INFECCIÓN E

INMUNIDAD
MÉTODOS INMUNOLÓGICOS DE
DIAGNÓSTICO
BIOLOGA: ALEXANDRA ANTONIETA URRUTIA ZEGARRA

ESTUDIANTES:
 CARRILLO HUARANCCA, Jherson Alvaro
 GÜERE PALOMINO, Paola Andrea
 GUTIÉRREZ MOROTE ,Denisse
 QUICAÑO DE LA CRUZ ,Maricielo Evelyn
 RONDINEL MENDOZA ,Maycol
 MARCADOS
Rx primarias
TÉCNICAS
INMUNOLÓGICAS
NO
MARCADOS
Rx secundarias
 REACCIÓN DE PRECIPITACIÓN
EN GEL

Nos permite detectar la presencia y la

concentración de antígenos y anticuerpos por
formación de bandas opacas de precipitado.
INMUNODIFUSIÓN DOBLE
1. FUE DESARROLLADO POR EL SUECO
ORJAN OUCHTERLONY
2. SE BASA EN LA DIFUSIÓN DE Ag Y Ac
3. SE UTILIZA UN MEDIO SEMISÓLIDO
COMO EL GEL DE AGAR
4. ES UN COMPLEJO INSOLUBLE Y
PUEDE SER ANALIZADO
VISUALMENTE
5. SE UTILIZA PARA ANÁLISIS Y
DETECCIÓN DE Ag Y Ac
PASOS DE LA TÉCNICA
1 3

2
 IDENTIFICACIÓN DE 3 PATRONES
DE IDENTIDAD
3. IDENTIDAD
PARCIAL

1. IDENTIDAD 2. NO
TOTAL IDENTIDAD
 HEMAGLUTINACIÓN

1. ES UN ANÁLISIS SEROLÓGICO PARA DETERMINAR CARGAS VIRALES Y

TIPIFICACIÓN SANGUÍNEA
2. UTILIZADO PARA DESCUBRIR ANTICUERPOS CORRESPONDIENTES
3. ESTA TÉCNICA UTILIZA A LOS HEMATÍES COMO FUENTES DE ANTÍGENOS
 TIPIFICACIÓN SANGUÍNEA
•Las personas con sangre del tipo A: sus
glóbulos rojos expresan antígenos de tipo A
en su superficie y desarrollan anticuerpos
contra los antígenos B en el plasma.
•Las personas con sangre del tipo B: sus
glóbulos rojos expresan antígenos de tipo B
en su superficie y desarrollan anticuerpos
contra los antígenos A en el plasma.
•Las personas con sangre del tipo O: no
tienen dichos antígenos (A o B) en la
superficie de sus glóbulos rojos y
desarrollan anticuerpos contra ambos tipos.
•Las personas con sangre del tipo AB:
teniendo ambos antígenos en la superficie
de sus glóbulos rojos, no fabrican
anticuerpo alguno contra el antígeno A o B.
PASOS DE LA TÉCNICA
 B
A

RH

AB
 ELISA: Para detección del antígeno:

“ ¿QUÉ ES ELISA?

.
Forma en que se
Utilidad
realiza el examen
Es necesaria una muestra de sangre. Este examen a menudo se usa para ver
La mayoría de las veces, la sangre se si usted ha estado expuesto a virus u
extrae de una vena que se encuentra otras sustancias que causen infección.
en el interior del codo o del dorso de También se emplea para detectar
la mano. infecciones pasadas o presentes.

La muestra se envía a un laboratorio

donde el anticuerpo o antígeno objeto
de estudio se vincula a una enzima
específica. Si la sustancia a estudiar
está presente en la muestra, la
solución de la prueba se torna de un
color diferente.
TIPOS:
 1.- ELISA directo
El ELISA directo es el ensayo ELISA más simple y rápido
¿sabias qué?
de todos, donde un anticuerpo primario marcado con
SU USO ES LIMITADO:
una enzima se unirá directamente al antígeno de interés Por menor sensibilidad y
permitiendo la detección y/o cuantificación del mismo dificultad para obtener un
conjugado para reconocer
un antígeno.

Enzima
Ejemplo:peroxidasa
Complejo
conjugado
Anticuerpo

VIRUS DE LA HEPATITIS B
PLACA DE ELISA
El procedimiento
simplificado sería el
siguiente:

1º Fijacion del antígeno en

la placa /posillos,luego se
prosigue con el lavado del
posillo con los antígenos
no fijados .

2º Se añade un anticuerpo
primario marcado con una
enzima que se unirá al
antígeno de interés

INMUNOCOMPLEJOS
3º Se añade el sustrato cromógeno que al reaccionar con la enzima
proporcionará una señal visible que permitirá la detección y/o
cuantificación del antígeno de interés.

Durante la incubación con el sustrato cromógeno hace que el

sustrato se rompa e oxide y cambie de color, dando así una prueba
positiva.
 2.- ELISA tipo sándwich
En el ELISA tipo sándwich el antígeno queda
inmovilizado entre dos anticuerpos, uno de captura y
otro de detección también conocidos como pares de
anticuerpos, que se unirán a dos epítopos distintos de
un mismo antígeno.

PLACA
Anticuerpos
monoclonales
específicos del
virus

VIRUS DE LA HEPATITIS B
El procedimiento simplificado sería el
siguiente:
1º El anticuerpo de captura se
inmoviliza sobre la placa, luego se
prosigue con el lavado del pocillo con
los anticuerpos de capturas no fijados
en el posillo.

2º Se añade la muestra que

contiene el antígeno de interés
que se unirá al anticuerpo de
captura, luego se prosigue con el
lavado del pocillo con los
antígenos no fijados.

Plasma
3º Se añade el anticuerpo de detección que
se unirá al antígeno unido a su vez al
anticuerpo de captura ,formando así una
ELISA sandwich, luego se prosigue con el
lavado del posillo con los anticuerpos de
detección no fijados.

4º Se añade el sustrato cromógeno

que al reaccionar con la enzima
proporcionará una señal visible que
permitirá la detección y/o
cuantificación del antígeno de
interés.

Durante la incubación con el sustrato cromógeno

hace que el sustrato se rompa e oxide y cambie de
color, dando así una prueba positiva.
ELECTROINMUNOTRANSFERE
NCIA O “WESTERN BLOT”
¿Qué es?

• Técnica de laboratorio que se utiliza para detectar una proteína

especificas en una muestra biológica
• Implica el uso de la electroforesis en gel para separa las proteínas de la
muestra.

¿Para que sirve o en que se aplica?

• Se utiliza en la confirmación de anticuerpos anti-VIH
• Tipificación de bacterias
• Detección de anticuerpos
• Cambios de concentración de proteínas
 VENTAJA
● S
Sensibilidad (capacidad para
detectar tan solo 0.1
nanogramos de proteínas de
una muestra)
● Especificidad
• Clasificación de una proteína
por tamaño, carga y
conformación
• Anticuerpos específicos
muestran afinidad por DESVENTA
JAS
proteínas especificas)
● Puede producir un
resultado falso positivo
● Producirse un falso
negativo (si la proteína
no tiene suficiente
tiempo para
transferirse)
● Requiere de mucha
precisión
● Alto costo
 PASOS:
1. Preparación de la muestra
2. Electroforesis
3. Transferencia de una
membrana
4. Inmunotinción
5. Detección de las bandas
 1. Preparación de
la muestra

• Obtener una muestra que

contenga la proteína de interés
• Realizar una lisis
• Se utilizan detergentes
 2. ELECTROFORESIS
• Separación electroforética más
utilizada es la de poliacrilamida
con duodecilsulfato de sodio
(SDS-PAGE)
• El tampón utilizado,
contiene Tris, Glicina y SDS.
• Controles utilizados:
marcadores de peso
molecular, controles
positivos, negativos y de
carga.
 3. TRANSFERENCIA
DE UNA MEMBRANA
• Los geles son delicados y frágiles
• las proteínas ya separadas son
transferidas a una membrana de
nitrocelulosa que las une con firmeza
4. INMUNOTINCIÓN

• Bloquear el espacio
• Incubar la membrana con un
anticuerpo primario
• Incubar el Ac secundario con el
Ac primario
• cuando el anticuerpo se ha unido,
la membrana debe lavarse para
eliminar anticuerpo residual
 5. DETECCIÓN DE LAS
BANDAS

Se pueden hacer con métodos

directos e indirectos
Existen 3 tipos de detección:
• Quimioluminiscencia
• Florescencia
• Colorimetría
 INMUNOCROMATOGRAFÍA
Experimentos que utilizaban Técnica de inmunodiagnóstico más
Origen sustancias colorantes sobre papel moderna.
secante donde se producían Se asocia al uso de anticuerpos
cambios de colores a medida que
estos migran por el papel.

VENTAJAS
 Simplicidad y rapidez de la prueba.
 No es necesario reactivos ni instrumentación
adicional.
 Ejemplo: los test de embarazo, test de troponina I, test
sobre el VIH, Hepatitis B, Hepatitis C, COVID-19.
 Se presenta en un formato de tira, en el cual la
muestra problema fluye a lo largo de un sustrato
sólido por medio de una acción capilar.
Desventajas
 Muchos factores pueden causar falsos positivos en las
pruebas.
 Necesita de otros test para ser corroborado
 Poco sensible

Principio
 Necesario una fase fija y una fase móvil.
 Fase fija ------- Gralmnt (tira de
nitrocelulosa)
 Fase móvil ------- Solución tamponada

 Involucra la separación de una muestra en una matriz solida y una reacción

inmunoquímica.
 El sistema más usado en la practica clínica son los test rápidos.
 COMPONENTESPRINCIPALES
COMPONENTES PRINCIPALESDE
DELAS
LASTIRAS
TIRASREACTIVAS
REACTIVAS
INMUNOCROMATOGRÁFICAS
INMUNOCROMATOGRÁFICAS
Almohadilla
de Inicio de reacción inmunocromatográfica
aplicación
de la
muestra
Almohadilla
Se encuentran los anticuerpos específicos
de
para la molécula conjugada
conjugación
Membrana
Líneas de test y control
de sustrato

Almohadilla
Proveen de una plataforma para ensamblar
absorbente
los demás componentes
ENSAYO SANDWICH
1° Anticuerpo conjugado es depositado en la
almohadilla de conjugación.

2° La muestra llega a la línea de test, la cual

también contiene anticuerpos contra la
molécula de interés
• Aquí los anticuerpos fijos a la membran del
sustrato captura la molécula de interés.

3° La línea de control, tiene como objetivo

validar el test, es por ello que posee
anticuerpos contra la región Fc de la clase de
Ig que se encuentra en la almohadilla de
conjugación que se unen a los anticuerpos
conjugados al colorante que no se unieron a la
molécula de interés.
NSAYO COMPETITIVO
Misma metodología que el ensayo
sándwich

DIFERENCIA
 Línea test ya posee la molécula de interés
anclada a la membrana del sustrato
 Se denomina competitivo porque la
molécula de interés anclada al test
“compite” con la molécula de interés de la
muestra.
 PROCEDIMIENTO
1. Adición de la muestra en el dispositivo con una
pipeta, añadir en la ventana n°1
*La pipeta debe colocarse verticalmente y a 1
cm de la membrana

2. Esperar que la muestra sea absorbida totalmente

por la membrana

3. Adición del tampón de cromatografía con un

gotero en la ventana n°1

4. Lectura de resultados (15 min. Después de

depositar el tampón)
*El frente cromatográfico avanza en dirección a la
ventana n°3
 RESULTADO POSITIVO: Aparece líneas purpura en las
ventanas n°2 y n°3
 RESULTADO NEGATIVO: Solo aparece una línea
purpura en la ventana n°3
 PRUEBA NO VALIDA: Si no aparece línea en la ventana
n°3 el ensayo no puede ser considerado valido
1. Antígeno-anticuerpo, I. (2004). - Guia De Tecnicas Inmunologicas 2004 -. 1–34.
https://www.fmed.uba.ar/sites/default/files/2020-01/GUIA DE TECNICAS INMUNOLOGICAS 2020.pdf
2. Cañarte J., Anzules J., Uscocovich A., Bravo M., Zambrano S. & Bello V. . (2018). Importancia de la inmunología como ciencia.
Revista electrónica Ciencia Digital 2(2), 28-49. Recuperado desde:
https://cienciadigital.org/revistacienciadigital2/index.php/CienciaDigital/article/view/135/120
3. Palomo González, I., Ferreira Vigouroux, A., Sepúlveda Carvajal, C., Rosemblatt Silber, M., & Vergara Castillo, U. (2002).
Fundamentos de Inmunología Básica y Clínica. In Universidad de Talca.
4. Ventajas y desventajas de Western Blot - Ciencia de Hoy. (n.d.). Retrieved October 3, 2021, from
https://cienciadehoy.com/ventajas-y-desventajas-de-western-blot/
5. Antígeno-anticuerpo, I. (2004). - Guia De Tecnicas Inmunologicas 2004 -. 1–34.
https://www.fmed.uba.ar/sites/default/files/2020-01/GUIA DE TECNICAS INMUNOLOGICAS 2020.pdf
6. Carlos, T. (n.d.). Introduccion a Western Blot. Retrieved October 4, 2021, from https://www.e-
allscience.com/blogs/articulos/introduccion-a-western-blot
7. Lomonte Vigliotti, B. (2007). Manual de métodos inmunológicos.
https://www.kerwa.ucr.ac.cr/bitstream/handle/10669/9244/2007_Manual_Metodos_Inmunologicos_completo_web.pdf?sequ
ence=1&isAllowed=y
8. Contreras, F., Morales, A., Medina, E., & Espinosa, S. (mayo de 2014). Diagnostico oportuna de la inmunodeficiencia combinada
grave (SCID) a través del tamiz neonatal. https://www.medigraphic.com/alergia/al-2014/al142d.pdf
9. Valero, Neredia et al. Comparación entre los métodos de inmunocromatográfica e inmunoensayo enzimático en el diagnóstico
del dengue.Kasmera online.2006. vol.34, n.1, pp.53-60. Disponible en:
http://ve.scielo.org/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0075-52222006000100007&ing=es&nrm=iso.
10. Boguen, R. (Ed.). (2020). Test rápidos inmunológicos. En guía de laboratorio 2020 Inmunología Clínica (pp.9-12). Temuco, Chile:
Rodrigo Boguen.
11. Creative Diagnostic. (s.f.). Guía de inmunocromatografia. Recuperado de
https://www.creative.diagnostics.com/Immunochromatography-guide.htm