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Proteinas Alfalfa

Este documento describe métodos para separar y fraccionar las proteínas de las hojas de alfalfa. Las hojas de alfalfa contienen aproximadamente un 27% de proteínas pero carecen de algunos aminoácidos esenciales. El documento detalla procedimientos de precipitación térmica e isoeléctrica para separar las proteínas de las hojas de alfalfa en diferentes fracciones, así como métodos como el ácido bicinconínico y el ensayo de Bradford para cuantificar las proteínas separadas.

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Luzesita Arteaga
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Proteinas Alfalfa

Este documento describe métodos para separar y fraccionar las proteínas de las hojas de alfalfa. Las hojas de alfalfa contienen aproximadamente un 27% de proteínas pero carecen de algunos aminoácidos esenciales. El documento detalla procedimientos de precipitación térmica e isoeléctrica para separar las proteínas de las hojas de alfalfa en diferentes fracciones, así como métodos como el ácido bicinconínico y el ensayo de Bradford para cuantificar las proteínas separadas.

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PROTEINAS

SEPARACION Y FRACCIONAMIENTO DE
PROTEINAS DE HOJAS DE ALFA-ALFA
PRECIPITACION TERMICA Y
PRECIPITACION ISOELECTRICA
Las hojas de Alfa-Alfa:
• contienen aproximadamente un 27% de proteínas.
• son generalmente inferiores en cuanto al valor biológico.
• carecen de ciertos aminoácidos esenciales. (Lisina y
Metionina),
• Sin embargo pueden resultar adecuadas para la alimentación.
Aplicamos procedimientos mecánicos de ruptura de células
vegetales para liberar el contenido proteico y luego aplicar métodos
de precipitación por acción del calor o bien acudir a la precipitación
a pH isoeléctrico.
PARTE EXPERIMENTAL

MATERIALES Y REACTIVOS
• Hojas de Alfa-Alfa (tiernas)
• Agua destilada
• Termómetro
• Centrifugadora
• Acido Acético al 10%
• Potenciómetro
PROCEDIMIENTO

Obtención del Jugo Verde:


• Pesar 100 g. de hojas de alfa-alfa fresca
• Añadir 500 ml de agua destilada
• Licuar evite la formación de espuma
• Filtrar en gasa
• El jugo concentrado debe ser refrigerado
Fraccionamiento Térmico

Precipitación Térmica
• Calentar el jugo concentrado a 49° C por 15 min.
• Se obtendrá la fracción de proteínas verdes y el sobrenadante.
• El sobrenadante debe ser calentado a 65° C
• Se obtendrá la fracción de Proteínas “Blancas”
Precipitación Isoeléctrica
• Eliminación de la fracción “verde” a 49° C.
• Decantar el sobrenadante exento de proteínas.
• Determinar el pH Isoeléctrico con ácido acético al 10%
• Precipitar a pH 4.9
• Dejar en reposo y centrifugar a 3000 rpm
• Determinar el porcentaje de la fracción proteica.
METODOS

1. Acido Bicinconinico (BCA)


• formación de complejos Cu-BCA que da lugar a una intensa coloración púrpura
2. Absorcion ultrvioleta
• absorción ultravioleta este método mediante la medición de la absorción característica que
presenta el triptófano y la tirosina estima la cantidad de proteínas presente en la muestra
3. Ensayo de Bradford
• Se caracteriza por ser un método rápido sencillo y compatible con los agentes reductores
utilizados para estabilizar las proteínas en solución.
• la tinción azul Coomasie se une a una proteína
•  La tinción en solución es de color rojo y al unirse a los aminoácidos básicos de una proteína
se vuelve de color azul.
•  la medición de la absorbancia se compara con los valores de una curva estándar para
determinar la concentración de la proteína de la muestra
•
4. Ensayo de lowry
• Es un ensayo muy sensible y preciso.
• Dan lugar a un color azul verdoso. 
• la medición de la observancia se compara con los valores de una curva
estándar para determinar la concentración de proteína de la muestra.
5. Ensayo CBQCA (3-(4-Carboxibenzoil)quinolina-2-Carboxialdehido)
• se trata de un agente fluoresceínica de alta sensibilidad que se utiliza para
la detección de aminas primarias en las proteínas
• La intensidad de la fluorescencia emitida será directamente proporcional a
la concentración de proteínas presentes en la muestra.

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