TINCIONES HISTOQUÍMICAS
HÍGADO
TRICRÓMICO DE MASSON
La técnica de tinción produce tres colores:
La técnica histoquímica del Tricrómico Núcleos y otras estructuras basófilas se tiñen de azul
de Masson diferencia mediante tres El colágeno se tiñe de verde o azul
colorantes distintos, tres tipos de El citoplasma, el músculo, y la queratina se tiñen de rojo
estructuras, como son los núcleos, los brillante.
citoplasmas y tejido conjuntivo.
Ésta técnica se aplica en muestras de Fig. Cirrosis con
tejido fijadas en formol tamponado al 10 alteración estructural,
% resultado de la fibrosis
y regeneración
hepatocelular nodular
(tinción Tricrómica de
Esta técnica se llama de tejido conectivo Masson, )
porque se usa para demostrar elementos
de tejido de soporte, principalmente de
colágeno.
TRICRÓMICO DE MASSON
Uno de los principales objetivos de la biopsia hepática
es determinar la presencia y severidad de la fibrosis.
Coloraciones para tejido conectivo son las más
utilizadas, el Tricrómico de Masson.
Fig. Colágeno de soporte normal del
espacio porta y de las estructuras de
Colorea de azul el colágeno de tipo I y el retículo
colorea de negro el colágeno de tipo III. la triada portal.
A: rama de la arteria hepática
V: rama de la vena porta
DB: rama del ducto biliar
GOMORI-GROCOTT (METENAMINA DE PLATA)
Permite identificar hongos
Una biopsia de hígado teñida con la tinción de plata
metenamina de Grocott, que demuestra Histoplasma (bolas
redondas negras) en un granuloma.
Fig. Coloración de gomory,
La reacción tintorial está basada en que, en presencia de ácido demuestra microorganismos
peryódico, los polisacáridos de la pared celular de los hongos, éstos, a micóticos en la pared de una
su vez, reducen el complejo nitrato-plata metanamina (o metenamina)
produciendo una coloración de café a negra. vena porta.
GOMORI-GROCOTT (METENAMINA DE PLATA)
Imagen 1: Salmón del Atlántico (Salmo salar),
Imagen 2: Salmón del Atlántico (Salmo salar),
Hígado (Grocott, 200 X). Detalle de un
hígado (Grocott, 400 X). Detalle de estructuras
granuloma, en cuyo interior se observan
fúngicas, hifas septadas, de color negro.
estructuras fúngicas, hifas de color negro.
HEMATOXILINA-EOSINA
• La coloración de rutina
• La H-E es la preanalítica de la Histotecnología.
• Tinción basada en dos etapas, la primera una
tinción nuclear por un colorante básico
(hematoxilina) y la segunda, una tinción
citoplasmática por un colorante ácido (eosina).
• El método supone la aplicación de la tinción de
hematoxilina, que por ser catiónica o básica, tiñe
estructuras ácidas (basófilas) en tonos azul y
púrpura, como por ejemplo los núcleos celulares;
y el uso de eosina que tiñe componentes básicos
(acidófilos) en tonos de color rosa, gracias a su
naturaleza aniónica o ácida, como el citoplasma. Fig. Lobulillo hepático. Hematoxilina-
eosina. VC: vena central, EP: espacio porta-
La flecha señala la dirección del flujo
sanguíneo.
La H-E es la preanalítica de la Histotecnología.
TINCIÓN DE VAN GIESON
E s u n a ti n c i ó n d o n d e s e c o m b i n a l a ti n c i ó n
n u c l e a r m e d i a nte l a h e m atox i l i n a fé r r i c a d e
W E I G E RT co n l a m ezc l a á c i d o p í c r i c o -
f u c s i n a á c i d a , l a c u a l p e r m i te d i fe re n c i a r
c ro m áti c a m e nte l a s fi b ra s c o l á ge n a s d e l
te j i d o co n j u nti vo .
Resultados
Colágeno: rojo rosado.
Músculo: amarillo anaranjado.
Citoplasma: amarillo anaranjado.
Núcleos: negro azulado.
Fibras colágenas de la túnica adventicia (rojo).
Tinción Van Gieson.
TINCIÓN DE PAS (PERIODIC ACID-
SCHIFF)
FUNDAMENTO
La reacción de la técnica de PAS
Consiste en oxidar los tejidos mediante el ácido
peryódico para incrementar el número de
grupos carbonilos (aldehídos o cetonas)
presentes en ellos. Posteriormente, se trata la
muestra con el reactivo de Schiff que reacciona
Es positiva para glucógeno, mucoproteínas
con dos grupos aldehídicos contiguos dando neutras y membrana basal de los conductos
lugar a una coloración rojo-púrpura biliares.
característica.
TINCIÓN DE PAS (PERIODIC ACID-SCHIFF)
RESULTADOS DE LA TINCIÓN
PAS
• Polisacáridos simples
(glucógeno),
mucopolisacáridos neutros,
mucoproteínas, membrana
basal, glucolípidos ⇒ rojo a
púrpura.
• Núcleos ⇒ azul
TINCIÓN DE ALCIÁN
Este método de tinción se emplea para
detectar polisacáridos en tejidos, tanto
glucógeno como mucopolisacáridos.
También es una buena tinción para
membranas basales y cartílago.
Resultados
• Glúcidos: rosa intenso a fucsia Reacción negativa para mucopolisacáridos
ácidos en células hepáticas.
• Mucopolisacáridos ácidos: azul
TINCIÓN DE PERLS O AZUL DE PRUSIA
FUNDAMENTO
El hierro depositado se libera por acción del ácido clorhídrico y reacciona con
ferrocianuro potásico para formar ferrocianuro férrico. Esta técnica pone en evidencia la
presencia de hemosiderina y complejos insolubles de Fe por la formación de un
precipitado coloreado (azul de Prusia).
PROCEDIMIENTO
A) fijar los extendidos con metanol, etanol absoluto o vapores de formol durante 10-15 min.
B) lavar con agua por inmersión de 2 a 3 veces.
C) colocar la muestra en un recipiente con una mezcla de partes iguales de ferrocianuro de k al 2% y HCl exento
de fe al 2%.
D) dejar 1 hora a temperatura ambiente.
E) lavar con agua destilada.
F) contracolorear con la solución de safranina de 30 a 45 segundos.
G) observar al microscopio los precipitados de azul de prusia.
RESULTADOS
HEMOSIDERINA EN HÍGADO
Coloración con Azul de Prusia,
utilizada para la detección de
presencia de hierro y se
observa grandes cantidades
de hemosiderina presente en
hepatocitos y células de
Kupffer teñidas de color azul a
manera de pequeños grumos.
El exceso de hierro puede generar afecciones
potencialmente mortales, como enfermedad
hepática, problemas cardíacos y diabetes.
TÉCNICA DE SUDAN
FUNDAMENTO
La técnica del sudán III es un método utilizado generalmente para demostrar la presencia de grasas
mediante tinción de triglicéridos, aunque también tiñe otros lípidos. Los colorantes para grasas son más
solubles en las propias grasas que en el medio en el que van disueltos. Así, al bañar la grasa con la solución
del colorante, éste tiende a disolverse en la grasa que se va cargando del colorante. Por regla general estos
colorantes siempre van en solución alcohólica o bien en una mezcla de alcohol/acetona o alcohol/agua.
PROCEDIMIENTO
1.Desparafinar e hidratar.
2.Lavar en agua destilada.
3.Añadir sudán III + 40 gotas de rojo escarlata, de 1 a 24 horas.
4.Lavar con agua corriente.
5.Añadir hematoxilina o carmín (para el contraste), 5-10 minutos.
6.Lavar en agua corriente, 5 minutos.
7.Montar.
RESULTADOS
Las técnicas para lípidos son:
– Sudán III y IV: tiñe el lípido de
rojo intenso a naranja rojizo.
– Sudán negro: tiñe núcleos y
citoplasma de rojo, lípidos y
mielina de negro.
Tinción con
– Azul de Nilo (método de Lillie): Sudán negro
tiñe grasas neutras de rosa a rojo y
ácidos grados de azul oscuro.
La esteatosis puede causar cirrosis o cáncer de
hígado
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