COPROCULTIV
Integrantes:
Gilda Mabeli Videz Romero
Karen Gissel Coria Carballo
Microbiota habitual del tracto digestivo
• Alberga un gran número
de bacterias.
• La microbiota normal que
cumple un rol en el
metabolismo intestinal.
• Distribución heterogénea.
Tabla 1. Microbiota habitual del tracto digestivo
LOCALIZACIÓN MICROORGANISMOS COLONIZANTES
Anaerobios (108 – 1010 ufc/ml))
Estreptococos del grupo viridans
Mucosa orofaríngea Estafilococos
Bacilos gran negativos (en pacientes
hospitalizados)
Estómago Lactobacilos y Candida spp. ≤ 103 ufc/ml
Intestino delgado (duodeno) Lactobacilos y estreptococos
Igual a intestino grueso, pero con menor
Intestino delgado (íleon) concentración de bacterias (107 – 108 ufc/ml)
Anaerobios: 1010 – 1011 ufc/g
Intestino grueso Enterobacterias: 107 – 108 ufc/g
Enterococos: 105 – 106 ufc/g
Microbiota habitual del tracto digestivo
• Microbiota habitual compite con los microorganismos patógenos
por nutrientes y receptores.
• Los patógenos son
reconocidos como
agentes etiológicos
de diarrea.
• Las causas también
pueden ser tóxicas,
metabólicas y
dietéticas.
entes bacterianos de diarrea en el hombre
Salmonella spp
Escherichia coli Shigella spp.
Enterohemorrágica Campylobacter jejuni
Enteropatógena Campylobacter coli
Enteroinvasica Aeromonas hydrophila
Enteroagregativa Aeromonas sobria
Enterotoxigénica Aeromonas caviae
Enteroadherente Vibrio spp
Plesiomonas shigelloides
entes bacterianos de diarrea en el hombre
Especialmente en climas Diarrea asociada a
fríos: antibióticos:
Yersinia spp. Clostridium difficile
Pueden producir diarrea
como manifestación Intoxicación
secundaria de una alimentaria por
infección de transmisión toxinas
sexual: preformadas:
Neisseria gonorrhoeae Clostridium spp.
Tréponema pallidum Staphylococcus
Chlamydia trachomatis aureus
Bacillus cereus
Agentes virales, micóticos y parasitarios
de diarrea en el hombre
AGENTES VIRALES AGENTES AGENTES
Rotavirus MICÓTICOS PARASITARIOS
Agente de Norwalk Candida spp. Cryptosporidium
Norovirus Histoplasma Cyclospora
Adenovirus serotipos capsulatum cayetanensis
40 y 41 Entamoeba histolytica
Pararrotavirus Giardia lamblia
Calicivirus Isospora belli
Citomegalovirus Balantidium coli
Herpesvirus Dientamoeba fragilis
Microsporidium
Diarrea
● La diarrea es el aumento del número y volumen de deposiciones,
acompañado con la disminución de la consistencia de material fecal.
● Al efectuar la búsqueda de los agentes causantes de diarrea, se puede
llegar a concretar hasta el 80% de los diagnósticos.
Coprocultivo
● Es un examen de laboratorio para encontrar organismos en
las heces, que puedan causar enfermedades y síntomas
gastrointestinales.
● Se realiza cuando el paciente muestra molestias
gastrointestinales y el médico sospecha que la causa es una
infección.
Coprocultivo
● Consiste en tomar una porción de materia fecal recién
emitida, de lo contrario, se realiza un hisopado rectal.
• De forma habitual no se
requiere de la aplicación de COPROCULTIVO
terapéuticas
• No es necesario el
diagnóstico etiológico para el
manejo puntual de cada
paciente.
Coprocultivo
Existen sólo casos particulares en los que se debe tomar una muestra de materia fecal para coprocultivo en
este tipo de diarreas:
DIARREA SEVERA DIARREA CRÓNICA
DIARREAS EN
BROTES EPIDÉMICOS PACIENTES
INMUNODEPRIMIDOS
Coprocultivo
¿Para qué usamos el coprocultivo?
1. Para tener un diagnóstico etiológico de las diarreas.
2. Porque el aislamiento de un patógeno brinda importante información
para el manejo del caso.
3. Porque si aislamos una bacteria enteropatogénica podemos hacer
pruebas de susceptibilidad a los agentes antimicrobianos.
Toma de la
muestra
Transporte de la
muestra
Ingresa al
laboratorio
Parasitología Bacteriología
Medios de MacConkey
Kato Katz Fresco Kit
enriquecimiento sorbitol
SS TCBS
VITEK VITEK
Bioseguridad
● Todas las muestras fecales, en particular las diarreicas frescas, por lo
que deben ser manipuladas con el cuidado requerido para material
infeccioso.
• Las medidas de seguridad
deben incluir área de trabajo
adecuado, uso de guantes,
gafas protectoras,
contenedores donde descartar
apropiadamente el material.
Material necesario
Utilizar un envase de boca ancha, tapa hermética y estéril, si
la muestra es líquida, se recomienda recolectarla en un envase
para recolección de orina.
Obtención de la
muestra
● Si son formadas o pastosas se toma una porción del recipiente donde hayan sido
emitidas y se transfieren al sistema elegido para el envío al laboratorio.
● Se seleccionan zonas donde haya sangre, moco o pus.
● NO son válidas las muestras contaminadas con orina.
● NO debe utilizarse para la recogida papel higiénico, porque suelen tener sales de
bario que inhiben algunas bacterias enteropatógenas.
Volumen mínimo
● Heces formadas o pastosas: al menos 1 ó 2 gr. para virología, añadir de 2 a 4 gr.
más.
● Muestras del tamaño de una nuez son muy adecuadas pues permiten realizar la
mayoría de las investigaciones posibles.
● Heces líquidas: entre 5 y 10 ml.
● Enviar la muestra en un recipiente estéril si se va a procesar en el plazo de 1 ó
2 horas después de su emisión, caso contrario se remite en un sistema de
Transporte
transporte para bacterias.
● Se mantiene en refrigeración hasta el procesamiento. El frío puede afectar la
viabilidad de Shigella spp.
● Para el estudio de toxinas de C. difficile, la muestra se puede mantener hasta
48 horas en refrigeración, congelada a -20° C se puede mantener
indefinidamente.
● El resultado demora usualmente 3 o 4 días.
Observaciones • Las muestras para coprocultivo, deberán tomarse
antes de la administración de antimicrobianos o
agentes antidiarréicos.
• Indicar siempre el juicio diagnóstico de presunción y
si el paciente es menor de un año.
• Solicitar las investigaciones especiales
explícitamente (C. difficile, C. perfringens, S. aureus,
etc.).
• Si con la primera muestra no se detecta la
presencia de enteropatógenos, es necesario enviar
en los días siguientes, dos tomas adicionales.
● Heces emitidas anteriores a dos horas y que no hayan sido refrigeradas.
● Las tres tomas realizadas el mismo día.
Muestras inadecuadas
Hisopados rectales
En general debe desaconsejarse su uso, aunque hay que recurrir a él si no se puede disponer de heces, como en
neonatos o adultos debilitados.
Tórula de algodón con medio de transporte Cary
MATERIAL
Blair
- Introducir la tórula por el esfínter anal
alrededor de 3 cm, rotar suavemente y retirar.
TÉCNICA
- Introducir la tórula inmediatamente en el medio
de transporte Cary Blair
- Transporte a temperatura ambiente hasta 2
TRANSPORTE horas
- Conservación a 4° C hasta 48 horas
No enviar muestra en medio de transporte Stuart
OBSERVACIONES
o Amies
Datos clínicos y
epidemiológicos del
paciente
Medios de cultivo
para el aislamiento
de bacterias
patógenas
¿Para que se cultivan las heces?
¿Cuándo se deben cultivar las heces?
Heces formadas (SSF 0,85% estéril)
Siembra
Muestra fecal
Inocular directamente sobre el
medio de aislamiento primario
(AMK, SS, XLD, SB, EH)
Inocular en un caldo de enriquecimiento
(caldo de selenito, caldo para GN,
caldo de tetrationato) 6-8h 37°C en
aerobiosis
Heces liquidas (mucus, sangre y
pus)
Agar MacConkey
Del caldo realizar una resiembra en AMK, incubar
18-24h, a 37°C en aerobiosis
Diferenciacion entre fermentadores de lactosa y no
fermentadores.
Medios
selectivos
Sembrar estriando directamente la superficie del
medio de cultivo. La incubación es a 35-37°C
durante 18 a 24h Agar SS (salmonella-
Colonias de color rosa, son fermentadoras de lactosa (+) : E.coli
Colonias incoloras, no fermentadoras de lactosa (-):
shigella)
- Con centro negro: Salmonella, Proteus
- Sin centro negro: Shigella
Agar SB (sulfito bismuto)
Sembrar por estria el material procedente de
enriquecimiento en este caso con caldo tetrationato.
Incubar a 35° C de 24 a 48H, en un ambiente aerobio
Se puede identificar salmonella principalmente, tambien
bacterias coliformes (escherichia coli), proteus y otras.
Agar EH (entérico de
hektoen) Su incubación es en aerobiosis, a 35-37°C durante 18 a 24 horas
Colonias de color salmón, fermentadoras de lactosa (+) : E. coli
Colonias azul - verdosa, no fermentadoras de lactosa (-):
- Con centro negro: Salmonella, Proteus
- Sin centro negro: Shigella
Agar XLD (xilosa, lisina, desoxicalato)
Se incuban en placas protegidas de la luz, a
35°C durante 18-24 horas
Colonias de color amarillo fermentadoras de
lactosa (+) : E.coli
Colonias de color amarillo con centro negro:
Proteus
Colonias rojas, no fermentadoras de lactosa (-):
- Con centro negro: Salmonella
- Sin centro negro: Shigella
Colonias de color rojo,
fermentadoras de manitol:
Yersinia
Agar
yersinia
Incubación en aerobiosis a 33-37°C durante 18- 24 horas
Agar EMB (con Microorganismos fermentadores de lactosa y / o sacarosa:
eosina y azul de colonias de color negro azulado o amarronado. Pueden tener
centro oscuro y brillo metálico.
metileno) Microorganismos no fermentadores de lactosa y sacarosa:
colonias del color del medio, incoloras.
Agar TCBS (tiosulfato
En aerobiosis, a 33-37°C durante 18-24 horas.
Colonias fermentadoras de sacarosa.- colonias amarillas citrato bilis sacarosa)
Colonias no fermentadoras de sacarosa.- colonias de
color del medio con centro verde
V. cholerae V. parahemolyticus
Identificación de los principales agentes patógenos
• Metodos basados en tincion diferencial
La tinción de gram:
Clasifica las
bacterias en gram
negativas y gram
positivas
• Metodos basados en pruebas bioquimicas
Son una variedad de pruebas utilizadas para
diferenciar bacterias.
• Agar TSI
• Citrato
• Ureasa
• SIM
• MIO
• Voges-proskauer
• Rojo de metilo
• LIA
Agar TSI
Se identifican los microorganismos que son
capaces de fermentar glucosa, lactosa y /o
sacarosa, con produccion o no de gases y de
acido sulfhídrico
Como indicador de pH tiene ROJO DE FENOL
• Fermentación de glucosa.- K/A
• Fermentación de glucosa, lactosa y/o sacarosa.-
A/A
• No fermentación de carbohidratos.- K/K
• Produccion de gas.- ruptura del medio, como
burbujas
• Produccion de h2s.- ennegrecimiento del medio
Citrato
La prueba positiva esta representada por la
produccion de color azul oscuro en el termino de 24 a
48 horas, que indica que el microorganismo en prueba
ha sido capaz de utilizar el citrato contenido en el
medio, con la formacion de productos alcalinos
Microorganismo Microorganismos
positivos negativos
• Salmonella • Escherichia coli
• Enterobacter • Yersinia
• Klebsiella enterocolitica
• Pseudomonas cepacia • Shigella
• Citrobacter • Proteus morganii
Ureasa
Si el mecanismo es productor, desdobla
la urea produciendo amoniaco, Positivos: Negativos:
consecuentemente produce alcalinidad • Klebsiella • Escherichia coli
que se manifiesta porque el medio toma • Proteus • providencia
un color fucsia
SIM (sulfuro, indol, movilidad)
Es un medio semisólido transparente que pone en
evidencia la movilidad, la produccion de
triptofanasa, y de S2H
• El triptofano.- la enzima triptofanasa lo desdobla
y produce indol, se pone de color rojo
• Citrato de hierro y amonio.- los
microorganismos productores de acido
sulfhídrico ennegrecen el medio
• Si los microrganismos son moviles, se produce
un enturbiamiento del medio
MIO (movilidad, indol, ornitina)
Para la identificación de la movilidad, la • Produccion de indol.- el triptofano
produccion de ornitina descarboxilasa e indol es una AA que puede ser oxidado por
• Descarboxilación de ornitina.- mide la ciertas bacterias para formar tres
capacidad de descarboxilar un aminoacido metabolitos principales: indol,
para formar una amina, con la consiguiente escatol e indolacético
alcalinidad
Voges-proskauer
En una prueba positiva se Microorganismos positivos:
desarrolla un color rojo, • Klebsiella pneumoniae
lo que indica la presencia
de diacetilo, un producto
• Yersinia enterocolitica
de oxidación de la
acetoina Microorganismos negativos
• Escherichia coli
Rojo de metilo
El rojo de metilo es un
indicador de pH con un rango
entre 6 (amarillo) y 4,4 (rojo)
Es una prueba cuantitativa de
la produccion de acido, que
requiere que microorganismos
positivos produzcan acidos
fuertes de la glucosa
LIA (agar lisina hierro)
Mide la capacidad enzimática de un organismo
para descarboxilar un AA (lisina y arginina)
para formar una amina con la consiguiente
alcalinidad
Descarboxilación
Positivo.- pico violeta/ fondo violeta
Negativo.-pico violeta/ fondo amarillo
Desaminación
Positivo.- pico rojizo/ fondo amarillo
Produccion de H2S: ennegrecimiento del medio
Produccion de gas: burbujas o levantamiento
del medio de cultivo
Antibiograma
En caso de encontrar algún agente patógeno es necesario realizar un
antibiograma para un tratamiento adecuado y óptimo.
Antibiograma
Los agentes a probar e informar de rutina con enterobacterias aisladas de coprocultivo son:
• Ampicilina • Ciprofloxacina
• Ampicilina-sulbactam, Podrá ensayarse,
• Trimetropim – pero se informará
Sulfametoxazol solo en adultos,
• Noitrofuantína niños > 12 años, o
(furazolidona). cepas
multirresistentes
Antibiograma
Para Campylobacter se ensayan:
• ampicilina, • gentamicina,
• eritromicina, • nitrofuranos,
• ácido nalidíxico, • tetraciclina,
• cefalotina, • cefotaxima,
• cloranfenicol • norfloxacina o
ciprofloxacina
Algunos de estos antibióticos pueden orientar a la identificación de especies.
Antibiograma
FIG. Prueba de sensibilidad para Vibrio sp. Izquierda, resistente. Derecha susceptible
Informe
● Examen directo: Se informa si no se ven o se ven escasos o abundantes leucocitos, hematíes, parásitos o
levaduras.
Informe
Cultivo negativo:
● Cuando el resultado es negativo, se debe indicar: "se aísla microbiota mixta o polimicrobiana habitual" y se debe decir cuáles fueron los microorganismos
estudiados que se descartaron.
Por ejemplo: "no se aisló Salmonella spp., ni
Shigella spp., ni Aeromonas spp., ni EHEC, ni
Campylobacter spp."
Informe
● Si crece únicamente Escherichia coli, previo descarte de EHEC, se informará que se aisla E. coli y que se guarda la
cepa por si se necesitan estudios posteriores.
● En lactantes o menores de un año, se puede investigar a pedido médico, si una cepa de Escherichia coli es EPEC,
informándose de todas maneras sin antibiograma.
Informe
● Todo aislamiento de Shigella spp., Aeromonas spp. y Campylobacter spp. se debe informar con
antibiograma.
Detección de antígenos
● Las técnicas de detección de antígeno se emplean habitualmente para la detección de rotavirus, adenovirus
serotipos 40 y 41, norovirus. Las más utilizadas son la aglutinación facilitada mediante partículas de látex y el
enzimoinmunoanálisis.
Detección de antígenos
● Las pruebas de detección de antígeno, por ser rápidas y prácticas, se utilizan para la detección de las toxinas (A y
A+B) de C. difficile directamente de las heces, constituyendo la técnica de elección por el elevado número de
portadores asintomáticos del microorganismo.
Detección de antígenos
● Estas técnicas también se utilizan para detectar las verotoxinas de E. coli enterohemorrágica (ELISA, inmunocromatografía y otras). Las pruebas se realizan a partir de
muestras de heces sin medio de transporte conservadas a -20° C.
Técnicas de amplificación
● En la actualidad las técnicas de amplificación son poco utilizadas para el diagnóstico de las
enteritis. La detección de los virus enteropatógenos es mucho más sensible por técnicas genéticas
que por detección de antígeno.
Técnicas de amplificación
● La identificación de cepas enteropatógenas que pertenecen a especies en las que la mayoría
de las cepas son comensales — Escherichia coli, Yersinia enterocolitica, Vibrio cholerae y
Clostridium difficile, hasta ahora se hacía determinando el serotipo, pero en la actualidad se
realiza detectando genes específicos de patogenicidad mediante técnicas de amplificación y
sondas.
i
Fig. PCR de VT1 y VT2
La reacción en cadena de la polimerasa permite
determinar la presencia de los genes de las verotoxinas
en Escherichia coli.
Enlaces de interés
● https://www.youtube.com/watch?v=VEGN60eU6zU&list=PLNnfJJ6QivdNL6eI9Rt49rYglM0uDNA0C&index=13
● https://www.youtube.com/watch?v=10DtFdavHx0&list=PLNnfJJ6QivdNL6eI9Rt49rYglM0uDNA0C&index=14
● https://www.youtube.com/watch?v=rWHJMIcLGnY&list=PLNnfJJ6QivdNL6eI9Rt49rYglM0uDNA0C&index=15
● https://www.youtube.com/watch?v=d4H8nH8wXc8&list=PLNnfJJ6QivdNL6eI9Rt49rYglM0uDNA0C&index=16
● https://www.youtube.com/watch?v=WTbi1XDei6I&list=PLNnfJJ6QivdNL6eI9Rt49rYglM0uDNA0C&index=17
● https://www.youtube.com/watch?v=DN_XIspXZGk&list=PLNnfJJ6QivdNL6eI9Rt49rYglM0uDNA0C&index=21
● https://www.youtube.com/watch?v=PDQbBK3w4F0&t=70s
