leptospirosis
en bovinos, entre otras.
Rosa de Bengala: para el diagnóstico de Brucelosis El antígeno y el suero se mezclan y agitan
bovina. En esta prueba se deposita sobre una placa suavemente por 4 minutos y luego se
plástica o de vidrio, cantidades iguales de procede a la lectura en un aglutinoscopio.
antígeno Rosa de Bengala (RB) y del suero
sospechoso.
El antígeno RB corresponde a
una cepa de Brucella abortus,
lisa (S), muerta, teñida con el
colorante rosa de bengala y NR R
suspendida en buffer pH 3,65.
Resultados cualitativos de la prueba de la Rosa de
Bengala. Presencia de suero reaccionante (izq) y suero
no reaccionante (der)
Bibliografía
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MSc. Hermes Fundora Hernández, MSc. Yamila Puig Peña, MSc. Sergio Chiroles Rubalcaba, MSc. Andrea
María Rodríguez Bertheau, MSc. Juan Gallardo Díaz,I MSc. Yoslaine Milián Samper. 2013. Métodos
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Rondon, S. Rodriguez, A. y Marin, A. Determinación de la seroprevalencia de Salmonella spp. 2014. En granjas
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GRACIAS
