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ANEXOS

Este documento presenta tres métodos para extraer ADN: 1) Un método que usa yoduro de sodio como agente caotrópico para lisar células y extraer ADN en un solo tubo de centrifugación. 2) Un método que usa gradientes de cloruro de cesio y bromuro de etidio para purificar ADN genómico mediante centrifugación selectiva. 3) Diferentes fuentes celulares como sangre, ADN de espermatozoides, saliva, folículos capilares y tejidos no degradados que pueden ser usados para extra

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ANEXOS

Este documento presenta tres métodos para extraer ADN: 1) Un método que usa yoduro de sodio como agente caotrópico para lisar células y extraer ADN en un solo tubo de centrifugación. 2) Un método que usa gradientes de cloruro de cesio y bromuro de etidio para purificar ADN genómico mediante centrifugación selectiva. 3) Diferentes fuentes celulares como sangre, ADN de espermatozoides, saliva, folículos capilares y tejidos no degradados que pueden ser usados para extra

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ANEXOS

• 1. Método de extracción de ADN con yoduro de sodio como agente caotrópico en un


único tubo: La compañía WAKO pone a disposición de los investigadores y empresas
varios kit de ADN que usan yoduro de sodio como agente caotrópico, que tienen la
ventaja de que la extracción se realiza en un único micro tubo de centrifugado. El yoduro
de sodio además de provocar la lisis celular rompe la capa de hidratación que rodea el
ADN y logra que las cargas negativas de los grupos fosfatos del ADN queden más
expuestas. En estos kits después del tratamiento de la muestra con yoduro de sodio en el
mismo tubo se adicionan detergentes aniónicos como es el caso del N-lauril sarcosinato
de sodio, proteinasa K y/o otros reactivos que permiten separar las proteínas y lípidos
contenidos en las muestras biológicas del ADN.
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• 1. Extracción con gradientes de cloruro de cesio – bromuro de etidio: El ADN
genómico puede ser purificado por centrifugación selectiva a través de la generación de
gradientes de cloruro de cesio. Primeramente se lleva a cabo el lisado celular por
métodos mecánicos o químicos y la mezcla es centrifugada durante varias horas en
presencia de bromuro de etidio. Como hay bromuro de etidio en el medio, se pueden
visualizar las diferentes capas en las que se agrupan los ácidos nucleicos según su
densidad con luz ultravioleta. Se obtienen varias capas que pueden separarse y recuperar
el ADN purificado.
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2. Obtención del  material biológico Lisis celular: es el proceso físico o químico por el cual
se rompe la membrana celular y nuclear. Degradación de proteínas: se rompen las proteínas
que interactúan con el  ARN . Proceso de Separación: procesos físicos (centrífuga) o
 químicos  ( solventes) mediante los cuales se aíslan y separan diferentes componentes
celulares como lípidos, proteínas, ARN , ADN , moléculas pequeñas. Degradación de ADN
por DNAsa I: proceso que rompe específicamente cadenas ADN con el fin de evitar
contaminación de este material. Solubilización del ARN: se diluye el ARN en un volumen
conocido de agua ultra pura. Cuantificación de ARN: proceso mediante el cual se mide la
concentración del material genético mediante un espectrofotómetro.
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3. Existen muchas células como: La sangre, El ADN de la cabeza de los espermatozoides,
la saliva, El folículo capilar de la base del cabello humano contiene material celular rico en
ADN, Cualquier tejido del cuerpo que no se haya degradado es una fuente potencial de
ADN, los huesos, la orina, etc.

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